Правильное использование и обслуживание хроматографических колонн очень важно, небольшая неосторожность снижает эффективность колонны, сокращает срок службы или даже наносит ущерб. Во время хроматографических манипуляций необходимо обратить внимание на следующие темы для поддержания хроматографических колонн.
Избегайте резких изменений давления и температуры и любых механических колебаний. Внезапное изменение температуры или падение хроматографической колонны с высоты влияет на заполнение колонны; Внезапное повышение или понижение давления колонны также приводит к импульсному заполнению колонны, поэтому при регулировании скорости потока оно должно осуществляться медленно, а при подаче образца клапана вращение клапана не может быть слишком медленным (как описано выше).
Состав растворителя должен постепенно меняться, особенно в антифазной хроматографии, и не должен меняться непосредственно с органического растворителя на весь водный, и наоборот.
(3) Как правило, хроматографическая колонна не может быть отброшена назад, и только если производитель указывает, что колонна может быть отброшена, она может отбросить примеси, оставшиеся в головке колонны. В противном случае эффект отдачи быстро снизится.
Выберите подходящую активную фазу (особенно pH), чтобы избежать разрушения фиксированной фазы. Иногда перед входом может быть соединена предварительная колонна, аналитическая колонна - это связующий силикон, предварительная колонна - силикон, так что активная фаза предварительно « насыщена» силиконом перед входом в аналитическую колонну, чтобы избежать растворения силиконовой матрицы в аналитической колонне.
Избегайте прямого впрыска сложных образцов матрицы, особенно биологических образцов, в колонну, требующую предварительной обработки образцов или соединения защитной колонны между прототипом и хроматографической колонной. Защитная колонна обычно представляет собой короткую колонну, заполненную аналогичной фиксированной фазой. Защитные столбы могут и должны часто заменяться.
Часто полоскать хроматографическую колонну сильным растворителем для удаления примесей, хранящихся в колонне. При очистке замена активной фазы в конвективной системе должна постепенно переходить в смесь растворителей, объем каждой активной фазы должен быть примерно в 20 раз больше объема колонны, то есть обычный анализ требует от 50 до 75 мл.
Ниже перечислены растворители для очистки и последовательность некоторых хроматографических колонн: силиконовые колонны последовательно промываются ортоксаном (или гептаном), дихлорметаном и метанолом, а затем промываются в обратном порядке, и все растворители должны быть строго обезвожены. Метанол смывает остатки сильнополярных примесей, а декан активирует поверхность силикона. Обратная колонна промывается последовательно водой, метанолом, ацетонитрилом, монохлорметаном (или хлороформом), а затем последовательно в обратном порядке. Если активная фаза, используемая для следующего анализа, не содержит буфера, то этот шаг можно опустить после промывки водой zui. Хлорметан может быть смыт в остаточные неполярные примеси, и повторные инъекции от 100 до 200 мкл тетрагидрофурана при промывке метанола (ацетонитрила) помогают удалить сильно гидрофобные примеси. Смешанный раствор тетрагидрофурана с ацетонитрилом или метанолом удаляет липоиды. В некоторых случаях также вводили диметилсульфонил несколько раз. Кроме того, стирка с помощью градиента ацетонитрила, ацетона и трифторуксусной кислоты (0,1%) удаляет белковое загрязнение.
Катионообменная колонна может быть промыта разреженной кислотой буферной жидкостью, анионообменная колонна может быть смыта разреженной щелочной буферной жидкостью, чтобы удалить соли с сильными обменными свойствами, а затем промыть воду, метанол, дихлорметан (за исключением органических веществ, адсорбируемых на поверхности фиксированной фазы), метанол и воду в свою очередь.
(7) При сохранении хроматографической колонны колонна должна быть покрыта ацетонитрилом или метанолом, а соединение колонны должно быть затянуто, чтобы предотвратить летучую сушку растворителя. По мере возможности запрещается оставлять буферный раствор в столбе на ночь или дольше.
Во время использования хроматографической колонны, при повышенном давлении, одним из вариантов может быть блокировка спекающего фильтра, когда фильтр должен быть заменен или удален для очистки; Другая возможность заключается в том, что макромолекулы входят в колонну, загрязняя головку колонны; Если эффект колонны снижается или хроматографический пик деформируется, может произойти коллапс головки колонны и увеличение мертвого объема.
В последних двух случаях осторожно отвинчивайте штуцер колонны, вытаскивайте насадку колонны на высоту от 1 до 2 мм из чистой стали (обратите внимание, чтобы очистить загрязненный наполнитель), а затем выравнивайте внутреннюю насадку колонны. Затем заполните хроматографическую колонну фиксированной фазой, увлажненной соответствующим растворителем (такой же, как и внутри колонны), сглажните и затяните соединение колонны. Эффективность этой обработки задней колонны улучшилась, но ее трудно восстановить на уровне новой колонны.