-
Электронная почта
marklee@hankosci.com
-
Телефон
15800598580
-
Адрес
Шанхайский район Минхан Хэннань - роуд, 1325 Kexin Business Park
Shanghai Haokuo Scientific Equipment Co., Ltd
Изучение оболочки? Simple Western удваивает эффективность тестирования
Дата:2025-10-21Читать:1
Экзосомы (Exosomes)Это небольшие липидные наночастицы, полученные из эндосома, диаметром около 30 - 200 нанометров, и большинство живых клеток активно выделяют экзосомы через клеточную рвоту[1]Как в патологическом, так и в физиологическом состоянии высвобождение экзосом может быть как постоянным, так и индуцированным, а процесс высвобождения динамическим, контролируемым и функционально релевантным. Молекулярный состав и количество высвобождений экзосом зависят от состояния его исходной клетки. Экзосекреция может быть получена из различных клеточных линий, первичных культур, а также из сыворотки крови, плазмы, слюны и других биологических жидкостей. Учитывая разнообразие источников, экзосомы имеют многофункциональные физиологические функции, и все больше исследований показывают, что они играют важную роль в различных патологических состояниях, таких как рак, инфекционные заболевания и нейродегенеративные заболевания. Таким образом, экзосомы становятся ключевыми объектами исследований в методах биопсии жидкостей.[2]. Кроме того, экзосомы могут быть также инженерно преобразованы, чтобы стать иметьПотенциальный носитель доставки лекарств[3]А.
Из - за крошечных размеров экзосом отделение экзосом от сложной биологической матрицы является сложным и обычно менее продуктивным.В этом контексте, Simple Western ™ Идеальная технология для изучения экзосом: этот метод требует всего 3 микролитра образцов и обладает чувствительностью пикерского уровня, что значительно снижает требования традиционного Western blot к требуемому количеству экзосом.Затем их можно описать с использованием специфических свойств антигенов, связанных с инъекциями, которые могут быть либо общими маркерами экзосомных организмов, либо маркерами клеток их происхождения или жидкостей организма. В этом эксперименте мы будем использовать доступные на рынке экзосомные стандартные продукты и антитела через Simple Western ™ Определение общих и специфических признаков происхождения экзосом.
В этой статье представлены результаты трех экзосомных стандартных продуктов « человеческая плазма, сыворотка человека, клетки человека A549 (клетки рака эпителиальной железы на основе альвеолы) » для проверки эффективности антител в следующей таблице:
01. Выражение общих экзосомных маркеров
• Flotillin - 1: Как классический универсальный маркер, обнаруженный во всех трех стандартных продуктах (рисунок 1A).
• Alix: экспрессия в трех стандартных продуктах, но более высокая экспрессия в экзосомах клеточного происхождения A549 (рис. 1D).
02. Выражение отличительных признаков источника
• Annexin V: В качестве маркера апоптоза и антикоагулянтных белков крови, обнаруженных в клетках A549, экзосомах плазменного происхождения и не обнаруженных в экзосомах сывороточного источника (рис. 1B).
• EGFR (HER1): Обнаружен только в экзосомах клеточного происхождения A549, в сыворотке крови, экзосомах плазменного происхождения сигнала нет (рисунок 1C).
Использование Simple Western ™ Тестирование экзосомных антигенов. A：flotillin-1； B：Annexin V； C：EGFR； D：Alix。
03. Маркеры особых потребностей в обработке
• CD63: Сигнал, свидетельствующий о влиянии модификации на основе сахара на обнаружение маркера, может быть обнаружен только после обработки стандартного продукта для экзосом с помощью PNGase F (десахаридаза) (рисунок 2).
04. Проверка других знаков
Остальные антитела в таблице 2 (например, Annexin A2, HSPA8 / HSC70, TSG101 и т.д.) были проверены Simple Western для обнаружения целевых сигналов в соответствующих экзосомных стандартных продуктах (рис. 2).
Рисунок 2. Вид канала обнаружения каждого целевого антигена в стандартных экзосомных продуктах из плазмы крови и клеток A549.
Основные технические ценности Simple Western
(1) Микроэффективность:Требуется всего 3 - 5 мкл экстракорпорального крекинга (для традиционного WB требуется 50 мкл L +), подходящий для ценных образцов; Весь процесс капилляра уменьшает потерю образцов и подходит для мембранных белков с низким содержанием.
(2) Высокая чувствительность: нижний предел обнаружения пикового уровня, измеримый CD63 / Alix и т. Д. С помощью обработки PNGase F, чтобы взломать помехи сахаризации, для достижения специальных тестов, таких как EGFR.
(3) Устойчивость к основным помехам: 12 - 230kDa капиллярный электрофорез дезактивации, после расщепления экзосомы может быть непосредственно на борту, без утомительной очистки.
(4) Многократное количественное измерение: синхронное измерение 8 мишеней с одной выборкой в соответствии со стандартом MISEV, динамический диапазон охватывает 6 порядков.
(5) Автоматизированный процесс: 3 часа полной автоматизации для получения результатов, снижения разложения белков; Каждое отверстие имеет независимый контроль качества, чтобы удовлетворить внешнюю систему подготовки QC.
(6) Точная количественная: Поддержка абсолютной / относительной количественной, низкой выборки + высокой повторяемости, адаптация к разработке жидких маркеров биопсии, ускорение научных исследований для клинической трансформации.
* Эта статья опубликована в журнале ProteinSimple
* Справочная литература:
1. Экзосомы, Д. М. Пегтель и С. Дж. Гулд, Ежегодный обзор биохимии, 2019, 88:487–514.
2. Внешние клеточные пузырьки – биомаркеры и эффекторы клеточного взаимодействия при раке, J Rak, Frontiers in Pharmacology, 2013, 4:21.
3. Экзосомы как реконфигурируемые терапевтические системы, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari и I Mendes Pinto, Trends in Molecular Medicine, 2017, 23(7):636–650.
АО компании ProteinSimple:
ProteinSimple - это бренд белкового анализа, принадлежащий американской компании Bio - Techne Group (NASDAQ: TECH), зарегистрированной на бирже NASDAQ. « Сделать анализ белка» - это то, что ProteinSimple всегда хотел. Компания ProteinSimple уже давно занимается разработкой и производством более точных, быстрых и чувствительных инновационных инструментов для анализа белка, включая индикаторы заряда белка, анализ чистоты белка, количественное тестирование после перевода белка, методы иммунологического тестирования белка, такие как цифровые Western Blot и высокочувствительные микропотоки с множественным ELISA, чтобы помочь ученым в области биофармацевтики, клеточной и генной терапии, биомедицины и наук о жизни решить проблемы анализа белка, ускорить разработку лекарств и глубоко проанализировать взаимосвязь между белком и болезнями.В качестве уполномоченного агента ProteinSimple в Восточно - Китайском регионе (Цзян, Чжэцзян, Шанхай, Аньхой, Шаньдун), Shanghai Hao расширит для всех, чтобы предоставить инструменты и оборудование ProteinSimple.
АО расширении Шанхая:
Основанная в 2019 году, Шанхайская компания по расширению научного оборудования Hao, со штаб - квартирой в Шанхае, является профессиональным поставщиком лабораторного оборудования / расходных материалов и аналитических приборов. Компания стремится предоставлять отечественным и зарубежным клиентам высокотехнологичное специализированное оборудование и технические консультационные услуги в смежных областях, таких как биология, медицина, физическое тестирование, химический анализ, пищевое и промышленное производство.