Коэффициент индуктора опадания крыс (AIF) Набор реагентов ELISA

Коэффициент индукции смерти крыс (AIF) Набор для обнаружения ELISA

Принцип обнаружения А.

В этом наборе используется тест на иммуносорбцию с двойным антитело - заполнителем ( ELISA）。 В предварительном пакете Факторы, вызывающие смерть крыс (AIF)Антиантитела (твердофазные антитела) в микропористой энзимной пластине, добавьте Факторы, вызывающие смерть крыс (AIF) Калибровочные изделия и образцы, подлежащие проверке, с добавлением другого Противостояние HRP - маркерам Факторы, вызывающие смерть крыс (AIF) (антитела ферментативного маркера), после термотроду и полной промывки, удаления несвязанных компонентов, образования твердофазных антител на твердой поверхности микропористой пластины - Антиген - энзимный комплекс антител. Добавьте субстраты A и B, субстраты под катализатором HRP, производят синий продукт, под действием концентрирующей жидкости (2M серной кислоты), в конечном итоге превращаются в желтый, измеряют поглощение (OD) на длине волны ферментативного маркера 450 нм, абсорбцию (OD) в пробах, подлежащих измерению Факторы, вызывающие смерть крыс (AIF)Концентрация прямо коррелирует. Подходит к калибровочной кривой, можно вычислить в выборке Крысы (AIF)Концентрация.

Потребности в оборудовании и реактивах

1. Ферментометр (Фильтр длиной волны 450 нм)

2.Термокамера 37°C (не рекомендуется использовать клетки для культивирования CO2)

3. Автомойка или многоканальный дренаж / 5 мл капельницы (для ручной промывки листов)

4. Асептический ЕП - трубка и одноразовый отсос

5. Точный одиночный путь. (0,5 - 10 мкл, 5 - 50 мкл, 20 - 200 мкл, 200 - 1000 мкл) и многоканальный дегидратор (перед использованием дегидратора требуется калибровка).

6.Пропитывающая бумага и бак для проб

7.Деионизированная или дистиллированная вода

Состав комплекта:

Сбор образцов А.

1、Проба для сбора крови должна быть одноразовой без термогена, без эндотоксинов.

2、 Рекомендуется использовать плазменный антикоагулянт. EDTA 。 Избегайте использования гемолитических, высоколипидных образцов крови.

3、Образец должен быть прозрачным и прозрачным, а суспензия должна быть удалена центрифугой.

4、 Если образец не проверен вовремя после сбора, пожалуйста, распределите его по количеству использования и заморозьте в - 20°C, - 70°C в холодильнике, избегайте повторного замерзания и таяния, в течение 3 - 6 месяцев обнаружения.

5、 Если концентрация обнаруженного вещества в вашей выборке превышает максимальный уровень стандартного продукта, пожалуйста, исходя из реальной ситуации, Разбавить правильно (Рекомендуется провести предварительный эксперимент для определения кратности разбавления).

Условия хранения:

Сбор и хранение образцовА.

1. Пробы сыворотки крови при комнатной температуре. 2 часа или 2 - 8°C на ночь. 1000 × g центрифуг в течение 20 минут, чтобы очистить. Может быть обнаружена сразу или заморожена на 20°C или - 80°C в соответствии с одноразовым использованием.

2. Рекомендуется использовать плазменный антикоагулянт. EDTA-Na2/K2， Образец был взят в течение 30 минут после 2 - 8 °C, 1000 × g центрифуг 15 минут, чтобы очистить. Могут быть немедленно обнаружены или заморожены на 20°C или - 80°C в соответствии с количеством одного использования. Использование и выбор других антикоагулянтов см. Руководство по подготовке проб.

3.Образец ткани, как правило, изготовлен из тканевой симметрии, которая обрабатывается следующим образом:
3.1, Поместите целевую ткань на лед с предварительным охлаждением. Буферная жидкость PBS (0.01M, pH = 7.4) стирается, чтобы удалить остаточную кровь, запасенная после взвешивания.

3.2, Растворить ткань на льду с помощью крекинга. Объем добавки крекинга зависит от веса ткани, как правило, каждый Фрагменты ткани 1g используют 9 мл крекинга. Также рекомендуется добавить ингибиторы протеазы, такие как 1 мм PMSF, в раствор для крекинга.

3.3, Можно повторно использовать ультразвуковое дробление или повторное замораживание для дальнейшей обработки (Во время ультразвукового дробления требуется охлаждение в ледяной ванне; метод повторного замораживания и таяния может повторяться 2 раза).

3.4, Приготовленный раствор в 5000 × g центрифуг в течение 5 минут, оставьте очищение, чтобы обнаружить. Или замораживание по одноразовому потреблению при 20°C или - 80°C.

3.5. В соответствии с экспериментальными потребностями образцы тканевой симметрии могут сначала определить общую концентрацию белка Для облегчения анализа данных рекомендуется метод BCA. Обычно корректируется общая концентрация белка до 1 - 3 мг / мл для тестирования ELISA. Некоторые образцы тканей, такие как печень, почки, поджелудочная железа из - за более высокой концентрации эндогенных пероксидазы, при более высокой концентрации образца реагируют с явным субстратом и дают ложноположительные результаты. Можно попробовать заглушить 15 мин с помощью 1% H2O2.

Внимание: Крекинг часто используется Буферный раствор PBS или с использованием крекинга средней прочности RIPA. При использовании значение PH должно быть скорректировано до PH7.3, чтобы избежать использования компонентов, содержащих NP - 40, Triton X - 100 и DTT, которые могут серьезно подавлять работу комплекта. Рекомендуется использовать 50mM Tris + 0,9% NACL + 0,1% SDS, PH 7.3, вы можете сделать это самостоятельно или связаться с нами для покупки.

4. Клеточная культура собирает очищающую жидкость, 2 - 8°C, 2500rpm центрифуга 5min, сбор очищенных клеточных культур выше очистки. Немедленно используется для обнаружения или в резерве замораживания - 80°C по разовому использованию.

5.Клеточный крекинг

5.1, Сбор и расщепление суспензионных клеток: 2 - 8°C, 2500rpm центрифуга 5min, сбор клеток. Затем добавьте предварительно охлажденный PBS мягко смешанной очистки, 2 - 8°C, 2500 rpm центрифуг 5 мин, собирая клетки. Добавьте 0,5 - 1 мл клеточного крекинга и соответствующее количество ингибиторов протеазы (например, PMSF, рабочая концентрация 1 ммоль / л), поместите на лед, крекинг 30 мин - 1 ч или в сочетании с ультразвуковым дроблением.

5.2, Сбор и крекинг клеток, прикрепленных к стенке: всасывание очищающей жидкости, добавление предварительно охлажденных ПБС стирается три раза. Добавьте 0,5 - 1 мл клеточного крекинга и соответствующее количество ингибиторов протеазы (например, PMSF, рабочая концентрация 1 ммоль / л) и аккуратно скребите клетки, прикрепленные к стенке. Клеточная суспензия переходит в центробежные трубки и помещается на лед, расщепляется на 30min - 1h или при ультразвуковом дроблении.

5.3, Во время клеточного крекинга центробежные трубки могут быть взорваны головкой пистолета или периодически качаться, чтобы белки полностью расщеплялись Появление липкой формы - это ДНК, которая может быть разбита с помощью ультразвука. (Или с ультразвуковым зондом 3 - 5 мм, мощностью 150 - 300 Вт, ультразвуковая обработка образцов на льду, работа 1 - 2 секунды, остановка 30 секунд, 3 - 5 циклов.) )

5.4, Расщепление или ультразвуковое разрушение завершены, 2 - 8°C, 10000rpm центрифуга 10min, верхняя очистка перемещается в трубку EP, сразу же используется для обнаружения или распределяется в резерве замораживания - 80°C по разовому использованию.

Коэффициент индукции смерти крыс (AIF) Набор для обнаружения ELISA

Внимание:Внимание образец той же организации.

Примечание: Выше только для информации! Надеюсь, эта информация поможет вам сделать правильный выбор!