JC - 1 Набор для определения потенциала митохондриальной мембраны

Описание продукта

JC-1Набор для определения потенциала митохондриальной мембраны(Комплект анализа потенциала митохондриальной мембраны JC-1) Является одним изJC-1Для флуоресцентных зондов наборы реагентов для быстрого и чувствительного обнаружения изменения потенциала клеток, тканей или очищенных митохондриальных мембран. Снижение потенциала митохондриальной мембраны является знаковым событием на ранней стадии клеточного апоптоза. Таким образом, этот набор может быть использован для раннего обнаружения цитопатии.

JC-1Широко используется для определения потенциала митохондриальной мембраны.АПсмИдеальный флуоресцентный зонд.JC-1Красители накапливаются в митохондриях в зависимости от потенциала и могут использоваться для обнаружения потенциала клеток, тканей или очищенных митохондрий. В нормальных митохондриях,JC-1В митохондриальной матрице образуются полимеры, которые излучают сильную красную флуоресценцию (Ex=585 нм, Em=590 нм); Нездоровые митохондрии из - за снижения или потери мембранного потенциала,JC-1Может существовать только в виде мономера в плазме, создавая зеленую флуоресценцию (Ex=514 нм, Em=529 нмВ)).JC-1Не только для качественного обнаружения, так как изменения цвета могут очень непосредственно отражать изменения потенциала митохондриальной мембраны. Он также может быть использован для количественного определения, так как степень деполяризации митохондрий может проходить через красный/Соотношение интенсивности зеленой флуоресценции измеряется.

Состав продукции

сохранитьИ транспортА.-20При температуре Цельсия не допускается засыхание, по крайней мере1Действует с 1997 года. Транспорт:Холодный мешоктранспорт

способ применения JC - 1 Набор для определения потенциала митохондриальной мембраны

1. JC-1Приготовление красящего раствора

Для шестипористой пластины этот комплект может быть обнаружен100Всего образцов. Каждое отверстие необходимоJC-1Количество красителей для работы1 млПрочая посуда для выращивания JC-1Количество красителей и так далее; Для клеточной суспензии каждый 50...100Миллионы клеток нужны 0,5 мл JC-1Крашенная рабочая жидкость. Взять нужное количество JC-1（200 х) В соответствии с каждым50 мкл JC-1（200 х) Присоединение 8 млПропорциональное разбавление сверхчистой воды JC-1. Сильные сотрясения полностью растворяются и смешиваются JC-1. Затем присоединиться 2 мл JC-1Крашеный буфер (5 х) После смешивания является JC-1Крашенная рабочая жидкость.

[Внимание]:Сначала надо JC-1（200 х) После полного растворения и смешивания с использованием сверхчистой воды (поставляемой в комплекте реагентов), можно добавлять JC-1Крашеный буфер (5 хВ)). Не надо сначала готовить. JC-1Крашеный буфер (1 х) Повторное присоединение JC-1（200 х), таким образом JC-1Будет трудно полностью раствориться, что серьезно повлияет на последующие тесты.

2. Положительный контраст

КККП(10 ммРекомендуется нажать 1:1000 Доля добавляется к клеточной питательной жидкости, разбавляется до 10 мкмОбработка клеток 20 минут. Затем загружается следующим образом. JC-1Проверьте потенциал митохондриальной мембраны. Для большинства клеток, как правило, 10 мкм ККППобработка 20 минутПотенциал мембраны задней митохондрииВанкуанПотеря,JC-1После окрашивания следует наблюдать зеленую флуоресценцию; Нормальные клетки проходят JC-1После окрашивания должна быть показана красная флуоресценция. Для определенных клеток,КККПКонцентрация и время действия могут

Различаются и должны решаться самостоятельно со ссылкой на соответствующую литературу.

3. Для взвешенных клеток

1）取10...60 Миллионы клеток, висящих 0,5 млВ клеточной питательной жидкости клеточная питательная жидкость может содержать сыворотку и фенолкрасный цвет.

2) Присоединение0,5 мл JC-1Крашенная рабочая жидкость, несколько раз перемешивается вверх дном. Клеточная инкубация. 37Инкубация при температуре20 минутА.

3В течение инкубационного периода, в соответствии с каждым 1 мл JC-1Крашеный буфер (5 х) Присоединение 4 млДоля дистиллированной воды, приготовленной в умеренных количествах JC-1Крашеный буфер (1 х) и поместить в ледяной бане.

4)37После окончания инкубации,600×г4Центрифуга при температуре °С3...4 минутыОсаждение клеток. Бросьте очищение, обратите внимание, чтобы не высасывать клетки по возможности.

5) Использование JC-1Крашеный буфер (1 х) Мойка 2 Подпункт: Присоединение 1 мл JC-1Крашеный буфер (1 х(Перевисящие клетки,600×г4Центрифуга при температуре °С3...4 минутыОсаждает клетки, выбрасывает очищение. Повторное присоединение 1 мл JC-1Крашеный буфер (1 х(Перевисящие клетки,600×г4Центрифуга при температуре °С3...4 минутыОсаждает клетки, выбрасывает очищение.

6(Использовать в умеренных количествах) JC-1Крашеный буфер (1 хПосле повторного подвешивания его можно наблюдать с помощью флуоресцентного микроскопа или лазерного конфокального микроскопа, а также с помощью флуоресцентной спектроскопии. Фотометрическое обнаружение или проточный цитометрический анализ.

4. Для стенных клеток

[Внимание]:: Для клеток, прикрепленных к стенке, если вы хотите использовать флуоресцентный спектрофотометр или проточный цитометр для обнаружения, вы можете сначала собрать клетки, после повторной подвески со ссылкой на метод взвешенных клеток для тестирования.

1Для одного отверстия в шестипористой пластине высасывается питательная жидкость, которая при необходимости доступна в соответствии с конкретными экспериментами ПБСИли другой подходящий раствор для промывания клеток один раз, добавить 1 млКлеточная питательная жидкость. Клеточная питательная жидкость может содержать сыворотку и фенолкрасный цвет.

2) Присоединение 1 мл JC-1Окрашивающая рабочая жидкость, полностью смешанная. Клеточная инкубация. 37Инкубация при температуре20 минутА.

3В течение инкубационного периода, в соответствии с каждым 1 мл JC-1Крашеный буфер (5 х) Присоединение 4 млДоля дистиллированной воды, приготовленной в умеренных количествах JC-1Крашеный буфер (1 х) и поместить в ледяной бане.

4)37После инкубации при температуре C высасывается верхняя очистка,JC-1Крашеный буфер (1 х) Мойка 2 Восемь пунктов.

5) Присоединение 2 млКлеточная питательная жидкость, питательная жидкость может содержать сыворотку и фенолкрасный цвет.

6Наблюдение под флуоресцентным микроскопом или лазерным конфокальным микроскопом.

5. Для очищенных митохондрий

1(Готовится) JC-1Повторное использование красящего раствора JC-1Крашеный буфер (1 х) Разбавление 5 В два раза больше.

2)0.9mL 5Двойное разбавление JC-1Добавить в красильный раствор 0,1 млОбщее количество белка составляет 10...100 мкгОчищенные митохондрии.

3Проверка с помощью флуоресцентного спектрофотометра или флуоресцентного энзимометра: после смешивания сканирование с помощью флуоресцентного спектрофотометра (время сканирование), длина волны возбуждения для485 нмДлина волны излучения составляет 590 нм. Если используется флуоресцентный энзимометр, длина волны возбуждения не может быть установлена как 485 нмКогда, может быть475...520 нмУстановите длину волны возбуждения в диапазоне. Кроме того, можно сослаться на следующие шаги 6 Длина волны в настройках для флуоресценции.

4Наблюдение с помощью флуоресцентного микроскопа или лазерного конфокального микроскопа: метод соответствует следующим шагам 6А.

6. Флуоресцентные наблюдения и анализ результатов

обнаружение JC-1При однократном освещении можно установить 490 нмУстановка излучающего света как 530 нм& Проверка JC-1При использовании полимеров можно настроить возбуждающее свечение на 525 нмУстановка излучающего света как 590 нмА.

[Примечание1):: При измерении флуоресценции здесь нет необходимости устанавливать возбуждающую и излучающую свет на максимальную длину волны возбуждения и максимальную длину волны излучения. При наблюдении с помощью флуоресцентной микроскопии JC-1В полимерах часто используется для обнаружения йодида пропилена или Cy3Используется стандартный полосовой фильтр. обнаружение JC-1Мономеры часто можно обнаружить. ФИТКили ГФПСтандартный полосовой фильтр. Появление зеленой флуоресценции указывает на снижение потенциала митохондриальной мембраны, и клетка, вероятно, находится на ранней стадии клеточного апоптоза. Появление красной флуоресценции говорит о том, что потенциал митохондриальной мембраны относительно нормальный, а состояние клеток относительно нормальное.

Меры предосторожности

1)JC-1（200 х) В4При более низких температурах, таких как °C, ледяная ванна и т.д., она застывает и прилипает к дну центробежной трубы, стенке трубы или крышке трубы, может20...25При температуре водяной ванны при температуре от одного мгновения до полного таяния.

2) Полностью загружены JC-1Последующее использование JC-1Крашеный буфер (1 хПри стирке, чтобы JC-1Крашеный буфер (1 х) Сохранить 4Около °C, в это время эффект стирки лучше.

3)JC-1После того, как зонд загружается и стирается, старайтесь 30 минутВнутри завершено последующее тестирование. Перед тестированием необходимо сохранить ледяную ванну.

4(Не братьJC-1Крашеный буфер (5 х(Готовится полностьюJC-1Крашеный буфер (1 х)，Этот комплект должен быть использован непосредственно во время использования.JC-1Крашеный буфер (5 хВ)).

5Если обнаружить JC-1Крашеный буфер (5 хЕсть осадки, которые должны быть полностью растворены, чтобы использовать, может быть в 37Температура при температуре °С способствует растворению.

6)КККПИнгибиторы цепи передачи митохондрий электронов, токсичные, обратите внимание на осторожную защиту.

7Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, наденьте лабораторный костюм и используйте одноразовые перчатки.

сопутствующие товары

JC - 1JC - 1 Частичные ссылкиJC - 1 Набор для определения потенциала митохондриальной мембраны

(1) [IF=9.7]Вклад ферроптоза и двойных функций GPX4 в прогрессирование остеоартритаЭбиоМедицина Опубликовано:27 января 2022 DOI: https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103847

Исходные данные этой диаграммы взяты из литературы (1).

(2) [IF=11.4]ВДР регулирует митохондриальную функцию в качестве защитного механизма от повреждения почечных трубчатых клеток у диабетических крыс. -Редокс Биология -том 70, апрель 2024, 103062.V

Исходные данные этой диаграммы взяты из литературы (2).

(3)[IF=11.1]LONP1 нацелен на HMGCS2 для защиты митохондриальной функции и ослабления хронического заболевания почек.EMBO Моль Мед(2023)15: e16581https://doi.org/10.15252/emmm.202216581

иммунофлуоресцентный конпозиционный анализ mPTC (выше, шкала: 20um) и почечной ткани человека (ниже, шкала: 200um) в LONP1, HMGCS2 и митохондрии.

Исходные данные этой диаграммы взяты из литературы (3).