Силикатная H - пластина (SilicagelHthin - layerchromatographyplate, TLC) - это широко используемый аналитический инструмент, широко используемый в химии, фармацевтике и других областях для разделения и анализа компонентов различных веществ. Тонкослойная хроматография (TLC) - это метод разделения, основанный на различиях в распределении вещества между фиксированной и текучей фазами. Ниже приведены основные этапы экспериментального метода силиконовой H - пластины:
Материалы и оборудование
Силикагель H - тонкий слоистый слой (SilicagelHTLCplate)
Система растворителя (фаза потока, обычно смесь растворителя)
Образцовый раствор
Аэрозольные реагенты (например, аммиак, ультрафиолетовые детекторы и т.д.)
Развивающие канавки (например, стеклянные)
Капилляры (для точечных образцов)
Ультрафиолетовые лампы или другие красители (например, пары йода, используемые для окраски)
Миграционные трубки, измерительные трубки и т.д.
Экспериментальные шаги
1. Подготовка TLC - панелей
Резка силиконовой H - пластины, как правило, выбирает подходящий размер, часто 2,5cmx7.5cm доски.
Используйте карандаш, чтобы мягко отметить начальную линию (обычно 1 - 2 см от основания пластины), которая является местом, где образец был точечным.
2. Подготовка раствора для образцов
Пробы, подлежащие анализу, растворяются в соответствующих растворителях в концентрациях, как правило, от 1 до 5 мг / мл. При использовании растворителя следует учитывать его совместимость с фазой потока.
3. Точечные образцы
Используйте капилляры, чтобы аккуратно поместить раствор образца в исходную линию пластины TLC. При выборке каждый образец должен ждать, пока растворитель испарится, чтобы избежать избытка образца.
Можно заказать несколько образцов, но при сохранении правильного расстояния между ними, чтобы избежать неполного разделения.
4. Подготовка к разработке желобов и растворителей
Добавьте соответствующее количество подвижной фазы (растворителя) в раковину для развития стекла. Выбор фазы потока должен основываться на полярности целевого вещества, а общие системы растворителей, такие как n - гексан, этилацетат уксусной кислоты, хлороформ, метанол и другие смеси.
Уровень растворителя должен быть ниже начальной линии пластины TLC, чтобы образец не растворялся растворителем.
5. Развитие (отделение)
Описанная образцами пластина TLC помещается вертикально в развитую ванну, обеспечивая погружение нижней части пластины в растворитель без контакта с точкой пробы.
Пусть растворитель поднимается вдоль пластины TLC и отделяется с образцами. Передний край растворителя поднимается примерно до верхней части пластины, когда останавливается развитие.
При необходимости можно использовать конденсатор для удержания паров растворителя в резервуаре, чтобы процесс развития был более равномерным.
6. Извлечение и сушка
Удалите пластину TLC из развивающей канавки и отметьте карандашом расположение переднего края растворителя.
Поместите пластину TLC в воздух или высушите ее с помощью сушилки, чтобы убедиться, что растворитель полностью улетучивается.
7. Обнаружение
Если образец обладает УФ - абсорбционными свойствами, он может непосредственно освещать панель TLC ультрафиолетовой лампой, наблюдая за положением разделенных пятен.
Если образец не обладает ультрафиолетовой абсорбционной способностью, можно проводить ярко выраженную реакцию с помощью распыления с ярко выраженным реагентом (например, аммиак, пары йода, сернистые реагенты и т.д.).
При наблюдении при ярком или ультрафиолетовом освещении можно увидеть различные пятна, скорость движения которых (значение Rf) может быть использована для идентификации вещества.
8. Результаты анализа
Значение Rf для каждого выделенного пятна (расстояние переноса пятна / расстояние переноса перед растворителем) измеряется путем сравнения значений Rf для известного стандартного вещества.
Меры предосторожности
Выбор растворителя: выбор подходящей системы растворителя для обеспечения хорошего эффекта разделения в зависимости от различных веществ.
Количество и точность проб: количество проб не должно быть слишком большим, чтобы избежать неполного растворения проб или слишком большого количества пятен, что затрудняет их различение.
Герметичность развивающего желоба: убедитесь, что развивающий желоб хорошо запечатан и избегает слишком быстрого испарения растворителя.
Экспериментальная среда: во время эксперимента избегайте слишком большого количества вибраций и воздушных потоков, чтобы не повлиять на эффект разделения.
С помощью этих шагов вы можете провести эксперименты с тонкой слоистой слоистостью с силиконовой H - пластиной, которая успешно отделяет и анализирует сложные образцы.