I. Перед использованием: сделайте предварительную обработку, чтобы защитить хроматографическую колонну от источника

Активация и равновесие колонны: новая колонна или хроматографическая колонна, простаивающая более 1 недели, должна быть сбалансирована потоковой фазой в течение 30 - 60 минут перед использованием (скорость потока 1.0 мл / мин), чтобы обеспечить полное проникновение фиксированной фазы; Антифазная колонна (например, C18) может быть сначала промыта объемом 20 колонн метанолом / водой (90: 10), а затем переключена на проточную фазу образца, чтобы избежать сушки фиксированной фазы, приводящей к снижению производительности. Если удерживающий растворитель в колонне несовместим с потоком (например, положительная фазовая колонна сохраняется с положительным гексаном, текучая фаза метанола), необходимо промыть его градиентом переходного растворителя, чтобы предотвратить взаимное растворение растворителя для образования пузырьков или оседания фиксированной фазы.

Образец очищается в проточной фазе: образец должен быть отфильтрован фильтрующей пленкой 0,22 мкм, чтобы удалить частицы, суспензии, чтобы избежать блокировки столбчатого сита; Образцы, содержащие примеси с высокой точкой кипения, белки и жиры, должны быть очищены заранее с помощью твердофазной экстракции (SPE) и других методов, чтобы предотвратить адсорбцию примесей на фиксированной фазе. Фаза течения требует ультразвуковой дегазации 15 - 20 минут, чтобы удалить пузырьки (пузырьки могут вызвать колебания давления столба, пиковые аномалии); При использовании буферной фазы потока соли необходимо использовать воду высокой чистоты (например, сверхчистую воду), которая после фильтрации в настоящее время используется, чтобы избежать засорения кристаллизации соли хроматографической колонной.

Проверка состояния прибора: перед установкой хроматографической колонны очистите втулку входного отверстия образца, замените стареющую прокладку, чтобы избежать обломков прокладки, образец остался в колонне; Проверьте, есть ли утечка в трубопроводе, блокировка, чтобы убедиться, что давление перед колонной стабильно; Подтвердите, что соединение колонны хорошо запечатано, выберите соответствующую графитовую прокладку, чтобы избежать утечки воздуха или неравномерного давления, приводящего к повреждению колонны.

II. В использовании: Нормативная эксплуатация, чтобы избежать повреждения колонны

Контроль температуры и давления: строго соблюдайте максимальную используемую температуру хроматографической колонны (антифазная колонна обычно 60°C, положительная фазовая колонна 80°C), чтобы избежать высокотемпературного ускорения потери фиксированной фазы; Столбчатое давление должно контролироваться в рекомендуемом диапазоне выхода (обычно 40 МПа), если давление внезапно повышается более чем на 30%, необходимо немедленно остановить расследование (например, фильтрованная фаза потока, промывка входного отверстия), чтобы избежать чрезмерного давления, ведущего к уплотнению фиксированной фазы, оседанию столбового слоя. Рекомендуемая скорость нагрева составляет 10°C / мин, что позволяет избежать резкого повышения температуры и разрушения структуры колонны.

Правила использования фазы потока: избегайте использования сильно коррозионных растворителей (например, концентрированной соляной кислоты, гидроксида натрия), диапазон pH фазы потока антифазной колонны должен контролироваться на уровне 2 - 8 (за исключением специальных кислотоустойчивых щелочных колонн), превышение диапазона может привести к растворению силиконовой матрицы, гидролизу фиксированной фазы. При стирке градиента изменение соотношения органической фазы не должно быть слишком быстрым (например, изменение на 10% в минуту), чтобы избежать резкого сокращения или расширения фиксированной фазы; После использования фазы потока, содержащей буферную соль, необходимо своевременно промыть ее высокой долей водной фазы, чтобы предотвратить кристаллизацию соли.

Требования к вводу проб: вход проб должен соответствовать емкости колонны (обычный вход колонны C18 составляет более 20 мкл), чтобы избежать перегрузки, ведущей к пиковой перетаскиванию хвоста, фиксированному фазовому загрязнению; Температура входного отверстия была установлена разумно, выше максимальной температуры кипения образца 10 - 20°C, но не выше максимальной используемой температуры колонны, чтобы предотвратить разложение образца, чтобы создать загрязненную примесью хроматографическую колонну. Избегайте непрерывного ввода образцов с высокой концентрацией и высоким уровнем загрязнения, рекомендуется после каждого ввода 10 - 20 игл промыть объем 10 - 15 колонн пустой фазой потока.

III. После использования: своевременная очистка, продление срока службы колонны

Обычный процесс очистки: после эксперимента хроматографическую колонну промывают градиентом фазы потока, чтобы удалить остаточные образцы и примеси. Обратный столб: сначала промыть 20 - цилиндровый объем метанолом / водой (50: 50), затем 30 - цилиндровый объем чистым метанолом или ацетонитрилом, чтобы удалить сильные адсорбционные примеси; Положительная фазовая колонна: 20 - цилиндровый объем смывается ортогексаном / изопропиловым спиртом (90: 10) и сохраняется чистым гексаном. Если образец содержит белки, жиры и другие трудностираемые примеси, можно добавить 5 - 10% тетрагидрофуранов (ТГК) в процесс очистки, чтобы повысить эффект стирки, но обратите внимание на совместимость ТГК с некоторыми фиксированными фазами.

Специальная обработка загрязнения: если давление колонны повышается, пиковый хвост является серьезным, может быть внутриколонное загрязнение, может быть проведена глубокая очистка. Обратный столб: промыть с последовательным градиентом метанола → метанола / THF (80: 20) → метанола → ацетонитрила, объем 20 колонн на шаг; Положительная фазовая колонна: промывание с помощью ортогексана → ортогексана / этилацетата уксусной кислоты (50: 50) → ортогексана. Запрещается промывать положительную фазовую колонну сильными полярными растворителями (например, ацетоном, дихлорметаном) во избежание потери фиксированной фазы.

Метод консервации: кратковременная консервация (в течение 1 месяца): антифазная колонна герметизируется чистым метанолом или ацетонитрилом, положительная фазовая колонна - положительным гексаном, чтобы убедиться, что в колонне нет пузырьков; Долгосрочная консервация (более 1 месяца): Антифазная колонна сохраняется с использованием метанола / воды (90: 10), положительная фазовая колонна с использованием положительного гексана / изопропилового спирта (95: 5), чтобы предотвратить сухое старение фиксированной фазы. При сохранении оба конца хроматографической колонны должны быть запечатаны заглушкой и помещены в прохладное и сухое место (температура 5 - 30°C), чтобы избежать прямых солнечных лучей.

Благодаря вышеуказанному нормативному обслуживанию срок службы высокоэффективной жидкостной хроматографической колонны может быть продлен до 1000 - 2000 анализов, обеспечивая при этом точность и повторяемость данных испытаний и снижая затраты на использование. Методы обслуживания различных типов хроматографических колонн (например, ионообменных колонн, ручных колонн) должны быть скорректированы в сочетании с инструкцией производителя, уделяя особое внимание совместимости фаз потока и характеристикам фиксированной фазы.