Белая среда мыши 1 β (IL - 1 β) ELISA

1.Тип выборки и сбор:

СывороткаА.Все образцы крови, собранные в сывороточных сепараторах, помещаются при комнатной температуре.0,5 - -2Часы или4℃Ночь, затем1000ХgЦентрифугирование20 Минуты, чтобы очистить, или поместить верхнюю очистку-20℃или-80℃Сохранить, но следует избегать повторного замораживания и таяния.
Плазма кровиА.использоватьЭДТАИли гепарин в качестве антикоагулянта, чтобы взять образец и взять образец после сбора30В течение минуты2 - 8℃ 1000ХgЦентрифугирование15Минуты, чтобы получить очистку, чтобы обнаружить или поместить верхнюю очистку-20℃или-80℃Сохранить, но следует избегать повторного замораживания и таяния.

Организационная симметрия:Предварительное охлаждение.ПБС (0,01 М, рН=7,4)Промыть ткань, удалить остаточную кровь (трещина эритроцитов в симметрии влияет на результаты измерений), после взвешивания разрезать ткань с соответствующим объемомПБС(Как правило, по1: 9Отношение веса к объему, например1 гОбразец ткани соответствует9 мл的ПБСКонкретный объем может быть соответствующим образом скорректирован в соответствии с экспериментальными потребностями и записан. Рекомендуется вПБСДобавьте ингибиторы протеазы) Добавьте стеклянный симулятор, полностью измельчите на льду. Для дальнейшего расщепления тканевых клеток можно провести ультразвуковое дробление равномерного раствора или повторное замораживание и таяние. В конце концов раствор5000ХgЦентрифугирование5 ~ 10Минуты,Их можно проверить,Или поместить выше-20°C или-80Сохранение при температуре Цельсия, но следует избегать повторного замораживания и таянияА.

Клеточный крекингА. Высасывать питательную жидкость, использоватьPBS (0,01 М, pH 7.4) промывает клетки снова. Клетки скребут и добавляют 2 - 5 мл PBS (0,01 м, pH 7.4). Взвешенные клетки могут быть опущены. Собирайте клеточную суспензию, 4 ° C 1000 × g центрифуг 10 мин, отбрасывайте питательную среду и промывайте ее предварительно охлажденным PBS 3 раза. Добавьте умеренное количество предварительно охлажденных PBS или неформатированных клеточных крекингов (добавьте ингибиторы протеазы перед использованием) для тяжелых суспензий клеток, как правило, требуется 150 - 250 мкл тяжелой суспензии PBS для количества клеток в одном отверстии на 6 - пористой пластине. Поместите образец в 20°C или - 80°C, чтобы образец был заморожен, а затем разморозил образец при комнатной температуре, многократно замораживая и оттаивая 3 раза, так что клетка полностью расщепляется, также образец может быть ультразвуковым дроблением для достижения цели крекинга. 4 ° C 10000 × g центрифуга 10 мин, удаление фрагментов клетки, извлечение может быть обнаружено,Или поместить выше-20°C или-80Сохранение при температуре Цельсия, но следует избегать повторного замораживания и таянияА.

Клеточные культуры очищаются или другие биологические образцы:Пожалуйста1000ХgЦентрифугирование20Минуты, чтобы получить очистку, чтобы обнаружить или поместить верхнюю очистку-20°C или-80При температуре °С сохраняется, но следует избегать повторного замораживания и таяния.

2.Сохранение и стабильность выборки

Образец находится2 - 8℃В условиях можно хранить72h， в- 20℃или-80℃Можно хранитьШесть месяцев ивыше. После сбора образцов, не один раз после завершения тестирования, пожалуйста, распределите замораживание по количеству одного использования, чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания.

Шаги:

1. Номер: Порядок нумерации образцов по микроотверстиям с отрицательным контрастом на каждую пластину2 отверстия, 2 отверстия с положительным контролем, 1 отверстие с пустым контролем (пустое контрольное отверстие без образцов и реагентов с ферментным маркером, остальные шаги одинаковы)А.

2. Плюс: соответственно, в инь и положительную контрольные отверстия добавить отрицательный, положительный контроль50μl。 Затем в отверстие для проб, подлежащих измерению, добавляется разбавленная жидкость образца 40 мкл, а затем еще 10 мкл для проб, подлежащих измерению. Добавьте образец к нижней части отверстия ферментативной пластины, старайтесь не касаться стенки отверстия, мягко встряхните и перемешайте.

3. Теплообразование: запечатать пластину мембраной сзади37Температура 30минутаА.

4. Распределение жидкостей: будетТридцатикратный концентрат очищающего раствора после 30 - кратного разбавления дистиллированной водой.

5. Стирка: осторожно снимайте пленку уплотнителя, выбрасывайте жидкость,отжиматьЗаполните каждое отверстие стиральной жидкостью, статическиБросьте через 30 секунд, так повторите 5 раз, высушите.

6. Добавление фермента: добавьте реагент ферментативного маркера на отверстие50μl， Кроме пустого отверстия.А.

7. Теплообразование: запечатать пластину мембраной сзади37Температура 30минутаА.

8. Стирка: осторожно снимайте пленку уплотнителя, выбрасывайте жидкость,отжиматьЗаполните каждое отверстие стиральной жидкостью, статическиБросьте через 30 секунд, так повторите 5 раз, высушите.

9. Цвет: Сначала в каждую отверстие добавляется цветопроявитель.А50μlДобавьте цветопроявитель.В50μlЛегкое сотрясение смешалось,37Светоизоляция при температуре °C 10-20Минут.

10.Конец: конец каждого отверстияжидкость50 мклКонец реакции(В это время синий становится желтым)А.

11.Измерение: настройка нуля с помощью пустого отверстия,450нмДлина волныПоглощениеСтепень (ОДЗначение). Измерение должно производиться после добавления жидкости для прекращения15В течение минуты.

Внимание:

1. Готовность реагента: комплект для извлечения из холодильной среды должен быть сбалансирован при комнатной температуреМожно использовать через 15 - 30 минут. Ферментные маркеры, необходимые для подготовки к одному эксперименту, другие могут быть удалены с микропористой пластины, запечатаны и сохранены в соответствии с требованиями инструкции для следующего использования.

2. Плюс: в экспериментальной операции используйте одноразовую стерилизованную всасывающую головку, чтобы избежать загрязнения. При добавлении образца обратите внимание, чтобы не было образования пузырьков, добавьте образец к дну ферментной пластины, старайтесь не касаться стенки отверстия, мягко встряхните и перемешайте. Как и при добавлении реагента, интервал между первым и последним отверстием в процессе сложения проб минимален (обычно контролируетсяВ течение 10 минут), если он слишком велик, это приведет к различным срокам "претермического размножения", что явно влияет на точность и повторяемость измеренных значений. Для точности измерения рекомендуется установить повторное отверстие для эксперимента.

3. Теплообразование: Чтобы предотвратить испарение образца, во время эксперимента, пожалуйста, поместите ферментную пластину с крышкой или покрытием в мокрую коробку, чтобы избежать испарения жидкости, после стирки пластины следует как можно скорее выполнить следующую операцию, в любое время следует избегать ферментной пластины в сухом состоянии, в то же время строго соблюдать заданное время и температуру размножения.

4. Мойка:Интенсивный моющий растворвозможноБудет.кристаллизацияВыделение, разбавление при нагревании и растворении в водяной ванне.При стирке не влияет на результат. Полная промывка очень важна, во время каждой промывки необходимо сбрасывать стиральную жидкость *. Промывочный раствор, остающийся в реакционном отверстии во время промывки, должен высыхать на всасывающей бумаге, не помещать впитывающую бумагу непосредственно в реакционное отверстие для всасывания воды, в то же время аккуратно стирать остаточные жидкости и отпечатки пальцев на дне пластины, чтобы избежать воздействия на окончательные показания энзимометра. Если вы используете автоматическую стиральную машину, используйте ее во время официального эксперимента после квалифицированного использования.

5. Контроль времени реакции: После добавления субстрата, пожалуйста, регулярно наблюдайте изменение цвета отверстия реакции, если вы наблюдаете более темный цвет, добавьте жидкость для прекращения реакции заранее, чтобы избежать чрезмерной реакции и повлиять на показания плотности света ферментативного маркера.

6. Подложка: Подземка должна быть защищена от света, избегая прямого воздействия света при хранении и нагревании.