Наборы для органоидных культур (рак печени, толстой кишки, почек)

способ применения

1 Первоначальное поколение
(1) После взятия материала ткань должна быть помещена в бутылку для отбора проб предварительно охлажденной (2 - 8°C) жидкости для хранения тканей E, быстро перевезенной в чистую лабораторию для обработки тканей и разделения клеток, фотографирования и регистрации информации.
(2) Подготовьте несколько чашек Петри, добавьте 4 ° C предварительно охлажденный исходный культурный буфер B резервный.
(3) Дезинфекция бутылочек для отбора проб, помещение ткани в чашку Петри, использование первичного культивируемого буфера B после очистки три раза, использование офтальмологического jian или хирургического dao ткани Jian разрезать на объем около 1 - 3 мм3Организационный блок.
(4) Организация использует первичную ткань рака молочной железы человека, чтобы переварить ye C пищеварение, 37 ° C сотрясение пищеварения 10 - 20 мин (пищеварительный процесс в любое время наблюдает пищеварение).
(5) Взятие небольшого количества жидкости для наблюдения под микроскопом, под которым наблюдалось больше отдельных клеток или кластеров клеток ниже 70m, после добавления трехкратного объема протогенного буфера B для прекращения пищеварения.
(6) Использовать сетку с апертурой 100um для фильтрации, после сбора фильтра, после обогащения 300g центрифуги 5 мин переместить в верхнюю очистку, добавить исходный культурный буфер B для повторной суспензии центрифуги.
(7) Расчет основного клея: после 6 - го шага наблюдается объем собранной ткани, добавляется 25 - кратный объем ткани основного клея (абс9495(Перевешенная настилка.
(8) В качестве примера можно привести 24 - дырочную клеточную культурную пластину, в которой каждая точка отверстия клеится 25ul тканевой клеевой смесью для покрытия (при 4°C).
(9) Поместите покрытую доску в инкубатор 37°C на 10 - 10мин в клей, добавьте питательную среду А (восстановление комнатной температуры) для органов рака молочной железы человека для культивирования.
2. Генетическая культура органов
(1) Миграционная пушка отсасывает питательную среду, добавляя 1 - 2 мл на отверстие 4 ° C органоидный культурный буфер G помещается в 2 мин.
(2) Экстракционная пушка мягко продувает основной клей, собранный в 15 мл центробежной трубки, 4°C статическая 10 мин. (Одна группа каждые 6 - 8 отверстий)
(3) a: недостаточное количество органов или более часовой объем: центрифуга 5 мин для удаления верхней очистки, добавление соответствующего количества органоидного передаточного питательного буфера G для повторного взвешивания в 1,5 мл центробежной трубки, 300 г центрифуги 5 мин для удаления жидкости для четвертого шага.
b: При большом количестве органов или больших объемах: центрифуга 5 мин сбрасывает верхнюю очистку, добавляет соответствующее количество органоидного передаточного пищеварительного раствора D переваривает 2 - 3 мин, добавляет органоидный культурный буфер G для прекращения пищеварения, центрифуга 5 мин сбрасывает смесь, добавляет соответствующее количество органоидного передаточного питательного буфера G в 1,5 мл центрифужной трубки, 300 г центрифуги 5 мин сбрасывает жидкость для четвертого шага.
(4) После сбора органоидов добавьте субстративный клей с тяжелой подвеской, 25 - ul субстративный клей на отверстие, покрытый 24 - отверстиями клеточной питательной пластины, поместите в инкубатор 10 - 10 минут, чтобы добавить 500 ul человека с раком молочной железы культивирующей среды органов A.
3.Замораживание органов.
(1) Миграционная пушка отсасывает питательную среду, добавляя 1 - 2 мл на отверстие 4 ° C органоидный культурный буфер G помещается в 2 мин.
(2) Экстракционная пушка мягко продувает основной клей, собранный в 15 мл центробежной трубки, 4°C статическая 10 мин. (Одна группа каждые 6 - 8 отверстий)
(3) центрифуга 5 мин Выбросить верхнюю очистку, добавить соответствующее количество органоидной культуры буфер G снова подвесить, 300 г центрифуга 5 мин Выбросить жидкость.
(4) Добавьте соответствующее количество замороженной жидкости F для органов, мягкое дутье тяжелой суспензии, возьмите 24 - дырочную клеточную культурную пластину в качестве примера: плотность 2 отверстия для замораживания 1 трубки, объем каждой трубки 1,4 мл.
(5) Сделайте помеченную информацию, после того, как программа охлаждается, переместите жидкий азот для долгосрочного сохранения.
4 Реанимация органов.
(1) Возьмите 10 мл органоидного питательного буфера G в 15 мл центробежной трубки.
(2) Извлечь замороженные органоидные клетки из резервуара с жидким азотом и быстро поместить их в водяную ванну при температуре 37°C, чтобы расплавиться.
(3) Во время таяния водяной ванны необходимо слегка встряхнуть криотрон, чтобы обеспечить плавление замороженной жидкости в течение 1 - 2 мин.
(4) Быстро переносите растворенные органоидные клетки в 15 мл центробежной трубки, аккуратно продувайте их 6 - 8 раз с помощью пипетки, 300 г центробежных 5 мин, затем удалите очищающую жидкость и соберите органоидные клетки для осаждения. Добавьте соответствующее количество органоидного питательного буфера G - суспензия переместите в 1,5 мл центробежной трубки 300 г центрифуги 5 мин.
(5) Гипертонический клей, 25 уль на отверстие, покрытый клеем матрицы в 24 - лунчатой клеточной питательной пластине, помещен в инкубатор для культивирования 10 - 10 минут клея, добавлен 500ul человек для культивирования органов типа рака молочной железы питательная среда A.