Нуклеотидные белки являются ключевым оборудованием в лабораториях молекулярной биологии для быстрой количественной оценки нуклеиновых кислот (DNA / RNA) и концентрации белков. Правильная работа не только гарантирует точность данных, но и продлевает срок службы прибора. Эта статья знакомит новичков в лаборатории с основными эксплуатационными нормами, общими вопросами и практическими навыками детектора нуклеиновых белков.
I. ПОДГОТОВКА К ОПЕРАЦИИ
1. Калибровка приборов
- Калибровка пустоты: перед каждым использованием необходимо провести калибровку пустоты с использованием сверхчистой воды или буфера (например, буфера TE) для устранения фоновых помех.
- Регулярное техническое обслуживание: если прибор не используется в течение длительного времени, необходимо провести повторную калибровку и проверить источник света, детектор в норме.
2. Подготовка образцов
- Образец нуклеиновой кислоты: убедитесь, что нет твердых частиц или примесей, при необходимости центрифугирование (12000 rpm, 1 - 2 минуты) для удаления примесей.
- Образец белка: избегайте высокой концентрации дезактиваторов (например, SDS), чтобы предотвратить воздействие на определение поглощения.
3. Выбор подходящей модели тестирования
- Ультрафиолетовое поглощение (например, NanoDrop): быстрое определение для DNA / RNA (260 нм) и белков (280 нм).
- Флуоресцентный метод (например, Qubit): подходит для обнаружения нуклеиновых кислот с низкой концентрацией и более высокой чувствительностью.
II. Стандартный рабочий процесс
1. Включение и инициализация
- Включить прибор, подогреть 5 - 10 минут (часть оборудования нужно подогреть дольше).
- Выберите соответствующий режим обнаружения (нуклеиновые кислоты / белки).
2. Добавление проб и тестирование
1. Платформа для чистого обнаружения: небольшое количество ультрачистой воды или этанола, смоченное в безпыльную бумагу, протирает поверхность обнаружения, чтобы избежать остаточного загрязнения.
2. Добавить образец:
Инструменты класса NanoDrop: капля плюс 1 - 2 мкл образца на испытательном стенде, опустите контрольный рычаг.
- Прибор типа чашки Петри: убедитесь, что чашка Петри более чистая, добавьте соответствующее количество образцов (обычно 50 - 200 мкл).
3.Показания: Нажмите "Measure", чтобы записать данные.
4. Очистка: сразу же после обнаружения очистите испытательный стенд сверхчистой водой или этанолом, чтобы предотвратить последующее обнаружение воздействия кристаллизации образца.
3. Регистрация и анализ данных
- Определение чистоты нуклеиновой кислоты:
- DNA: A260 / A280 1.8 (чистая ДНК), A260 / A230 > 2.0 (без загрязнителей).
- RNA: A260 / A280 2.0 (чистая РНК).
- При аномальном соотношении (например, A260 / A280 < 1.6) может указывать на белковое или фенольное загрязнение.
- Определение белка: при использовании метода Брэдфорда или БКА необходимо сделать стандартную кривую.
Часто задаваемые вопросы и решения
1. Необычные результаты испытаний (например, низкий коэффициент A260 / A280)
- Возможная причина: загрязнение белками или органическими растворителями.
- Решения: повторно очистить образцы или перейти на флуоресцентный количественный метод (например, Qubit).
Неправильное сообщение прибора (например, "Sampletooconcentrated")
- Возможная причина: концентрация проб выходит за рамки обнаружения.
- Решение: повторное тестирование после разбавления образца.
3. Дрейф или нестабильность исходных линий
- Возможная причина: загрязнение станции или старение источника света.
- Решение: очистить стенд обнаружения или связаться с инженером для калибровки источника света.
IV. Практические навыки
1. Избегать помех пузырьков: при сложении пробы убедитесь, что капли полны и не пузырьков, иначе это приведет к колебаниям поглощения.
2. Обнаружение проб с низкой концентрацией:
- Количественная оценка с использованием флуоресцентного метода (например, Qubit), более чувствительная, чем ультрафиолетовый метод.
- При необходимости использования ультрафиолетового метода объем образца может быть соответствующим образом увеличен (например, 2 мкл → 3 мкл).
3. Рекомендации по долгосрочному хранению:
- Включать не реже одного раза в неделю, чтобы предотвратить влагу оптических элементов.
- Хранить в сухой, безпыльной среде.