Управление и использование среды Promocell является одним из ключей к успеху экспериментов по выращиванию клеток, которые включают в себя хранение, приготовление, стерильные операции, ежедневное обслуживание и многие другие аспекты. Ниже приводятся подробные нормы и меры предосторожности:
I. Управление запасами среды Promocell
1. Контроль температуры
При отсутствии вскрытия: хранится в холодильнике (охлажденном) с температурой 2°C до 8°C в соответствии с требованиями инструкции, чтобы избежать замораживания, которое приводит к дегенерации ингредиентов или осаждению выделения. Некоторые специальные среды могут потребовать светонепроницаемого сохранения (например, с сывороткой или светочувствительными добавками).
После вскрытия: бутылки для краткосрочного использования необходимо протирать и дезинфицировать 75% алкоголя и как можно скорее положить обратно в холодильник; Оставшиеся среды, которые не используются в течение длительного времени, должны быть маркированы датой вскрытия, при этом предпочтение следует отдавать старым партиям для снижения риска разложения.
Примечание: Повторное замораживание и таяние повреждают активность фактора роста, запрещается разбрасывать большую упаковку после многократного размораживания! Рекомендуется в соответствии с экспериментальными потребностями упаковать в небольшие трубки для замораживания и хранения (- 20°C), при использовании одностороннего таяния для получения.
2. Мониторинг срока действия
Строго соблюдая срок действия маркировки упаковки, просроченные продукты не могут продолжать использоваться, даже если они не исчерпаны. Если вы обнаружите аномальный цвет, мутность или увеличение осаждения, заранее утилизируйте.
Для питательных сред, в которые были добавлены антибиотики (например, пенициллин / стрептомицин), необходимо уделять больше внимания срокам годности, поскольку эффективность антибиотиков со временем снижается.
3. Меры по борьбе с загрязнением
Зона хранения предназначена для хранения питательных сред, вдали от летучих химических веществ, сильнокислых щелочей и других загрязнителей. Различные виды питательных сред размещаются отдельно, чтобы избежать перекрестной путаницы.
Регулярно очищайте холодильники, выбрасывайте заброшенные контейнеры и дезинфицируйте полки, чтобы предотвратить размножение плесени, загрязняющей запасы.
Подготовка среды Promocell до ее использования
1. Предварительное нагревание и равновесие
После извлечения из холодильника его помещают при комнатной температуре, чтобы согреться примерно до 37°C (для клеток млекопитающих), или настраивают на подходящую температуру в зависимости от типа клетки - мишени. Можно нагреваться непосредственно в ванной, но избегать сильных потрясений, создающих пузырьки.
Перед использованием аккуратно перемешивайте несколько раз, чтобы обеспечить равномерное распределение добавок (в частности, питательная среда, содержащая сыворотку или карбонат натрия, легко расслаивается).
2. Добавление дополнительных компонентов
Сыворотка / FBS: Сыворотка коровьего скота должна быть инактивирована после добавления в требуемом соотношении (обычно от 5% до 20%), обратите внимание, что различия в производительности сыворотки разных партий могут повлиять на согласованность результатов эксперимента.
Двойной раствор: если базовая среда не содержит антибиотиков, добавьте 1 мл смеси пенициллина на 100 мл (конечная концентрация около 100 U / мл).
Другие факторы: нестабильные ингредиенты, такие как глутамин и пиретонат натрия, должны быть установлены до их использования, чтобы избежать длительного воздействия.
Проверка калибровки pH
Используйте прецизионный pH - метр, чтобы проверить, соответствует ли скорректированная кислотно - щелочная степень целевому диапазону. Можно использовать естественный баланс буферной системы внутри инкубатора CO или микрокапель с регулировкой NaOH / HCl.
Сравнительный тест старых и новых сред: наблюдение за изменением цвета индикатора, чтобы определить, требуется ли дальнейшая настройка.
III. Инструкции по стерильности среды Promocell
1. Операции в шкафах биобезопасности
Все операции, связанные с открытыми отверстиями, должны выполняться в ламинарном сверхчистом рабочем столе, включая такие этапы, как инъекция, перенос жидкости, смешивание и т.д. ультрафиолетовое облучение в течение 30 минут перед операцией и включение вентилятора в течение не менее 5 минут для рассеивания остатков озона.
Носите соответствующие средства индивидуальной защиты (лабораторные костюмы, перчатки, маски), чтобы уменьшить риск искусственного введения загрязнения.
2. Предотвращение микробного загрязнения
Запрещается прикасаться непосредственно к внутренней части отверстия бутылки рукой, наклонять тело бутылки при сбросе, чтобы жидкость текла по стенке, избегая вертикального вливания, чтобы вызвать брызги. Конец соломинки * не должен соприкасаться с неиспользованной жидкой частью бутылки.
Сразу после каждого снятия затягивайте крышку бутылки и вытирайте наружную поверхность 70% алкоголя, прежде чем вернуться. Предполагаемая загрязненная среда должна быть немедленно стерилизована под высоким давлением.
3. Необходимость фильтрации и стерилизации
В случае самодельных питательных сред или добавок свежих ингредиентов их можно использовать только после фильтрации и стерилизации фильтром 0,22 мкм. Продаваемые на рынке предварительно смешанные питательные среды, как правило, стерилизованы, но по - прежнему рекомендуется проводить стерильные испытания при однократном использовании (например, метод нанесения пластин для подтверждения роста без примесей).