Система визуализации геля в сочетании с оптической визуализацией и программным анализом может обеспечить точную количественную оценку молекулярной массы и анализ концентрации, ее основные процессы и технические точки заключаются в следующем:

Принципы и этапы точной количественной оценки молекулярной массы

Построение стандартной кривой

Система использует полосу DNAMarker известной молекулярной массы в качестве ориентира для обозначения ее местоположения с помощью программного обеспечения и получения кривой соответствия между молекулярной массой и расстоянием миграции. Эта кривая основана на линейной зависимости молекулярной массы от скорости миграции в электрофорезе, обеспечивая точность расчета молекулярной массы неизвестной полосы. Например, после маркировки молекулярной массы полосы Маркера на пленке ДНК (например, 100 bp, 500 bp, 1000 bp) система автоматически согласовывает кривую для последующего расчета молекулярной массы неизвестной полосы.

Расчет молекулярной массы неизвестной полосы

Поместите гель после электрофореза образца, подлежащего измерению, в систему визуализации, которая возбуждает флуоресценцию (например, окрашивание EB) через ультрафиолетовый или видимый источник света, и программное обеспечение захватывает изображение, чтобы рассчитать его молекулярную массу в соответствии с перемещением неизвестной полосы в геле в сочетании со стандартной кривой. Этот метод более точен, чем оценка невооруженным глазом, и погрешность может контролироваться в пределах ±5%.

II. Методы точной количественной оценки концентрации

Плотность и контраст

Система сначала калибрует стандартную полосу с известной концентрацией (например, содержание ДНК в определенной полосе на пленке ДНК), а затем нажимает на неизвестную полосу с помощью программного обеспечения, чтобы сравнить ее с разницей в плотности стандартной полосы и рассчитать концентрацию неизвестного образца. Например, если плотность стандартной полосы составляет 100 единиц, соответствующая концентрация - 50 нг / мкл, а плотность неизвестной полосы - 50 единиц, концентрация составляет около 25 нг / мкл.

Линейная зависимость плотности света

Поглощение света образцами линейно связано с концентрацией или массой. Система выводит концентрацию неизвестных образцов путем измерения плотности света полосы (значения серого или интенсивности флуоресценции) в сочетании со стандартными кривыми или данными известных образцов. Этот метод применяется для определения концентрации ДНК, РНК и белковых гелей, таких как клей PAGE.

III. Ключевые технические гарантии

Оптическая оптимизация систем

Использование ультрафиолетовых или белых пропускающих источников света обеспечивает равномерное распределение света и уменьшает влияние неравномерной плотности света на результат. Высокоуровневая CCD или цифровая камера захватывает изображения, в сочетании с дизайном темного ящика, чтобы защитить внешние помехи источника света и улучшить качество изображения.

Аналитические функции программного обеспечения

Программное обеспечение поддерживает вычитание фона, разделение полос, сканирование плотности и другие операции, которые могут генерировать диаграммы продольного сканирования и интегралы для достижения точной количественной оценки. Например, в количественной оценке PCR программное обеспечение может рассчитать относительный процент каждой полосы от общей полосы, а сканирование плотности генерирует продольную кривую распределения с значением серого.

Сценарии применения и преимущества

Молекулярно - биологические исследования: точное определение молекулярной массы и концентрации DNA / РНК, вспомогательное клонирование генов, проверка секвенирования.

Белковая инженерия: количественный анализ доли продуктов экспрессии белка, оптимизация процесса ферментации.

Разработка лекарственных средств: оценка чистоты лекарственных средств с помощью измерения концентрации, обеспечение контроля качества.

Благодаря стандартизированным процессам и передовым технологиям система обеспечивает двойную точную количественную оценку молекулярной массы и концентрации и обеспечивает надежную поддержку данных для исследований в области наук о жизни.