Обратная хроматографическая колонна может столкнуться с множеством неисправностей во время использования, и вот решения для этих неисправностей:

Аномальное повышение давления

1. Заглушка решеток

- Проявление: значительное повышение или колебание давления столба.

- Решение: снять сито и поместить в 10% разреженной азотной кислоты для ультразвуковой очистки в течение 10 минут, после промывки чистой водой переустановить. Могут также использоваться сильные растворители для обратной промывки. Будьте осторожны, чтобы избежать удара высокого давления.

2. Загрязнение наполнителем

- Проявление: наполнитель головки колонны покрыт сильно удерживаемым веществом, что приводит к снижению эффективности колонны.

- Решение: завинчивание штуцера колонны, выкапывание поверхностного загрязняющего наполнителя, замена на новый наполнитель и уплотнение. Этот метод может частично восстановить эффект колонны, но трудно достичь уровня новой колонны.

3. Выделение кристаллов соли

- Проявление: когда в проточной фазе содержится высокая концентрация органического растворителя, кристаллизация буферной соли блокирует поток.

- Решение: растворить соль при низких концентрациях метанола / воды, а затем перейти на промывку в органической фазе при высоких концентрациях.

II. Снижение эффекта разделения

1.Пиковые аномалии

- Буксировка / разветвление: в связи с падением головки колонны или увеличением мертвого объема необходимо заполнить и сгладить наполнитель того же типа. Если из - за загрязнения металлом, переключитесь на силиконовые колонны высокой чистоты.

- Пик призрака: остаточные загрязнители вытекают при высоких температурах и могут быть удалены путем выпечки хроматографических колонн при повышенной конечной температуре.

2. Снижение эффективности столбика

- Причина: Фиксированная фазовая потеря или растворение силикона.

- Решение: оптимизировать pH фазы потока (рекомендации 2 ~ 9), чтобы избежать щелочных условий, ускоряющих гидролиз фазы связи.

III. Дрейф зарезервированного времени

1.Недостаточный баланс: после замены фазы потока включается не менее 10 - 20 - кратное равновесие объема колонны.

2. Гидрофобный коллапс: Длительная эксплуатация водной фазы колонны C18 приводит к сужению пористости и требует инъекции 5% органического восстановления фазы.

IV. Стратегия профилактического обслуживания

1. Регулирование операционных процессов

- Избегайте резких изменений давления, выключатель должен быть медленным.

- Переключение фазы потока требует градиентного перехода, запрещающего прямой переход из органической фазы в чистую водную фазу.

2. Периодическая глубокая очистка

- Обычная промывка: последовательное промывание 95% воды - 5% метанола → чистого метанола → изопропилового спирта, каждый растворитель не менее чем в 10 раз превышает объем колонны

- Устойчивые загрязнители: остатки белка выбирают DMSO, крахмал смывается водой.

3. Оптимизация условий хранения

- При длительном использовании, колонна заполнена метанолом или ацетонитрилом, затягивая соединения, чтобы предотвратить высыхание [^ 2 ^]. Запрещается задерживать буфер на ночь.

Устранение неполадок обратной хроматографической колонны должно сочетаться с физической промывкой, химической регенерацией и эксплуатационными нормами. Приоритет отдается исключению факторов, не связанных со столбиками (например, засорение прибора), а затем целенаправленному решению проблемы самой хроматографической колонны. Создание полного журнала обслуживания для записи условий каждой промывки, изменений давления и результатов испытаний может значительно продлить срок службы колонны.