I. СОДЕРЖАНИЕАвтоматический полипептидный синтезаторКалибровка и подготовка оборудования

Установка и отладка

Установка и наладка оборудования осуществляется профессиональным техническим персоналом для обеспечения правильной работы оборудования.

Проверьте, хорошо ли соединены резервуары для хранения растворителя с газопроводом и исправны ли части прибора.

Включите выключатель питания синтезатора и переключатель сжатого воздуха, чтобы проверить, соответствует ли давление диапазону (например, давление на поверхности AIR более 60 psi и менее 100 psi); Таблическое давление "N2" больше 5 psi и меньше 10 psi).

Калибровка и тестирование

В соответствии с инструкциями изготовителя проводится калибровка и тестирование оборудования, чтобы убедиться, что все системы (например, насосы, клапаны, детекторы и т.д.) работают нормально.

Проверка температуры, штрих - кода, смесительного перемешивания реактора, иглы для отбора жидкости, бутылки для толкания аминокислот; Испытание электромагнитного клапана; Калибровка расхода в бутылках химических реагентов и аминокислот; Калибровка УВ - контроля.

Выберите подходящий реактор

Выбирайте подходящий реактивный контейнер в зависимости от размера синтеза и убедитесь, что материал контейнера не вступает в реакцию с реактором или растворителем.

II. Готовность реагентов и материалов

Приготовьтесь.

Аминокислоты, активированные реагенты, растворители и т. Д. Готовятся к синтезу, чтобы убедиться, что все материалы свежие и чистые, чтобы избежать введения примесей.

Согласно схеме синтеза, взвешивание производится в требуемых пропорциях вещества для обеспечения точности.

Реакторы последовательно помещаются в резервуары с соответствующей маркировкой.

Готовьте смолу.

Добавьте смолу в твердофазный синтезатор, растворите смолу соответствующим растворителем (например, DCM) и высушите ее.

Используйте растворители, такие как DMF, чтобы вымыть смолу, чтобы удалить примеси и высушить резерв после стирки.

III. Синтетические операции

Установить условия реакции

Установите подходящие условия реакции в зависимости от последовательности и длины требуемых полипептидов, включая температуру, давление, время и так далее.

Снятие защиты

Удаление защитной группы предыдущей аминокислоты позволяет ей реагировать со следующей аминокислотой.

Например, для обеззараживания используется 40% раствора ТФУ / ДХМ, а затем промывается дихлорметаном, метанолом и т.д.

Связь

Новые аминокислоты соединяются с обезопасенными аминокислотами, образуя пептидные связи.

Первая аминокислота (обычно начинается с конца С) растворяется в определенном объеме DMF и активируется с добавлением конденсаторов (например, DCC, HBTU и т.д.).

Активированный раствор аминокислоты вводится в твердофазный синтезатор, который дополняет DMF до соответствующей концентрации реакции и перемешивается для конденсации.

Мойка

Очищаем нефункционирующие вещества и побочные продукты, обеспечивая чистоту реакции.

После каждого этапа синтеза необходимо очищать побочные продукты реакции и непродуктивное сырье путем промывки, чтобы уменьшить накопление примесей.

Повторить шаги

Повторяйте шаги снятия защиты и сцепления до тех пор, пока полипептидная цепь не достигнет заданной длины.

IV. Резка и очистка продуктов

Расщепление смолы

Настройка крекинговых жидкостей (обычно содержащих сильные кислоты, такие как TFA) и их охлаждение в передней морозильной камере.

Пептидная смола добавляется в реактор, добавляется предварительно охлажденный крекинг и смешивается, чтобы разложить полипептиды с смолы.

После крекинга выделяется реактивный раствор, который отфильтровывается, чтобы удалить смолу и промыть растворителем, таким как TFA.

Полипептидная очистка

При комнатной температуре крекинг переносится в вращающийся испаритель и концентрируется до малых объемов.

Полипептиды выделяются с использованием соответствующих осадителей (например, метилтретбутилэфира), а необработанные пептиды получают с помощью центрифугирования, промывки и т.д.

Очищение сырых пептидов с помощью таких методов, как высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC), для удаления примесей и выделения целевых полипептидов.

Концентрация, фильтрация и замораживание

Очищенный полипептидный раствор спиральным паром удаляет органический растворитель и получает концентрированный полипептидный раствор.

Асептическая фильтрация концентрированных полипептидных растворов.

Отфильтрованный полипептидный раствор помещается в сушилку для замораживания и сушки, устанавливая соответствующую процедуру нагрева.

V. Контроль качества и регистрация

Мониторинг реакций

Мониторинг реакционных процессов с использованием соответствующих методов обнаружения (например, ультрафиолетовое обнаружение, масс - спектрометрический анализ и т.д.) гарантирует, что каждый шаг реакции соответствует ожиданиям.

Отчеты и отчеты

Детально регистрируются эксплуатационные параметры и результаты каждого шага, включая использование реагента, время реакции, температуру, давление и т. Д.

Подготовка экспериментальных отчетов, обобщающих ключевые данные и информацию о чистоте продукта в процессе синтеза.