Полностью автоматический иммунопринтер белка (WesternBlotting) - это экспериментальная технология, широко используемая в биомедицинских, клеточных и молекулярных биологических исследованиях, в основном для обнаружения присутствия, экспрессии и модифицированного состояния определенных белков. Эта технология сочетает в себе электрофоретическое разделение и иммунологическое тестирование, используя специфические антитела для идентификации целевых белков.
Основные принципы работы автоматических белковых иммунопринтеров:
Подготовка образцов:
Общий белок извлекается из клеток, тканей или жидкостей организма, и обычно для клеточного крекинга используется буфер крекинга.
Извлеченные белки измеряются с помощью методов определения концентрации белков, таких как BCA или Bradford.
Электрофорез SDS - Page:
В ходе электрофореза белки в образце отделяются по молекулярной массе. Полностью автоматические иммунопринтеры обычно имеют автоматическую функцию электрофореза, которая позволяет эффективно и стабильно работать с электрофорезом SDS - PAGE.
После электрофореза белки мигрируют на гель в зависимости от размера.
Трансферометрия:
Выделенные SDS - PAGE белки переносятся на мембрану полифторэтилена (PVDF) или нитратную целлюлозу. Трансмембранный процесс обычно использует метод электрического переноса, который обеспечивает фиксацию белка на мембране.
Закрытая мембрана:
Пленка после трансмембраны должна использовать закрытую жидкость (обычно 5% обезжиренное молоко или буфер BSA), чтобы закрыть неспецифические места связывания, чтобы предотвратить неспецифическое связывание антител с непромысловыми частями мембраны.
Инкубация антител:
Инкубируйте мембрану с моноантигенами (специфическими антителами к целевому белку). Время и температура инкубации должны регулироваться в соответствии с требованиями антител.
Затем мембрана вылупляется с диантигенами (обычно с ферментативными маркерами антител, ассоциированными с одним анти - анти - анти - анти - ферментом), которые усиливают сигнал и делают последующие тесты более чувствительными.
Обнаружение сигнала:
Наконец, сигналы, связывающие антитела с целевым белком, обнаруживаются с помощью субстративных реакций (например, химической люминесценции или колориметрии), часто с использованием систем обнаружения химической люминесценции.
Автоматизированные системы могут автоматизировать усиление сигнала, экспозицию и захват изображений в зависимости от заданного времени и интенсивности.
Особенности и преимущества автоматических белковых иммунопринтеров:
Эффективность и автоматизация:
Полностью автоматический иммунопринтер белка может выполнять ряд операций от загрузки образца, работы электрофореза, трансмембраны, инкубации антител до результатов тестирования, что значительно повышает эффективность эксперимента и уменьшает ошибки, вызванные ручной работой.
Точный контроль и стабильность:
Автоматизированные системы могут точно контролировать экспериментальные параметры, такие как температура, время, концентрация антител и т. Д. Для обеспечения повторяемости и стабильности каждого шага.
Уменьшение человеческих ошибок:
Автоматизированные приборы уменьшают вмешательство человека в эксперименты и обеспечивают последовательность операций, особенно в экспериментах с высокой пропускной способностью, повышая надежность результатов.
Высокий поток и многовыборочная обработка:
Полностью автоматический иммунопринтер может обрабатывать несколько образцов одновременно и подходит для экспериментов, требующих анализа высокого потока, таких как скрининг лекарств, клиническое тестирование и т. Д.
Многофункциональная интеграция:
Многие современные полностью автоматические иммунопринтеры также включают в себя другие функции, такие как электрофорез, трансмембрана, инкубация антител, обнаружение сигналов и т. Д. Пользователи могут выполнять индивидуальные операции по мере необходимости.
Область применения:
Анализ экспрессии белка:
Используется для количественного анализа уровня экспрессии определенных белков в клетках или тканях, особенно в таких областях, как рак и исследования иммунной системы.
Исследования протеиновой модификации:
Проверьте фосфорилирование, ацетилирование, гликолизацию и другие постпереводные модификации белков и изучите, как эти модификации влияют на функцию белков.
Патологические исследования:
При диагностике заболевания WesternBlotting может обнаруживать специфические белки, связанные с заболеванием, такие как маркеры для выявления вирусных инфекций, таких как ВИЧ и гепатит В.
Разработка и скрининг лекарственных средств:
В фармацевтических исследованиях WesternBlotting часто используется для оценки влияния лекарств на экспрессию конкретных белков.
Фундаментальные научные исследования:
Изучая регуляцию экспрессии генов, клеточные сигнальные пути и т. Д., WesternBlotting является инструментом в исследованиях молекулярной биологии.
Резюме:
Полностью автоматический иммунопринтер белка автоматизирует традиционную технологию WesternBlotting, которая обладает преимуществами высокой эффективности, точности и надежности и широко используется в исследованиях в области биологических наук, медицинской диагностики и фармацевтической промышленности. Автоматизация операций значительно увеличивает поток и повторяемость экспериментов, уменьшает человеческие ошибки и обеспечивает более стабильную экспериментальную платформу для исследователей.