Ниже приводится всеобъемлющее описание ключевых факторов, влияющих на точность анализатора клеток молочного организма, охватывающего различные измерения, от обработки образцов до характеристик прибора:
I. Сфера сбора и предварительной обработки проб
Представительность выборки
Необходимо строго соблюдать принцип стратифицированного отбора проб, особенно для больших резервуаров для хранения молока или транспортных средств, и образцы следует смешивать на трех верхних, средних и нижних уровнях, чтобы избежать неравномерного распределения соматических клеток из - за разделения жирового слоя. Недостаточное количество однократной выборки (< 50 мл) усиливает случайную ошибку, и рекомендуется взять не менее 100 мл сложных образцов в соответствии со стандартом ISO.
Условия хранения и перевозки
Образцы должны быть охлаждены при температуре 4°C и проверены в течение 6 часов, а чрезмерное хранение может привести к саморастворимому разрыву соматических клеток и высвобождению фрагментов ДНК, мешающих подсчету. При перевозке на большие расстояния следует добавлять безвредные консерванты (например, азид натрия) и избегать сильных потрясений.
гомогенизация
Недостаточно однородные образцы молока подвержены скоплению жировых сфер, которые блокируют микроскопическое поле зрения или блокируют проточные бассейны. Требуется стандартизированная ультразвуковая обработка (20 кГц, 30 секунд) для дисперсии частиц при контролируемой температуре < 40 ° C для предотвращения дегенерации белка.
II. Основные показатели эффективности прибора
Точность оптической системы
Поточная цитология зависит от интенсивности света лазерного рассеяния, чтобы различать типы клеток, а стабильность длины волны лазера (±0,5 нм) и чувствительность фотоумножителя напрямую определяют отношение сигнала к шуму. Ежедневная загрузка должна выполнять проверку пустоты жидкости оболочки, чтобы устранить фоновые шумовые помехи.
Пороговая рациональность
Дверь с двумя параметрами переднего рассеяния (FSC) и бокового рассеяния (SSC) должна быть защищена от зоны сигнала примеси. Например, сообщества активных клеток ограничиваются определенным углом рассеяния, исключая выпадение эпителиальных клеток и микробное загрязнение.
Гидродинамическое управление
Перерезание проточной пулы вызывает дробление хрупких клеток, скорость потока должна контролироваться на уровне 5 - 10 мкл / с; При колебании давления оболочки > 5% необходимо проверить степень старения насосной трубы и герметичность газового пути.
III. Управление реагентами и расходными материалами
Качество красителей
Taiban Blue и другие живые красители должны быть в настоящее время установлены, чтобы избежать сохранения света. Неэффективная краска может вызвать аномальное окрашивание мертвых клеток, вызывая ложное положительное количество. Для каждой новой партии реагентов требуется стандартная клеточная суспензия для определения эффективности окрашивания (> 95%).
Остатки очищающей жидкости
Остаточная промывка внутренней стенки входной иглы (например, гипохлорит натрия) расщепляет мембрану лейкоцитов, что приводит к утечке. До и после каждого испытания необходимо три раза промывать трубопровод деионизированной водой и заменять остаточную жидкость воздухом.
Чистота счетчика
Осадок белка, прикрепленного к внутренней стенке микрокапилляра, адсорбирует клетки и должен еженедельно промываться ферментативным раствором (протеаза поджелудочной железы + EDTA), чтобы предотвратить царапины для захвата клеток.
IV. Экологические и антропогенные факторы
Контроль температуры и влажности
Отклонение температуры в лаборатории от 25°C ±2°C может привести к изменению скорости реакции реагента, а при влажности > 70% RH электронные компоненты могут коротко замыкаться. Термотермостатическая система должна быть оснащена независимым модулем осушения.
Различия в навыках операторов
Неравномерная толщина осколков, покрытых вручную (идеальная толщина 10 - 20 мкм), может привести к эффекту локального накопления, который может быть устранен автоматическим прибором для нанесения покрытий. Обучение должно включать оценку способности клеточной морфологии распознавать.
Частота проверки качества
Ежедневно с использованием стандартной концентрации эмульсионного порошка (500 000 / мл в соматических клетках) проводится тест на коэффициент извлечения, который требует, чтобы измеренные значения находились в пределах установленного значения ± 10%. После ежемесячного обслуживания необходимо восстановить кривую калибровки.