Заполнение хроматографической колонны является основным компонентом хроматографического анализа, производительность которого напрямую влияет на эффект разделения и точность обнаружения. Научный стандартизированный процесс использования может значительно повысить эффективность колонны, продлить срок службы, ниже из четырех аспектов подготовки перед загрузкой, предыдущей работы, управления эксплуатацией и технического обслуживания, чтобы объяснить ключевые моменты.

I. Предварительная обработка перед загрузкой

Отбор и очистка хроматографических колонн

Выбор подходящего наполнителя в соответствии с полярностью цели (например, неполярный C18, полярный силикон), старые и новые хроматографические колонны должны быть очищены ультразвуком метанола / ацетонитрила в течение 30 минут для удаления остатков консерватора.

Пустая колонна трубки сначала пропитана разреженной соляной кислотой в течение 2 часов, чистая вода промыта до нейтральной, а затем смачивается метанолом, чтобы убедиться, что внутренняя стенка не имеет гидрофобных примесей помех.

Подготовка и заполнение раствора

При наполнении методом осаждения наполнитель изготавливается в однородную суспензию (содержание твердости около 5%), которая плотно накапливается насосом вакуума; Сухое наполнение требует стратифицированного удара по колонне, чтобы устранить пустоту.

На обоих концах цилиндрического станка установлены решетчатые пластины (апертура < диаметр частицы наполнителя 1 / 3), чтобы предотвратить утечку наполнителя, верхняя часть нажима в стекловат для фиксации.

II. Предыдущий образец и эксплуатационный контроль

Баланс и активация

При использовании новой колонны промыть в течение 2 часов с низкой скоростью потока в начальной фазе течения (0,5 мл / мин) и выпустить пузырьки; Обратная колонка должна постепенно увеличивать соотношение органической фазы к условиям работы, чтобы избежать оседания фиксированной фазы.

Перед входом в образец используется базовая калибровка пустой фазы потока, и эксперимент начинается после стабилизации сигнала ультрафиолетового детектора.

Принцип оптимизации параметров

Управление скоростью потока: Поддерживайте оптимальную линейную скорость (HPLC обычно 1 ~ 2 мм / с), чрезмерно усиливая вихревую диффузию, слишком низкая приводит к увеличению сопротивления массопередачи.

Ограничение диапазона pH: силиконовая матрица избегает pH > 8, полимерные наполнители имеют более широкий диапазон толерантности, но специальные pH ускоряют разрыв хвостовой клавиши.

Управление температурой: повышение температуры столба может улучшить пиковую форму, но более 60°C может легко привести к потере фазы связи, необходимо с модулем управления температурой для точного контроля температуры.

III. Повседневное обслуживание и регенерация

Стратегия борьбы с загрязнением

Жирорастворимые загрязнители промываются градиентом (например, метанол → дихлорметан → метанол); Остатки ионного типа промываются солевым раствором (0,1 м NaCl).

При сильной засоренности снимите головку колонны, удалите верхний слой испорченного наполнителя, добавьте свежий наполнитель и снова уплотняйте.

Правила долгосрочного хранения

Краткосрочное простаивание (< 1 неделя): запечатано в закрытом контейнере, содержащем подвижную фазу, промыто электричеством в течение 30 минут в неделю;

Долгосрочное хранение (> Январь): заменяется смесью ацетонитрила / изопропилового спирта (1: 1), оба конца запечатаны и помещены вертикально в прохладное место.

IV. Ключевые вопросы, требующие внимания

Условия, запрещающие резкие изменения: при переключении фазы потока требуется ступенчатый переход, который предотвращает резкие колебания давления колонны, вызванные мутацией вязкости растворителя; Перед остановкой амортизирующий солевой раствор заменяется инертным растворителем (например, ацетонитрилом).

Предварительная обработка проб: сложные биологические образцы должны быть очищены колоннами SPE, чтобы избежать засорения колонн осаждением белка; Объем входного образца составляет 1% от вместимости колонны, а перегрузка приводит к серьезному буксированию хвоста.

Диагностика аномалий: постоянное повышение давления столба указывает на накопление частиц, базовый дрейф указывает на двухфазный дисбаланс, появление призрачного пика в основном вызвано системным загрязнением.

Благодаря точной эксплуатации и регулярному обслуживанию, количество теоретических башен, заполненных хроматографическими колоннами, может поддерживаться на уровне более 90% от начального значения, а отклонение времени однократного анализа < 2%. В практическом применении необходимо установить стандартизированный процесс в сочетании с конкретными характеристиками наполнителя и записать кривую ослабления эффективности колонны для своевременной замены.