полипептидный крекингПрерывая пептидные связи в полипептидных цепях физическими, химическими или биологическими методами, сложные белки превращаются в анализируемые пептидные сегменты.полипептидный крекингТехнический путь состоит из трех основных систем:

Ферментный метод

Принцип: Используя специфическую режущую способность биоферментов (например, протеазы поджелудочной железы, желудочно - протеазы), пептидные связи на конце карбоксильной базы конкретных аминокислотных остатков (например, лизина, аргинина) точно идентифицируются и разрываются в умеренных условиях (например, при постоянной температуре 37°C).

Преимущество: фрагменты продуктов крекинга имеют одинаковую длину и подходят для анализа полипептидных последовательностей, масс - спектрометрии и других сценариев. Например, протеаза поджелудочной железы может расщеплять сывороточный альбумин крупного рогатого скота в пептидные смеси с теоретическим охватом более 80% в течение 16 часов.

Ограничения: чувствительны к ферментативным условиям (например, pH, температура) и трудно обрабатывать полипептиды, содержащие большое количество проламинов или модифицированных аминокислот.

Химический крекинг

Принцип: разрушение молекулярного уровня при высоких температурах (100°C) путем сильной кислоты (например, соляной кислоты 6M) или сильной щелочи (например, раствора гидроксида натрия), применимой к трудноразлагаемым коллагенам, роговым белкам и т. Д.

Преимущество: высокая эффективность крекинга, обработка сложных образцов.

Ограничения: условия реакции являются интенсивными и могут привести к неспецифическому разрыву или модификации боковых цепочек аминокислот, требующих последующих шагов очистки.

Физический метод крекинга

Принцип: использование лазеров (например, 193 нм квазимолекулярных лазерных импульсов) для создания локальных сверхвысоких температур в наносекундное время, что приводит к нетермодинамическому разрыву пептидных связей.

Преимущество: отсутствие остатков химических реагентов, подходящих для образцов, чувствительных к химическому загрязнению (например, клинически диагностических образцов).

Ограничения: высокая стоимость оборудования, строгие технические требования к эксплуатации.