iTRAQ TMT (количественная оценка изотопных маркеров)

Количество изотопных маркеров:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags) Метод количественной полипептидной внешней маркировки, разработанный, соответственно, компаниями AB Sciex и Thermo, позволяет использовать различные изотопные реактивы для маркировки белковых полипептидных N - концевых или лизиновых боковых цепных групп, а реагенты различной молекулярной массы маркируют образцы из разных источников для достижения сравнения различных групп белков между продуктами.

Экспериментальные этапы iTRAQ:

1. Подготовка проб: количественный расчет концентрации белка в пробах путем проведения замера проб;

2. Восстановление белка алкилирование и ферментативное разложение: каждая группа образцов получает по 100 мкг в соответствии с требованиями набора реагентов iTRAQ, а после секвенирования раствора поджелудочной протеазы с помощью ферментативного решения ультрафильтр центрифужно собирает ферментативный пептидный сегмент;

Маркировка iTRAQ: сбалансировать реагент ITRAQ до комнатной температуры, растворить его 150 мкл изопропанола, взять участок ферментативных пептидов, добавить реагент iTRAQ после реакции при комнатной температуре 2 ч, добавить реакцию прекращения воды, равномерно смешать различные группы образцов, вакуумные замороженные сухие образцы:

Анализ LC - MS - MS: последовательная масс - спектрометрия с использованием Q - Exactive Orbitrap от Thermo.

5. Обработка данных и почтовый анализ

Результаты показывают:

весьситуацияАналитическая термограмма кластеров

* 0 Статистический анализ количества белков

Экспериментальный цикл и критерии доставки

1.Экспериментальный цикл: 4 - 6 недель

2. Стандарты доставки: количественные результаты по белкам, результаты идентификации, исходные данные масс - спектрометрии, результаты биосигнального анализа (анализ G0). Анализ KEGG и т.д.)

Информация, подлежащая подтверждению

1. Виды образцов

Тип образца (ткань или клетка или кровь)

3. Количество выборки и ее группирование

4. Аналитические требования

Литература

XuX, Zhu Q, Zhang R, et al. Протеомический анализ на основе ITRAQ острой травмы легких, индуцированной олеиновой кислотой в

Мыши[J]. Клеточная физиология и биохимия, 2017: 1949-1964.

QuZ, GaoF, LiL и др. Кватативный протеомный анализ дифференциально экспрессируемых мембранных белков без маркировки

легочных альвеолярных макрофагов, инфицированных высокопатогенным репродуктивным и дыхательным синдромом свиней

Вирус и его ослабленный штамм [J]. Протеомика, 2017:1700101.

Набор ELISA бесплатно для тестирования и экспериментов