I. СОДЕРЖАНИЕСверхфильтрующая центрифугаОптимизация центробежных параметров

Скорость и время

Первоначальная центрифуга рекомендуется начинать с 70% от рекомендуемой скорости вращения (например, 3000 × g центрифуга 10 минут), а после наблюдения скорость потока последовательно корректируется до 4000 × g, но не превышает предела толерантности фильтрующей мембраны.

Типичное время обработки составляет 10 - 30 минут в зависимости от удерживаемой молекулярной массы (MWCO) и объема образца.

Регулирование температуры

Центрифуга должна быть предварительно охлаждена до 4°C, чтобы уменьшить термодефицитную адсорбцию. Низкие температуры могут продлить срок службы мембраны, но обратите внимание, что время обогащения может быть увеличено.

Ускорение и равновесие

Центробежное ускорение переводится на самую низкую передачу, уменьшая давление на мембрану.

Убедитесь, что качество спаренного ультрафильтра сбалансировано с центром тяжести, расположение и направление фильтра совпадают, чтобы избежать качания или повреждения во время центрифугирования.

II. Стратегия повышения ставок возмещения

Выбор фильтра и предварительная обработка

В зависимости от молекулярной массы мишени выбирается ультрафильтрующая мембрана MWCO, которая в 2 - 3 раза меньше молекулы мишени. Например, при молекулярной массе белка - мишени 35 кД выбирается ультрафильтр с молекулярной массой 10 кД.

Новая ультрафильтрующая мембрана центрифуги ультрафильтра содержит микроглицерин, который перед использованием должен быть пропитан чистой водой или буфером и помещен в холодильник для предварительного охлаждения в течение 10 минут. После этого вылить чистую воду, а затем поместить ультрафильтр на лед для предварительного охлаждения в течение 2 - 5 минут.

Обработка и сложение образцов

Образцы фильтруются с помощью 0,22 мкм фильтрующей пленки заранее, чтобы избежать засорения ультрафильтрующей пленки частицами.

Образцы медленно добавляются в ультрафильтр, уровень жидкости не превышает максимальной отметки. При добавлении образца операция должна быть легкой, чтобы избежать разрушения мембранной структуры.

Концентрация и стирка

Процесс центрифугирования приостанавливается каждые 5 минут, и перехватывающий слой мягко дуется с помощью переносной пушки, чтобы предотвратить накопление больших молекул, чтобы сформировать концентрированный дифференциальный поляризованный слой.

Объем отсечения контролируется от 1 / 10 до 1 / 20 исходного объема выборки. Чрезмерно высокое обогащение может привести к накоплению белков, которые могут быть заменены добавлением буфера на полпути к ультрафильтрации и поэтапному обогащению.

Для вязких образцов (например, содержащих глицерин или тростниковый сахар) необходимо снизить скорость вращения на 10 - 20% и увеличить время центрифугирования.

Операции по восстановлению

После центрифугирования крупные молекулы остаются в верхнем слое, а мелкие молекулы и растворители попадают в нижний слой через мембрану. Внешние фильтры представляют собой мелкие молекулярные вещества и растворители; Внутренняя жидкость представляет собой крупномолекулярное вещество.

Если необходимо собрать крупномолекулярное вещество, возьмите другую наружную трубку, внутреннюю трубку переверните на 1000 × g центрифуг в течение 1 - 2 минут.

Часто задаваемые вопросы и решения

Утечка или отсутствие белка

Причина: неправильный выбор фильтрующей мембраны, неподходящие центробежные параметры, слишком низкая начальная концентрация образца и так далее.

Решение: Повторно выберите подходящий фильтр MWCO, отрегулируйте центробежные параметры и убедитесь, что начальная концентрация образца превышает 25 мкг / мл.

Защемление мембраны или замедление потока

Причина: слишком много частиц в образце, загрязнение фильтрующей мембраны и так далее.

Решение: образец фильтруется заранее, регулярно очищается или заменяется фильтрующей пленкой. При обнаружении закупоренности мембраны замочите 0,1 м NaOH в течение 1 часа и промывайте его чистой водой еще три раза.

Низкий уровень утилизации

Причина: адсорбция фильтрующей мембраны, неправильная работа и так далее.

Решение: Закройте фильтр на 30 минут вперед с 1% BSA, чтобы уменьшить неспецифическую адсорбцию. Обратите внимание на мягкость во время операции, чтобы избежать разрушения мембранной структуры.

После ультрафильтрации происходит осаждение.

Причины: высокая концентрация белка, неуместный баффер и т.д.

Решение: одновременное ультрафильтрование несколькими ультрафильтрами, снижение концентрации; Замените разные бафферы до тех пор, пока не произойдет осаждение белка. Для осаждения можно повторно центрифугировать после растворения мочевины 8М.

IV. Содержание и техническое обслуживание

Очистка и дезинфекция

Сверхфильтрационные центрифуги одноразового использования, выбрасываемые непосредственно после использования.

При повторном использовании использованный ультрафильтр повторно промывают 5 раз чистой водой, затем пропитывают 1 - 2 часа 0,1 м NaOH, затем 20% этанола и 3 раза ультрачистой водой или буфером. Повторное использование ультрафильтра не рекомендуется более 5 раз.

Долгосрочное хранение

Краткосрочная консервация: промочите 0,1 м NaOH в течение 1 - 2 часов, промывайте чистой водой 3 раза, а затем пропитайте 75% этанола, убедитесь, что фильтрующая пленка остается влажной и не может быть длинной бактерией.

Долгосрочная консервация: промочите 0,1 м NaOH в течение 1 - 2 часов, промывайте чистой водой 3 раза, а затем пропитайте 20% этанолом, убедитесь, что фильтрующая пленка остается влажной и не может быть длинной бактерией.