Лабораторный жидкостный хроматографИзмерение калибровки - это многогранный процесс, который включает в себя следующие подробные шаги и меры предосторожности:

I. Условия окружающей среды

Перед проведением метрологической калибровки жидкостного хроматографа необходимо обеспечить соответствие условий окружающей среды следующим требованиям:

Комнатная температура должна поддерживаться на уровне (15 ~ 30 °C), изменение температуры не превышает 3 °C во время калибровки (для детектора дифференциальной преломленности изменение комнатной температуры не превышает 2 °C).

Относительная влажность в помещении должна поддерживаться на уровне (20 - 85%).

В помещении нельзя хранить легковоспламеняющиеся, взрывоопасные и сильно коррозионные предметы.

Нет очевидных механических вибраций и электромагнитных помех и хорошо проветривается.

II. Стандартные вещества и калибровочное оборудование

Следует использовать национальные сертифицированные стандартные вещества и обеспечить, чтобы калибровочное оборудование было измерено и проверено. Обычно используемые стандартные вещества включают:

Стандартное вещество для раствора нафталина - метанола с фиксированным значением 1,00 × 10 ^ - 4 г / мл с неопределенностью расширения менее 4%.

Холестерин метанол раствор стандартное вещество, стандартное значение 200 мкг / мл, степень неопределенности расширения менее 2,0%.

Другие стандартные вещества отбираемые с учетом конкретных потребностей в калибровке.

Калибровочное оборудование может включать в себя детонаторы, емкостные бутылки, термометры и т.д.

III. Шаги калибровки

1. Калибровка инфузионной системы

Устойчивость насоса к давлению: Подключите все части прибора, метанол (или чистая вода) в качестве фазы потока, скорость потока установлена на 0,2 мл / мин. Запустите прибор и держите давление стабильным в течение 10 минут, чтобы проверить, есть ли утечка на стыке каждого трубопровода. Снимите хроматографическую колонну, блокируйте выходной конец насоса, так что давление достигает 90% максимально допустимого значения, держите 5 минут, подтвердите отсутствие утечки.

Ошибка настройки расхода насоса и стабильность потока: по требованию установить скорость потока, запустить прибор и дождаться стабилизации давления, использовать бутылку чистой емкости для сбора фазы потока на выходе из фазы потока, отсчитывать время и взвешивать, рассчитать измеренную скорость потока. Калибровка повторяется 3 раза для обеспечения точности.

Ошибка градиента: Установите градиентную процедуру стирки, используя растворитель A (например, вода) и растворитель B (например, водный раствор, содержащий 0,1% ацетона) для построения и расчета кривой изменения градиента.

2. Ошибка точки установки температуры и коррекция стабильности в цилиндрической коробке

Поместите детектор цифрового термометра в термостат хроматографического столба в том же положении, что и хроматографический столб.

Выберите заданную температуру (например, 35°C и 45°C), чтобы записывать показания после стабилизации температуры и записывать их каждые 10 минут, в общей сложности 7 раз.

Расчет разницы между средним и заданным значениями является ошибкой в определении температуры столбца, а разница между максимумом и минимумом в семи показаниях - стабильностью температуры столбца.

3. Маркировка детектора

В качестве примера можно привести ультрафиолетовый детектор видимого света и детектор диодной решетки, которые соединяют различные части прибора и выбирают подходящую хроматографическую колонну и фазу потока.

Установите соответствующие параметры измерения, такие как длина волны, чувствительность и так далее.

После стабилизации исходного уровня вводится определенный объем стандартного раствора вещества (например, раствор нафталина - метанола 1,0×10 ^ - 4г / мл), непрерывно измеряется и регистрируется время удержания хроматографического пика и площадь пика.

4. Калибровка точности объема входной пробы (если применимо)

Это может быть сделано с помощью стандартных методов калибровки изделий, весов, количественной калибровки кольца или сравнения со стандартным пробоотборником.

Метод калибровки стандартной продукции: многократное введение проб с использованием стандартных растворов продукта в известных концентрациях, регистрация значения пиковой реакции хроматографии и расчет точности объема входящей пробы.

Вес: Расчет фактического объема растворителя путем взвешивания и сопоставление с заданным объемом.

Количественная калибровка кольца: проверка точности объема количественного кольца, оцениваемая путем наблюдения за формой хроматографического пика и значением отклика.

Метод сравнения со стандартным пробоотборником: сравнительный анализ с использованием стандартного пробоотборника для расчета отклонения объема входного образца и его корректировки.

IV. Калибровочные записи и отчеты

Данные и наблюдения должны быть подробно зафиксированы в ходе калибровки.

По завершении калибровки составляется отчет о калибровке, включая дату калибровки, условия окружающей среды, калибровочное оборудование, этапы калибровки, запись данных и результаты анализа.

Отчет о калибровке должен быть рассмотрен и подписан специалистом для подтверждения.

V. ПРИМЕЧАНИЯ

В процессе калибровки должны строго соблюдаться правила эксплуатации и нормы безопасности.

При использовании стандартных веществ необходимо обеспечить их срок годности и надлежащее хранение.

Калибровочное оборудование должно регулярно поддерживаться и проверяться для обеспечения его точности.

Измерение и калибровка лабораторных жидкостно - фазных хроматографов - сложный и сложный процесс, требующий от специалистов строгого соблюдения эксплуатационных правил для обеспечения точности и надежности прибора.