Fluo - 8 AM, Cell Permanet Кальциевый ионный флуоресцентный зонд

Fluo - 8 AM, Cell Permanet Кальциевый ионный флуоресцентный зонд

Описание продукта

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity）， Это самый яркий флуоресцентный зонд Ca2 + с длиной волны возбуждения видимого света, который в два раза сильнее, чем Fluo - 4, и в четыре раза сильнее, чем Fluo - 3. Fluo - 8 имеет среднюю степень родства Ca2 +, почти близко Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM）， Используется практически так же, как Fluo - 3 и Fluo - 4. Fluo - 8 не только поддерживает удобные спектральные характеристики Fluo - 3, Fluo - 4, максимальная длина волны возбуждения в сочетании с Ca2 + составляет 490 нм, а максимальная длина волны излучения - 514 нм. Он также обладает улучшенной способностью к загрузке клеток и реакции Ca2 +. Загрузка Fluo - 8 имеет слабую температурную зависимость и хорошо окрашена при комнатной температуре или при инкубации при температуре 37°C, в отличие от Fluo - 3, Fluo - 4 строго требует инкубации при температуре 37°C, что делает его более подходящим для экспериментов HTS High Process. Fluo - 8 имеет широкий спектр применений и совместим со многими клеточными линиями и целевыми образцами без помех сигналов со стороны рецепторов или самих мишеней.

Fluo - 8 может обнаруживать изменения уровня ионов кальция в клетках с помощью лазерного конфокального микроскопа, проточного клеточного измерителя, флуоресцентного маркера, флуоресцентного микроскопа и т.д. Fluo - 8, AM - это производное ацетилметилэфира Fluo - 8, которое обладает проницаемостью клеточных мембран и легко проникает в клетки, просто культивируя их. Попадая внутрь клетки, его эндэстеразы вырезают, чтобы создать Fluo - 8, который не имеет мембранной проницаемости и, таким образом, задерживается в клетке для выполнения соответствующих физиологических функций.

Данная продукция представлена в виде замороженного сухого порошка в небольшой упаковке 50ug, рекомендованная концентрация 1 - 5uM при обнаружении уровня Ca2 + в клетках.

Fluo - 8 AM, Cell Permanet Кальциевый ионный флуоресцентный зонд

Основные характеристики

Синонимы: Fluo-8, AM

молекулярная формулаС:50H50N2O23

Молекулярная масса: 1046.9316

РастворимостьРастворимый в DMSO (1 - 5 мм)

Экс/Эм:: 490 / 514 нм (Ca2 + в сочетании);

Условия хранения:: Поместить в сухое хранение при температуре 20°C, срок действия 1 год.

Fluo - 8 AM, Cell Permanet Кальциевый ионный флуоресцентный зонд

способ применения

А. Приготовьтесь.

1) Приготовление материнской жидкости Pluronic F - 127: 100 мг порошка Pluronic F - 127 (грузовой номер: Cat No. FS0432) Добавлено 500ul DMSO и получено 20% (W / V) материнской жидкости. Процесс растворения требует нагрева 20 - 30мин при 40–50°С. Раствор сохраняется при комнатной температуре без охлаждения. При наличии кристаллизации можно повторно разогреть раствор без ущерба для использования.

2）HHBS BUFFER(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH7.3) Или другой физиологический буфер.

Шаг действия B

1) Растворить Fluo - 8 с помощью безводных DMSO, AM для получения 1 - 5 мм жидкости для хранения, или взять хорошо оборудованную жидкость для хранения Fluo - 8, AM для регенерации комнатной температуры. (Например, если материнская жидкость состоит из 4 мм, необходимо добавить 11.9ul безводный DMSO в 50ugFluo - 8, AM).

2) Рабочий раствор, разбавленный до 1 - 10УМ с HHBS или другими физиологическими буферными жидкостями Fluo - 8, AM + DMSO, заранее добавляется в соответствующее количество раствора Pluronic F - 127 на 20%, делая его конечную концентрацию 0,02%.

[Примечание (1)]: Fluo - 8, рекомендуемая концентрация нагружения для применения AM в большинстве клеток составляет 4 - 5 УМ, конкретная концентрация использования должна быть оптимизирована в соответствии с требованиями эксперимента. Чтобы избежать клеточной токсичности, вызванной чрезмерной нагрузкой, рекомендуется максимально использовать низкую концентрацию зонда zui на основе полученных результатов.

[ПРИМЕЧАНИЕ (2)]: Fluo - 8, рабочая жидкость AM должна использоваться в настоящее время, избегая многократного замораживания.

[Примечание (3)]: Pluronic F - 127 предотвращает Fluo - 8, где концентрация AM в растворе приводит к лучшему проникновению зонда в клетку. Тем не менее, Pluronic F - 127 снижает стабильность Fluo - 8, AM, поэтому рекомендуется добавлять только при приготовлении рабочей жидкости и не рекомендуется добавлять резервуарную жидкость для длительного хранения.

3) [необязательно] Если клетка содержит органический анионный транспортер, пропилсульфосу (Probenecid, 1 - 2,5 мМ) или, сульфуридон (Sulfinpyrazone, 0.1 - 0.25 мМ) может потребоваться добавить в клеточную культурную базу, чтобы уменьшить утечку деэтерированных зондов.

[Примечание (1)]: Резервуары для пропилсульфосу или сульфпиридона являются довольно щелочными, поэтому после добавления в питательную среду необходимо скорректировать pH.

4) Добавьте в клетку готовый Fluo - 8, AM рабочий раствор, в зависимости от количества, которое покрывает клетку. 37°C или инкубация при комнатной температуре 20–60 мин.

[ПРИМЕЧАНИЕ (1)]: Что касается времени инкубации, если первый ci не может быть определен в ходе эксперимента, рекомендуется сначала инкубация 30 мин, чтобы увидеть эффект флуоресценции; Если клетки умирают больше, время должно быть соответствующим образом сокращено; Если интенсивность флуоресценции слишком слаба, правильно продлить время.

[Примечание (2)]: Снижение температуры загрузки зонда может снизить феномен секуляризации зонда.

5) Отсасывает красильный рабочий раствор и заменяет его HHBS или другим физиологическим буфером (при необходимости, буфером, содержащим ингибиторы транспортера, такие как 2,5 мМ пропилсульфоновой кислоты) для удаления избыточных зондов.

6) Обнаружение с помощью соответствующих приборов, таких как лазерная конфокальность, проточный цитометр, флуоресцентный энзимометр и т.д., с длиной волны Ex / EM = 490 / 520 нм.

[Примечание (1)]: Fluo - 8, после того, как АМ попадает в клетку, разлагается эстеразой, чтобы сформировать Fluo - 8, который не задерживается в цитоплазме в форме валентной связи. Поэтому нельзя фиксировать живые клетки, загруженные красителем, а затем проверять уровень Ca2 +.

Меры предосторожности

1) Флуоресцентные красители равномерно в проблеме закалки, пожалуйста, обратите внимание, насколько это возможно, чтобы избежать света, чтобы замедлить закалку флуоресценции.

2) Ацетилоксиметилэфиры (АМ) легко всасываются, после удаления из холодильника помещайте в сухую среду при комнатной температуре после открытия. Из - за небольшого количества реагента, перед вскрытием, пожалуйста, ненадолго центрифугируйте его, чтобы убедиться, что порошок попадает на дно трубки.

3) Fluo - 8, AM затвердевает при более низких температурах, таких как 4°C, ледяная ванна и т.д., и прилипает к дну центробежной трубы, стенке трубы или крышке трубы, может использоваться при температуре 20–25°C от момента размножения до полного растворения.

4) Fluo - 8, AM для первого использования, рекомендуется, чтобы жидкость для хранения в настоящее время используется, упакована в одноразовое количество, строго до - 20°C уплотнения сухого замораживания, чтобы предотвратить сырость. Чтобы обеспечить хороший экспериментальный эффект, используйте его как можно быстрее.

5) Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, наденьте лабораторный костюм и используйте одноразовые перчатки.