* 1 - Микробиологический отбор проб: поскольку многие микроорганизмы могут многократно расти на пластинах агара, первым шагом является поиск правильных условий для культивирования. Простая и распространенная технология выращивания клеток на планшетах агара позволяет легко готовить образцы. Например, бактерии культивируются в квадранте разной плотности клеток на пластине агара в течение 16 - 24 часов, что дает очень надежные результаты. Микробы собираются только из третьего квадранта. Исследование показало, что ключом к успеху метода является стандартизация условий сбора и последовательность роста бактерий на пластинах агара. Также могут быть сделаны некоторые улучшения (например, переход на жидкую среду или изменение времени / температуры культивирования). Однако необходимо обеспечить, чтобы все измерения проводились в одинаковых условиях для получения достоверных результатов.

2 - Методы бактериометрии: Методы, используемые для идентификации микроорганизмов, требуют простоты и высокой повторяемости. Когда микробный раствор медленно высыхает, микробные клетки производят твердые биологические мембраны. Оптимизируя этот процесс, была получена простая в эксплуатации процедура подготовки образцов, которая удовлетворяет требованиям к воспроизводимости для инфракрасных измерений. Инфракрасный свет проникает в биологические мембраны и поглощается различными молекулярными частями, присутствующими в клетках, создавая химические отпечатки пальцев, характерные для каждого из измеренных штаммов.

Что касается микробиологической идентификации FT - IR, то нас больше всего беспокоит точность результатов, ключ к которой зависит от качества референтной спектральной библиотеки. Спектральная библиотека микроорганизмов отличается от общей, и для обеспечения надежности результатов необходимо создать систематизированную библиотеку в стандартизированных условиях.

Во - первых, необходимо обеспечить многократное культивирование микроорганизмов. Культивная среда, условия культивирования (например, время, температура) и предварительная обработка образцов оказывают влияние на инфракрасный спектр, поэтому эти условия требуют создания стандартизированных рабочих протоколов.

Во - вторых, на инфракрасную спектрограмму влияют неоднородность и изменчивость в процессе предварительной обработки образцов (например, количество образцов, сухость мембраны и т.д.), а также измерительные факторы (например, рассеяние света, вызванное частицами образца). Поэтому для обеспечения воспроизводимости инфракрасной спектрограммы требуется несколько измерений одного и того же образца.

В - третьих, достоверность неизвестных образцов, идентифицированных в инфракрасном диапазоне, основана на достоверности спектральной библиотеки референцного спектра. Поэтому эталонные штаммы должны быть идентифицированы с помощью надежных методов. В противном случае неправильная информация в спектральной библиотеке может привести к отклонению окончательных результатов экспертизы. Объединение нескольких значительных спектральных областей позволяет создать базу данных известных штаммов бактерий. Чтобы классифицировать и идентифицировать неизвестные бактерии, спектральная информация сравнивается со справочной базой данных известных бактерий, показывая микроорганизмы, чьи спектральные модели соответствуют неизвестным штаммам. Сходство спектров различных микроорганизмов также может быть графически описано в виде древовидных карт.