Межпуповинные стволовые клетки(hUC - MSCs) - это стволовая клетка, извлеченная из пуповины новорожденного с множественной способностью дифференцировать. Межплазменные стволовые клетки пуповинного происхождения не только сохраняют биологические свойства мезоплазменных стволовых клеток (поверхностные антигеновые маркеры, способные дифференцироваться в костные клетки, хрящевые клетки и жировые клетки), но и более безопасны, более первичны, клетки более размножаются, дифференцируются и иммуномодулируют, чем интерплазменные стволовые клетки из других источников.
Кроме того, межпуповинные стволовые клетки также имеют такие характеристики, как легкость извлечения материала, низкая иммуногенность, отсутствие этических и этических ограничений, большое количество доступных клеток и крупномасштабное стандартизированное производство, и имеют широкие перспективы клинического применения. Продукт проходит строгий контроль качества и проверку, чтобы обеспечить его безопасность и эффективность.
(1) Когда плотность клеток достигает 80% - 90%, можно провести передачу (обратите внимание, что клетки не могут быть слишком плотными, иначе легко дифференцируются), отказаться от культивирования верхней очистки, увлажнять клетки DPBS, которые не содержат ионов кальция и магния 1 - 2 раза;
(2) Добавьте 1 мл рекомбинантного фермента поджелудочной железы в культурную бутылку, так что пищеварительная жидкость проникает во все клетки и помещается в инкубатор 37°C для переваривания 1 - 3 мин, наблюдая под микроскопом, пока большая часть клеток не округлится и не выпадет (в зависимости от состояния клетки).
(3) После добавления в стерильную центрифужную трубку, 1000rpm центробежная 5 мин, выбрасывается в 3 мл питательной среды MSC для прекращения пищеварения. Аккуратно выпрямите жидкость, добавьте 1 - 2 мл питательной среды MSC и выдувайте ее.
(4) Передача осуществляется в соотношении 1: 3 или 1: 4, или после подсчета клеток вводится в новую питательную бутылку в концентрации 5 - 8 × 103cells / cm2, после добавления соответствующего объема питательной среды MSC, культивируется в инкубаторе 37°C, 5% CO2.
(5) Меняйте жидкость каждые 2 - 3 дня, культивируйте до 2 - 4 дней, пока плотность роста клеток не достигнет около 80%, для последующих операций передачи или замораживания.
• Время переваривания : переваривание ферментов поджелудочной железы должно контролироваться примерно в течение 1 минуты, чтобы избежать чрезмерного переваривания, приводящего к повреждению клеток
Плотность вакцинации : Передается в пропорции 1: 3 - 1: 4 по нижней площади, избегая чрезмерной плотности или разрежения .
Выбор поколений : Рекомендуется использовать субклетки низкого поколения (например, поколение P2) для обеспечения экспериментальных эффектов
• Специальные питательные среды: использование специальных питательных сред, содержащих факторы роста, для содействия размножению и дифференциации клеток.