Юй Чжун науки и техники - промышленное применение

Жидкостная хроматография (HPLC) является одним из широко используемых тестовых инструментов в аналитических лабораториях, и ее применение становится все более распространенным. При использовании таких приборов неизбежно возникают различные проблемы, которые непосредственно влияют на точность измеренных данных и нормальную работу прибора. Если оператор может понять причину неисправности, он может четко определить способы предотвращения и устранения этих неисправностей, может правильно использовать прибор и Zui максимизировать производительность прибора. Сегодня мы хотим поделиться с вами несколькими вопросами, на которые необходимо обратить внимание при использовании жидкой хроматографии в следующих областях.

Компонентный анализ.

I. Проблемы использования пробирок

1 Вопрос чистоты пробирки. Жидкая хроматография - очень чувствительный метод анализа, который может повлиять на точность результатов испытаний, если используется нечистая пробирка. Например, при растворении образцов с использованием метанола в качестве растворителя используется небольшая пробирка, покрытая резиновой пробкой, поэтому при каждом входе в образец существует фиксированный пик помех с сохранением времени, который, как было подтверждено, возникает из компонентов, растворенных в резиновой пробке, пропитанной метанолом. После замены стеклянной пробирки пик помех устраняется.

Проблема растворения пластиковых пробирок. В последние годы одноразовые пластиковые пробирки принесли экспериментаторам большое удобство, но в процессе использования необходимо обратить внимание на растворение органического растворителя в пробирке, при извлечении образцов из этой пробирки некоторые органические растворители (например, lvfang и т.д. В этом случае те же экспериментальные условия могут быть сначала протестированы, чтобы увидеть, может ли экстракт генерировать сигналы помех на детекторе, когда экстракт не содержит экстракта, и если есть сигнал помех, он может быть заменен только стеклянной пробиркой, стойкой к органическим растворителям.

Проблемы адсорбции проб на стенках пробирки. Эта проблема также должна быть замечена, иначе это также повлияет на точность результатов испытаний, в терапевтическом мониторинге лекарств (Therapeutic Drug Monitoring, TDM), некоторые из измеренных препаратов, таких как амитрин, пропиламизин и другие, легко адсорбируются на стенках труб в стеклянных пробирках, поэтому в операции следует использовать полипропиленовые трубки, чтобы предотвратить адсорбцию при экстракции, 0,5% жидкости диамидодекана может быть использовано в качестве экстракта, который эффективно предотвращает адсорбцию.

II. Проблемы, связанные с эксплуатацией входных клапанов

В настоящее время входной клапан, обычно используемый в аналитическом жидкостном хроматографе, является входным клапаном типа 7725, и его внутренняя структура шестиходового клапана делает входную операцию очень удобной, но при неправильном использовании это также создает проблемы. Например, во время испытаний жидкой хроматографии иногда возникают аномальные хроматографические пики и проблемы с плохой воспроизводимостью, в основном из - за неправильных методов работы, и для решения таких проблем необходимо начать со следующих аспектов.

1 Контроль входящего количества. При подаче проб с помощью входного клапана кольцо образца в клапане является количественным (объем кольца образца в общем аналитическом клапане составляет 20ul), поскольку при подаче проб раствор образца, вводимый в входной клапан, имеет радиальный градиент скорости в трубопроводе кольца образца (т.е. скорость потока жидкости на оси трубы выше, чем на стенке трубы). Таким образом, для наполнения кольца образца раствором образца и, следовательно, точной количественной оценки с помощью входного клапана необходимо, чтобы объем входного отверстия превышал объем кольца образца в два раза. Если количество проб контролируется с помощью шприца, Zui может вводить только 1 / 2 объема кольца образца, чтобы предотвратить переполнение части образца из сливной трубы, что приводит к ошибке количественного анализа.

2. Проблема очистки входного клапана. Если в кольце образца имеются остатки образца, полученного при предыдущем входе, что неизбежно приведет к загрязнению образца, который будет введен в следующий раз, то для предотвращения этого необходимо выполнить следующие действия: a) входной клапан имеет два положения, INJECT и LOAD. Во - первых, в положении LOAD проточная фаза вводится в клапан для промывки шприцем несколько раз, при каждом использовании около 40ul; b. затем, когда ключ входной клапанной пластины нажимается на положение INJECT, он очищается в проточной фазе несколько раз, при каждом использовании все еще 40ul; c.zui затем вводит образец в клапан.

Действуя в соответствии с вышеуказанными шагами, можно избежать загрязнения, вызванного входным клапаном, тем самым устраняя пики помех и повышая точность результатов анализа.

3, засорение сливной трубы входного клапана. Иногда сливная труба входного клапана засорена, и игла инъекции не может быть сдвинута, когда образец вводится в входной клапан. Эта неисправность вызвана засорением сливной трубы. Причиной засорения в основном является то, что растворенные образцы текут с использованием солевого раствора, который кристаллизуется в опорном порту сливной трубы. На этом этапе небольшое количество дистиллированной воды может быть налито в небольшой стакан, чтобы немного пропитать сливной трубопровод, кристаллизация соли на порту может быть растворена, устранение неполадок. Эта неисправность может быть предотвращена, если после каждого ввода проб вся соль, повторно промытая дистиллированной водой в сливную трубу, может быть смыта.

Проблемы с фазой текучести (Moblle Phase)

Метанол и ацетонитрил часто используются в жидкой хроматографии для получения текучей фазы. Реакторы, обычно используемые в жидкой хроматографии, являются высокоуровневыми реагентами, такими как чистые реагенты хроматографии. В тех случаях, когда требования менее строги, могут использоваться высококачественные и даже аналитические чистые реагенты. В жидкой хроматографии обычно используются ультрафиолетовые детекторы, поэтому с точки зрения снижения фонового шума и повышения чувствительности анализа следует использовать чистые реагенты хроматографии с небольшим поглощением ультрафиолета и низким содержанием примесей.

1) Фильтрация фаз потока. Перед использованием готовой проточной фазы необходимо фильтровать с помощью микропористого фильтра с апертурой 0,5um. Это связано с тем, что раствор содержит много крошечных частиц, которые невооруженным глазом трудно обнаружить, и если их не отфильтровать, они блокируют отверстие насоса, фильтр на головке колонны, тем самым блокируя нормальный канал текучей фазы, так что сопротивление хроматографической колонны увеличивается, давление колонны увеличивается, а эффект колонны снижается. В этом случае необходимо заменить фильтрованную проточную фазу и снять засоренный фильтр и замочить в 20% раствора нитрата в течение 20 минут с помощью ультразвуковой стиральной машины, чтобы удалить засорение с фильтра.

2) Дегазация текучей фазы. Перед использованием фаза потока должна быть дегазирована, чтобы удалить газы, растворенные в фазе потока, насколько это возможно, в противном случае эти газы снижают производительность наполнителя колонны и могут создавать большие помехи сигналу детектора. Существует множество способов дегазации, таких как ультразвуковая дегазация, вакуумная дегазация, дегазация азота и так далее. Вакуумная дегазация и дегазация потока азота являются обычными методами дегазации в Zui в настоящее время. После смешивания воды и метанола образуется большое количество пузырьков, которые, если их использовать без дегазации, попадают в хроматографические столбы и детекторы и влияют на нормальное проведение анализа.

IV. Использование и обслуживание хроматографических колонн

Колонна хроматографии является основным компонентом жидкостного хроматографа zui, и решающую роль играет способность измеренного вещества быть хорошо разделенным и измеренным. Поэтому в повседневной работе особое внимание следует уделять правильному использованию и ремонту хроматографических колонн, чтобы продлить срок службы хроматографических колонн.

1. Использовать предварительную колонну и защитную колонну. Предварительная колонна (pre - column), установленная между насосом и прототипом, обеспечивает * равновесие текучей фазы в хроматографической колонне и предотвращает попадание в хроматографическую колонну компонентов или загрязнителей, которые оказывают разрушительное воздействие на наполнитель колонны. Защитная колонна (guard column) блокирует вход в хроматографическую колонну компонентов, которые могут быть прочно адсорбированы на хроматографической колонне, которая должна быть такой же, как и наполнитель хроматографической колонны. Предварительные и защитные колонны можно часто заменять без необходимости частой замены хроматографических колонн, что продлевает срок службы хроматографических колонн.

Предотвращение попадания газа в хроматографическую колонну. Некоторые хроматографические колонны (например, гелевые колонны) не допускают попадания пузырьков, иначе они уменьшат эффект колонны или даже образуют крошечные неуправляемые газовые камеры. Поэтому, чтобы предотвратить попадание пузырьков в хроматографическую колонну, необходимо использовать дегазированную проточную фазу и установить хроматографическую колонну строго в соответствии со следующими шагами. a. снятие уплотнительных винтов у входа в хроматографическую колонну и наблюдение за просачиванием растворителя; b. при просачивании растворителя хроматографическая колонна может быть подсоединена к трубопроводу, чтобы избежать попадания пузырьков; c. В случае просачивания без растворителя, указывающего на то, что этот конец хроматографической колонны вошел в воздух, выходной конец хроматографической колонны может быть прикреплен к входному клапану для промывки хроматографической колонны в обратном направлении в текучей фазе, чтобы исключить воздух внутри колонны. При небольшом расходе 0,2 мл / мин, чтобы пробить хроматографическую колонну, если скорость потока растворителя слишком высока или внезапное повышение давления приведет к снижению производительности колонны; Если в вытекающем растворителе не содержится пузырьков, это означает, что газ из колонны был выброшен, и хроматографическая колонна соединяется в правильном направлении, чтобы пузырьки не могли попасть в колонку.

3) Очистка хроматографических колонн. Чтобы не удерживать измеренные вещества и примеси в хроматографической колонке, хроматографическая колонка должна быть своевременно очищена после каждого анализа проб. Во - первых, необходимо удалить хроматографическую колонну растворителем, обладающим сильной способностью к стирке проб, в качестве примера возьмем антифазный хроматографический анализ, обычно используемый в аналитической работе, поскольку вещество, которое сначала вытекает, является полярным веществом, и в это время 100% метанола или менее полярного растворителя, такого как изопропилен - чистый, тетрагидрофуран и другие менее полярные растворители, должны быть смыты, адсорбируемые в колонне с очень малой полярностью, объем стирающего раствора, как правило, в 20 раз превышает объем колонны. Если проточная фаза представляет собой буферный раствор, то хроматографическую колонну следует промыть дистиллированной водой, чтобы смыть соль из колонны, а затем промыть подходящим растворителем.

Гелевые колонны, используемые в гелевой фильтрационной хроматографии (Gel Filtration Chromatography), обычно используются в буферном растворе в качестве проточной фазы и, конечно же, промываются дистиллированной водой после их использования. Если это непрерывная работа, буферный раствор можно поместить в колонну на ночь, но поддерживать небольшую скорость потока (< 0,5 мл / мин), чтобы предотвратить выделение буферной соли, и если фаза потока содержит галогены, даже на ночь, хроматографические колонны должны быть смыты дистиллированной водой, чтобы предотвратить их коррозию колонны.

4 Хранение хроматографических колонн. Если хроматографическая колонка временно не используется, обратите внимание на следующие моменты при хранении:

a. Краткосрочное размещение в течение нескольких дней должно начинаться с промывки аэрохроматографической колонны растворителем (например, гелевой колонны - дистиллированной водой), а затем два конца хроматографической колонны должны быть запечатаны герметичными винтами.

b. Если хроматографическая колонна не используется в течение длительного времени и не может быть обработана только вышеописанным методом, то для заполнения хроматографической колонны следует использовать растворитель, указанный в инструкции по использованию хроматографической колонны, в противоположной колонке обычно используется метанол, в положительной фазе столб может быть исправлен или гептан, в то время как гелевая колонна не может быть использована в воде, поскольку рост микроорганизмов в колонне снижает эффективность колонны, и в это время для промывания хроматографической колонны следует использовать 0,05% водного раствора Nas (консервант), а затем запечатать хроматографическую колонну. При длительном размещении хроматографической колонны необходимо герметизировать оба конца хроматографической колонны, чтобы предотвратить высыхание наполнителя колонны из - за испарения растворителя, что может привести к серьезному снижению эффективности колонны.

c. Колонна хроматографии должна храниться при комнатной температуре, и если она помещена в окружающую среду ниже 0°C, внутри колонны образуется обледенение, что также приведет к снижению эффекта колонны.

Проблема двойных вершин хроматографии

Длительное использование хроматографической колонны, если в нее войдут примеси, приведет к тому, что фиксированная фаза у входа в хроматографическую колонну будет « сгруппирована» и под действием высокого давления, создаваемого текучей фазой, образует коллапс головки колонны, нормальный хроматографический пик анализируемых компонентов образца станет двойным пиком, и хроматографическая колонна может быть восстановлена следующим образом. Сначала поверните крепежную гайку головки колонны, и тогда вы обнаружите, что фиксированная фаза в головке колонны была сжата и может быть уменьшена более чем на 10 мм в тяжелых случаях. В этом случае мы можем использовать кончик иглы, чтобы вырезать желтую часть слоя проточной фазовой таблицы, и заполнить эту зону оседания той же фиксированной фазой, уплотнить, а затем плотно затянуть крепежный винт хроматографической колонны, ремонт заканчивается. При повторном выборке восстановленной хроматографической колонны хроматографический пик возвращается в норму.

Выше описано несколько аспектов правильного использования хроматографа и методов устранения неполадок. В повседневной работе, если вы можете серьезно относиться к этим вопросам, чтобы проблемы были решены вовремя, это значительно продлит нормальный срок службы прибора и позволит производительность прибора получить максимальную производительность Zui.