Флуоресцентные красители HistoBright

Флуоресцентные красители, позволяющие визуализировать локальную структуру тканей

HistoBright

HistoBright - это флуоресцентный пигмент с реакцией на окружающую среду с двойным фотонным возбуждением, который обладает отличной проницаемостью тканей и изменяет флуоресцентные свойства в соответствии с локальной структурой ткани, что позволяет визуализировать ткани с высоким контрастом. В сочетании с прозрачной обработкой тканей и использованием двухфотонного лазерного микроскопа можно проводить глубокие наблюдения и анализ пространственной структуры тканевых блоков.

※Этот продукт основан на результатах исследований, проведенных в Университете Кодзи и Университете Эхимы, и производится и продается Funakoshi (растение).

※Данный продукт предназначен исключительно для исследований и не может использоваться для целей, не связанных с исследованиями.

HistoBright является экологически чувствительным флуоресцентным красителем, который отображает широкий диапазон длин волн в зависимости от полярности растворителя. При использовании в прозрачных тканях флуоресценция изменяется в ответ на микросреду в организации, а затем в сочетании с двойным светом.Сублазерный микроскоп позволяет четко наблюдать структуру ткани.

Традиционные методы анализа организационной структуры и новые трехмерные методы анализа организационной структуры

Традиционный структурный анализ тканей достигается путем окрашивания тканей цветными красителями, такими как метод окраски сумозина - ирона (HE). Использование этих цветных красителей затрудняет окрашивание тканевых блоков в целом, как правило, после тонкого разреза, прежде чем наблюдать. Но тонкий срез может легко потерять трехмерную информацию о структуре организации, поэтому для воспроизведения трехмерной структуры требуется большое количество срезов.

HistoBright - это новый экологически чувствительный флуоресцентный краситель, синтезированный доктором Ренцзыянфу из Департамента образования и исследований Университета Кодзи (соединение в оригинальной статье называется PC), который в настоящее время разрабатывается доктором Кендзи Мотомурой, доктором Масахиро Мураками и доктором Кэндзи Каваками из медицинского отдела Университета Айюань для разработки флуоресцентных красителей для трехмерной организационной структуры. HistoBright собирается на биопленке и флуоресценция в зависимости от локальной средыЗелёный свет~ближний инфракрасный светИзменения в широком диапазоне. Поэтому, когда HistoBright применяется к биологическим тканям, он может индуцировать изменения в тонах флуоресценции в соответствии с организационной структурой, что позволяет наблюдать структуру ткани с высоким контрастом. Поскольку HistoBright способен выполнять двухфотонное возбуждение, в дополнение к лазерному конфокальному микроскопу можно наблюдать с помощью двухфотонного лазерного микроскопа. Кроме того, в сочетании с обработкой тканевой прозрачности (в дополнение к методам обезжиривания, которые поддерживают мембранную структуру), использование HistoBright позволяет наблюдать толстые образцы тканей без разрушения структуры ткани (без подготовки тонких срезов), а также глубокое визуализация с помощью двухфотонного лазерного микроскопа для реализации трехмерного структурного анализа ткани.

• Характеристики

• Реакторы для окрашивания мембран, реагирующие на окружающую среду, которые могут проявляться в зависимости от окружающей средыЗелёный свет~ближний инфракрасный светФлуоресцентные свойства. Высокая контрастность локальных узлов может быть достигнута путем определения диапазона длин волн флуоресценции, которые необходимо обнаружить

Структурная визуализация.

•В сочетании с обработкой прозрачности тканей без обезжиривания (например, RapiClear (SunJin Lab), LUCID и т. Д.), глубокий трехмерный анализ организационной структуры.

•Использование поверхностно - активных веществ (Triton X - 100, Tween 20 и т.д.) растворяет липидные мембраны в тканях и может влиять на окрашивание HistoBright, поэтому его использование не рекомендуется. Если необходимо использовать, обсудите условия применения.

•Наблюдения могут проводиться с помощью лазерного конфокального микроскопа (рекомендуемый лазер с возбуждением: 488 нм) или двухфотонного лазерного микроскопа (рекомендуемый лазер с возбуждением: 960 нм).

•При наблюдении с помощью двухфотонного лазерного микроскопа можно в сочетании с визуализацией вторичной гармонической генерации (SHG) наблюдать коллагеновые волокна в незакрашенной ткани при использовании данного реагента.

•После окрашивания и наблюдения с помощью HistoBright можно проводить HE - окрашивание.

♦ Оригинальный текст

Инуэ, К.,и др., J. Mater. Химия.Б.,10(10), 1641～1649 (2022). Синтез и фотофизические свойства нового пиренового красителя с излучением от зеленого до далеко-красного цвета и его применение к изображению клеток человека и тканей кожи. [ПМИД:35194628]

♦Принцип

Спектр возбуждения / излучения

HistoBright - это растворитель, изменяющий свойства флуоресценции в зависимости от молекулярной полярности растворителя (Solvatochromic fluorescent dye). В зависимости от полярности растворителя, флуоресценциязелёный(Низкая полярность) кближний инфракрасный свет(Высокая полярность) Значительные изменения в пределах диапазона.

Изменение спектра флуоресценции в липидной мембранной модели

ХистоБрайт демонстрирует высокую сродство к липидной мембране и различные флуоресцентные свойства в зависимости от фазового состояния липидной мембраны. В отличие от флуоресцентного максимума в липидах упорядоченной фазовой модели Lo (SM) / желчно - твердого спирта (Chol), максимальная длина волны в липидных телах неупорядоченной фазовой модели Ld (DOPC) также была перенесена в диапазон длин волн около 30 нм, а производительность флуоресцентных квантов также снизилась с 0,72 (SM / Chol) до 0,37 (DOPC).

Все эти данные флуоресцентного спектра были предоставлены доктором Ренци Янфу из Университета Кочи.

• Применение данных

Использование двухфотонного лазерного микроскопа для визуализации нормальной ткани кожи человека

После фиксации нормального куска ткани кожи человека с использованием 4% paraformaldehyde / PBS производится 500 мкм среза, а также 76 ч прозрачности ткани (LUCID) и крашения HistoBright (10 мкм). С помощью двухфотонного лазерного микроскопа блоки тканей возбуждаются лазером на 960 нм, соответственно, на 492 нм (SHG:голубой）、500-550 nm（зелёный）、560~593nm（оранжевыйи 593 - 690 нм (красный) Отдел получает соответственно флуоресцентные изображения и производит следующие четыре синтетических изображения.

※ 492 nm（голубойСигналы SHG из коллагеновых волокон в тканях, а не флуоресцентные сигналы из источников HistoBright.

Затем с помощью двухфотонного лазерного микроскопа на оси Z с интервалом в 5 мкм было непрерывно получено 500 мкм изображений, а с помощью программного обеспечения для анализа изображений была выполнена трехмерная сборка для визуализации тонкой структуры тканей кожи человека в трехмерном режиме.

Использование двухфотонного лазерного микроскопа для получения трехмерного изображения прозрачной нормальной ткани кожи человека

После фиксации нормальных сгустков кожи человека с помощью 4% paraformaldehyde / PBS производится 1 - мм срез, который сопровождается обработкой тканевой прозрачности 72 ч (RapiClear, SunJin Lab) *, окрашиванием HistoBright (10 мкМ) и ядерным крашением (Hoechst33342). С помощью двухфотонного лазерного микроскопа блоки тканей возбуждаются лазером на 1100 нм, соответственно, в < 492 нм (SHG:голубой）、500~550 nm（зелёный）、560~593 nm（оранжевыйи 593 - 690 нм (красный) Отдел получает соответственно флуоресцентные изображения и производит следующие четыре синтетических изображения. Основываясь на вышеуказанных условиях, непрерывная съемка с интервалом 5 мкм в направлении оси Z, трехмерная сборка с использованием программного обеспечения для анализа изображений и анимация непрерывных данных.

* Организационные блоки в рамках этого эксперимента были закреплены и не подвергались трансмембранной обработке, которая была непосредственно прозрачна и окрашена.

Полное видео смотрите: labchem.fujifilm - wako.com.cn / product / show / 1646.html

Повторить для крашения

Используйте HistoBright для окрашивания и наблюдения нормальных блоков тканей клеток кожи человека, статических в PBS для удаления прозрачных реагентов. Затем приготовьте тонкие нарезки для окраски he. После подтверждения окраски HistoBright может быть выполнено четкое окрашивание HE.

Крашение под лазерным конфокальным микроскопом и двухфотонным лазерным микроскопом

После фиксации нормального куска ткани кожи человека с использованием 4% paraformaldehyde / PBS производится 0,5 - мм срез, который сопровождается 72 - часовой прозрачностью ткани (RapiClear, SunJin Lab) * и окрашиванием HistoBright (10 мкМ). Затем наблюдения проводились с помощью лазерного конфокального микроскопа (слева: лазер с возбужденным светом 488 нм) и двухфотонного лазерного микроскопа (справа: лазер с возбужденным светом 960 нм). Хотя между двумя изображениями нет существенной разницы, сигналы SHG (коллагеновое волокно), возбужденные двумя фотонами, можно наблюдать под двухфотонным лазерным микроскопом.

* Организационные блоки в рамках этого эксперимента были закреплены и не подвергались трансмембранной обработке, которая была непосредственно прозрачна и окрашена.

Все эти данные были предоставлены доктором Ясуко Каваками из Университета Эхиме.

• Список продуктов