В качестве основного компонента высокоэффективной системы жидкостной хроматографии (HPLC), ее производительность напрямую влияет на точность и повторяемость результатов анализа. После длительного использования поверхность фиксированной фазы постепенно накапливает остатки образца, кристаллы буферной соли или сильно удерживаемые вещества, что приводит к расширению пиковой формы, снижению степени разделения или даже аномальному давлению. Научное чистое обслуживание может не только восстановить эффект колонны, но и значительно продлить срок службы хроматографической колонны. Ниже приведены системные программы очистки и оперативные элементы для различных типов загрязнения.

Основные процессы промывки и регенерации

1. Градиентная очистка

- Сценарий применения: обычные органические загрязнители (например, белки, полипептиды, метаболиты малых молекул).

- Шаги действия:

Отключите детектор от соединения, чтобы предотвратить попадание высокой концентрации примесей в бассейн обращения;

б) метанол - вода (50: 50, v / v) в качестве начального растворителя, скорость потока, установленная как 1 / 3 нормального потока (пример: 4.6 мм ID хроматографическая колонка рекомендуется 0,8 мл / мин);

Постепенное увеличение доли органической фазы до 95% метанола, непрерывное промывание в течение 30 минут;

Обратный возврат трубопровода, переход на чистую ацетонитрильную низкоскоростную промывку в течение 20 минут, использование эффекта замещения растворителя для удаления гидрофобных примесей.

- Ключевые параметры: максимальная толерантность к давлению 30 МПа, контроль температуры ниже 40°C.

2. Способ пропитки сильным растворителем

- Объект: жирорастворимые полимеры или загрязнители смолы.

- Подробности осуществления:

Приготовьте изопропиловый раствор, содержащий 0,1% трифторуксусной кислоты (TFA), непрерывно промываемый на ночь с низкой скоростью потока (0,2 мл / мин). Кислотная среда способствует ионизации и повышает растворимость щелочных соединений. Обратите внимание, что этот метод не подходит для связанных хроматографических колонн, кроме силиконовой матрицы.

II. Специальные стратегии удаления загрязнения

1. Неорганическая очистка от осаждения соли

- Феноменальные характеристики: фоновый шум увеличивается, появляются призрачные пики.

- Решения:

Использовать двухэтапную обработку: (1) сначала промыть деионизированной водой при низком давлении в течение 30 минут; Переключайтесь на метанол - водный раствор, содержащий 0,05 моль / л EDTA (pH до 7,0), хелатируйте ионы металлов и растворите осадки фосфата кальция. Выполнение этой процедуры один раз в месяц может эффективно предотвратить повреждение солевым анализом.

2. Биологическая макромолекулярная адсорбция и десорбция

- Сложный анализ: нуклеиновые кислоты / белковые вещества легко образуют необратимый адсорбционный слой.

- Инновационные процессы:

Настройка SDS (додекаалкилсульфат натрия) - смесь изопропилового спирта (масса 0,1%), с помощью ультразвукового сотрясения для вспомогательной очистки. Ультразвуковая частота выбрана в 40 кГц, амплитуда регулируется до тех пор, пока не будет создан кавитационный пузырь микронного уровня, который может не разрушать прикрепленный слой и силиконовый каркас. После завершения необходимо заменить поверхностно - активные вещества большим количеством чистой воды.

III. Чрезвычайные ситуации в особых условиях

В случае серьезной блокировки могут использоваться следующие нетрадиционные средства:

1. Обратная импульсная промывка высокого давления

- Включите хроматографическую колонну в систему обратного доступа, установите импульсный режим (пиковое давление до 40 МПа, длительность < 5 секунд / раз), с интервалом впрыска воздуха для выталкивания остаточных частиц. Этот метод ограничивает первоначальное использование загрязнения оксидом металла, частые операции могут привести к падению наполнителя.

2. Восстановление при высокотемпературном обжиге на месте

- Специальные хроматографические колонны для изготовления высокотемпературных керамических наполнителей. Медленное нагревание до 300 °C поддерживается в течение 2 часов, окисляя карбидный нагар. Процесс охлаждения требует строгого контроля скорости охлаждения (5°С / мин), чтобы избежать трещин от теплового напряжения.

Повседневная защита и долгосрочное управление

1. Предварительная обработка перед вводом образцов

- Все образцы должны быть фильтрованы с помощью фильтра 0,22 мкм, и рекомендуется использовать защитные устройства с предварительно установленными колоннами для перехвата мелких примесей. Для сложных образцов матрицы рекомендуется предварительно очистить колонны последовательной онлайновой твердой экстракции.

2. Оптимизация условий хранения

- Краткосрочный простой (< 7 дней): хранится в растворе метанол - вода (80: 20), оба конца герметичны для предотвращения улетучивания;

- Длительное хранение: наполнение азотом создает инертную атмосферу и помещается в сушилку, чтобы избежать сохранения света. Регулярно проверяйте тенденции изменения давления столбов и создавайте файлы жизненного цикла.

3. Применение интеллектуальных систем мониторинга

- Оснащен датчиком давления для мониторинга перепада давления на входе и выходе в режиме реального времени и автоматически запускает процедуру промывки, когда дельта P превышает порог предупреждения (обычно в 1,5 раза выше начального значения). В сочетании со степенью затухания сигнала УФ - детектора динамическая оценка состояния затухания столба.