Ограниченная клеточная линия HMEC1

Ограниченная клеточная линия эндотелиальных микрокровеносных клеток человека HMEC1Условия культивирования

II.Обработка после получения

Реанимационные клеточные методы:Заливание питательной жидкости и запечатывание бутылки после культивирования в хорошем состоянии является лучшим способом транспортировки клеток. Клетки распыляют 75% алкоголя.Клеточная бутылка,Строгая стерильностьпослеПоместите клеточную бутылку в инкубатор на 2 - 4 часа, чтобы стабилизировать состояние клетки.. Постстатический микроскоп наблюдает за ростом клеток и сохраняет клетки с различными кратными фотографиями (лучше всего 40x, 100x, 200x по одному), первые три дня фотографии являются важной послепродажной основой, не предоставляет фотографии по умолчанию, полученные в хорошем состоянии.

Методы обработки замороженных клеток:Получив клетку, проверьте, есть ли остаток сухого льда в пеноматериале, нетронута ли замороженная трубка или нет оттаивания, если вы обнаружите, что испарение сухого льда или замороженная трубка имеют размораживание и повреждение, пожалуйста, сфотографируйте и свяжитесь с нами вовремя. Если клеточная подпись не связывается с нами в течение трех дней, то по умолчанию она считается хорошей. Если у первой трубки есть проблемы с активностью, пожалуйста, свяжитесь с нами вовремя, технический персонал свяжется с вами, прежде чем восстановить вторую трубку,Проблемы со второй трубой самовольного восстановления возникли без контакта с нами и не будут проданы.

Этапы клеточной культуры

а)Клеточная транскрипция: ЕслиНе превышая 80% сходимости, бутилированная питательная жидкость собирается в центробежную трубку, оставляя 5 мл питательной среды, помещается в 37°C, 5% CO₂Культивирование инкубаторов; Если плотность клеток превышает 80%, можно проводить культуру передачи.

Стенографические клеткиЭтапы следующие:

1) отбросить культивирование верхней очистки, промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, не содержащих ионов кальция и магния;

2) Добавьте 1 мл пищеварительного раствора (0,25% Trypsin - 0.53 мм EDTA) в питательную бутылку, поместите в инкубатор, чтобы переварить 1 мин, а затем под микроскопом, чтобы наблюдать пищеварение клетки, если большая часть клетки округляется и выпадает, быстро верните консоль, после нескольких ударов по питательной бутылке добавьте 6 мл, содержащих 10% сывороткиСредаПрекращение пищеварения;

3) мягко вдувать клетки, высасывая их в центрифужную трубку, 1000 rpm центрифуг 5 - 8 мин, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной среды после дутья равномерно;

4) Добавляйте питательную среду в бутылку размером 5 - 6 мл, и клеточную суспензию в новую чашку Петри размером 6 см, содержащую 5 - 6 мл питательной среды или T25, в пропорции 1: 2.

(То есть одна бутылка T25 была вакцинирована до двух бутылок T25 или двух чашек Петри размером 6 см)

Взвешенные клеткиШаги передачи заключаются в следующем:

1.Полупроводниковый метод

Полупроводная обработка, вертикальная питательная бутылка в инкубаторе статическая около 1 часа, мягко всасывает около 3 мл питательной среды, а затем снабжает 3 мл питательной среды, если среда медленно обесцвечивается, может быть добавлена непосредственно около 500 ul FBS, передача может быть напрямую пополнена 5 мл питательной среды в две питательные бутылки, как правило, передача 3 раз может быть центробежной передачи, удалить мертвые клетки.

2. Центробежный обмен жидкости

Если требуется флакон, клеточная суспензия может быть собрана в центробежной трубке 1000 rpm, центрифуга 5 мин, отброшена в верхнюю очистку, после добавления 1 - 2 мл питательной жидкости после повторного взвешивания, клеточная суспензия делится на новую бутылку T25 в соотношении 1: 2, добавляется 6 - 8 мл новой питательной среды, настроенной в соответствии с требованиями инструкции для поддержания жизнеспособности роста клетки, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 ~ 1: 5.

b)Клеточная заморозка:

Когда клетки растут до 80% площади, покрывающей бутылку, они выбрасывают питательную жидкость из бутылки T25 и промывают клетки PBS один раз;

2. Добавить 0,25% пищеварительной жидкости около 1 мл в культурную бутылку, наблюдать под перевернутым микроскопом, ждать, пока клетка рефракционирует круг, добавить 5 мл питательной жидкости, чтобы прекратить пищеварение, а затем мягко вдуть клетку, чтобы она выпала, а затем переместить суспензию в 15 мл центробежной трубки, 1000rpm центрифуга 5 мин;

3. Оставляя очищение, осаждающие клетки добавляют 1 мл бионессывороточной замороженной жидкости Яджи (номер груза: C7001), смешивают и добавляют в замороженную трубку.

Поместите замороженные клетки непосредственно в холодильник - 80°C, если позже клетки будут переведены в резервуар с жидким азотом,Требуется холодильник при температуре 80°CчжунХранить более 24 часовОпять в емкости с жидким азотом.

С,Восстановление клеток:

Извлечь из жидкого азота трубку для замораживания клеток (обратите внимание на защиту)Маска), быстро поместить ее оттаивание в водяной ванне при температуре 37°C до тех пор, пока кристаллизация не будет достигнута в кристаллической трубке замерзания, а затем протирание наружной стенки трубки замерзания 75% спиртом;

2.Переместить клетки из замороженной трубки 5 мл питательной среды в 15 мл центробежной трубки, 1000rpm центрифуга 5 мин;

3.Оставить очистить, осадить 5 мл питательной среды, подвесить, вакцинироватьДо T25 Культурные бутылки, положитьПри 37°C, 5% CO₂Культивирование в клетках;

4. На следующий день продолжается культивирование путем замены свежих питательных сред.

Внимание:Некоторые клетки плохо прикреплены к стенке и подвержены выпадению клеток во время транспортировки, что является нормальным явлением. Если вы отделяетесь больше, вы можете собрать всю питательную жидкость в питательной бутылке в центрифужную трубку, 1000 rpm центрифуга 5 мин,Сбор очищенПереходная подготовка(Поздние контрастные культуры)Осадок добавляют 1 - 2 мл, мягко дуют, сильно подвешивают, переваривают через 1 - 2 минуты, добавляют 5 мл питательной среды, чтобы прекратить реакцию. Затем центрифугирование, отбросить очищение, плюс 1 - 2 мл питательной среды тяжелая подвеска. Затем в пропорции 1: 2 проводится передача в бутылках (два T25), добавляется новая питательная среда до 5 - 8 мл / бутылка и, наконец, помещается37 ℃, 5% CO₂Культивирование в ячейках.

Приглашаем новых клиентов заказать:Ограниченная клеточная линия HMEC1