CSSTL1 - клеточная фибробластома из легких черепахи

I. СОДЕРЖАНИЕCSSTL1 - клеточная фибробластома из легких черепахиУсловия культивирования

II.CSSTL1 - клеточная фибробластома из легких черепахиОбработка после получения

Реанимационные клеточные методы:Заливание питательной жидкости и запечатывание бутылки после культивирования в хорошем состоянии является лучшим способом транспортировки клеток. Прием клеток.75% Алкоголь опрыскивается целикомКлеткибутылка，Строгая стерильностьпослеПоместите клеточную бутылку в инкубатор.2 - 4 часа для стабилизации клеточного состояния.А.После статической установкиМикроскоп наблюдает за ростом клеток и фотографирует клетки в разных кратностях (лучше40x, 100x, 200x по одной)，Первые три дня фотодаВажная послепродажная основа, не предоставляет фотографии по умолчанию, полученные в хорошем состоянии.

Методы обработки замороженных клеток:Получив клетку, проверьте, есть ли остаток сухого льда в пеноматериале, нетронута ли замороженная трубка или нет оттаивания, если вы обнаружите, что испарение сухого льда или замороженная трубка имеют размораживание и повреждение, пожалуйста, сфотографируйте и свяжитесь с нами вовремя. Если клеточная подпись не связывается с нами в течение трех дней, то по умолчанию она считается хорошей. Если у первой трубки есть проблемы с активностью, пожалуйста, свяжитесь с нами вовремя, технический персонал свяжется с вами, прежде чем восстановить вторую трубку,Проблемы со второй трубой самовольного восстановления возникли без контакта с нами и не будут проданы.

Этапы клеточной культуры

а)Клеточная транскрипцияА.ЕслиНе превышаетПри конвергенции 80% бутилированная питательная жидкость собирается в центробежную трубку, оставляя 5 мл питательной среды, помещается в 37 °C, 5% CO₂Культивирование инкубаторов;Если плотность клетоксверхНа 80% можно проводить культуру передачиА.

Стенографические клеткиЭтапы следующие:

1) отбросить культивирование верхней очистки, промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, не содержащих ионов кальция и магния;

2) Добавьте 1 мл пищеварительного раствора (0,25% Trypsin - 0.53 мм EDTA) в питательную бутылку, поместите в инкубатор, чтобы переварить 1 мин, а затем под микроскопом, чтобы наблюдать пищеварение клетки, если большая часть клетки округляется и выпадает, быстро верните консоль, после нескольких ударов по питательной бутылке добавьте 6 мл, содержащих 10% сывороткиСредаПрекращение пищеварения;

3) мягко вдувать клетки, высасывая их в центрифужную трубку, 1000 rpm центрифуг 5 - 8 мин, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной среды после дутья равномерно;

4) Добавляйте питательную среду в бутылку размером 5 - 6 мл, и клеточную суспензию в новую чашку Петри размером 6 см, содержащую 5 - 6 мл питательной среды или T25, в пропорции 1: 2.

(То естьОдна бутылка T25 для последующей вакцинации до двух бутылок T25 или двух чашек Петри размером 6 см)

Взвешенные клеткиШаги передачи заключаются в следующем:

1.Полупроводниковый метод

Полупроменная обработка, стоячая бутылка для культивирования в инкубатореОколо 1 часа, мягко всасывайте около 3 мл питательной среды, а затем подпитывайте 3 мл питательной среды, если среда медленно обесцвечивается, может быть добавлено непосредственно около 500 ul FBS, передача может быть напрямую пополнена 5 мл питательной среды в двух культурах в бутылках, как правило, такая передача около 3 раз может быть центробежной передачей, удалить мертвые клетки.

2. Центробежный обмен жидкости

При необходимости можно собрать клеточную суспензию в центрифужную трубку.1000rpm， Центробежные 5 мин, отбросить верхнюю очистку, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после повторной суспензии после усвоения, клеточная суспензия в соответствии с соотношением 1: 2 в новую бутылку T25, добавить 6 - 8 мл в соответствии с требованиями инструкции конфигурации новой питательной среды для поддержания жизнеспособности роста клетки, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 ~ 1: 5.

b)Клеточная заморозка:

Когда клетки растут до 80% площади, покрывающей бутылку, они выбрасывают питательную жидкость из бутылки T25 и промывают клетки PBS один раз;

2. Добавить 0,25% пищеварительной жидкости около 1 мл в культурную бутылку, наблюдать под перевернутым микроскопом, ждать, пока клетка рефракционирует круг, добавить 5 мл питательной жидкости, чтобы прекратить пищеварение, а затем мягко вдуть клетку, чтобы она выпала, а затем переместить суспензию в 15 мл центробежной трубки, 1000rpm центрифуга 5 мин;

Оставить очищение, осадочные клетки добавить 1 мл живого яда Яги без сыворотки (Номер груза:C7001）， После смешивания добавляется в криогенную трубку.

Введите замороженные клетки напрямую-Холодильники при температуре 80°C, например, позженадоПеренесите клетки в резервуары с жидким азотом,АНеобходимоХолодильник 80°CчжунХранитьБолее 24 часовещёПеревод в емкости с жидким азотом.

С,Восстановление клеток:

1.Извлечение из жидкого азота клеточного замораживания (ВниманиеноситьзащитаМаска), быстро поместить ее оттаивание в водяной ванне при температуре 37°C до тех пор, пока кристаллизация не будет достигнута в кристаллической трубке замерзания, а затем протирание наружной стенки трубки замерзания 75% спиртом;

2.Переместить клетки из замороженной трубки 5 мл питательной среды в 15 мл центробежной трубки, 1000rpm центрифуга 5 мин;

3.Выбросить, использовать для осаждения5 мл питательных сред, суспензия, вакцинациядоТ25 Культурные бутылки,пускатьв37 ℃, 5% CO₂Культивирование в клетках;

4.На следующий день продолжается культивирование путем замены свежих питательных сред.

Внимание:Некоторые клетки плохо прикреплены к стенке и подвержены выпадению клеток во время транспортировки, что является нормальным явлением. Если вы отделяетесь больше, вы можете собрать все питательные вещества в бутылке в центрифужную трубку,1000rpm центрифуга 5 мин.Сбор очищенПереходная подготовка(Поздние контрастные культуры)Присоединить осаждение1-2ml， Аккуратно дуть, сильно подвешивать, переваривать через 1 - 2 минуты, добавить 5 мл питательной среды, чтобы прекратить реакцию. Затем центрифугирование, отбросить очищение, плюс 1 - 2 мл питательной среды тяжелая подвеска. Затем в пропорции 1: 2 проводится передача в бутылках (два T25), пополняется новая среда до 5 - 8 мл / бутылка и, наконец, помещается в 37°C, 5% CO₂Культивирование в ячейках.