Аптечка ELISA для крыс мелатонин (MT)

Аптечка ELISA для крыс мелатонин (MT)

lЭтот комплект предназначен для количественного тестирования in vitro.Образцы сыворотки крови, плазмы, тканевой симметрии и связанных с ними жидкостейчжунМелатонин у крыс(МТ) Содержание.

lСрок действия: 6 месяцев

lУсловия сохранения:2-8℃

lДанный комплект предназначен исключительно для научного использования и не предназначен для клинической диагностики.

Принцип эксперимента

В наборе используются двухступенчатые заполнители с двойным антителом для комбинированного иммуноадсорбционного теста фермента (ELISA). Пакеты, предварительно завернутые в антитела, захваченные крысиным мелатонином (МТ), помещаются в микропоры, последовательно добавляя образцы, стандартные продукты, обнаруженные антитела, отмеченные HRP, после термического размножения и * промывания. Используя субстрат TMB, TMB преобразуется в синий цвет под катализатором пероксидазы и в конечный желтый под действием кислоты. Глубина цвета и наличие мелатонина (МТ) у крыс в образце были положительными. Абсорбция (OD) измеряется с помощью энзимометра на длине волны 450 нм для расчета концентрации проб.

Обработка образцов и требования

1. СывороткаА.Образцы цельной крови, собранные в сывороточных сепараторах, помещаются на ночь при комнатной температуре в течение 2 часов или 4 ° C, затем 1000 × g центробежных 20 минут, чтобы их можно было очистить или поместить верхнюю очистку на хранение при температуре 20 ° C или - 80 ° C, но следует избегать повторного замораживания.
2. Плазма кровиА.Образцы отбираются с использованием EDTA или гепарина в качестве антикоагулянта, а образцы центрифугируются в течение 15 минут при 2 - 8°C 1000 × g в течение 30 минут после сбора, чтобы их можно было обнаружить путем очистки или сохранить верхнюю очистку при 20°C или - 80°C, но следует избегать повторного замораживания.
3. Организационная симметрия:Промыть ткань предварительно охлажденным PBS (0,01M, pH = 7.4), удалить остаточную кровь (эритроциты, расщепленные в симметрии, влияют на результаты измерений), после взвешивания ткань разрезать. Измельченная ткань соответствует объему PBS (обычно пропорционально весу и объему 1: 9, например, 1 г образца ткани соответствует 9 мл PBS, конкретный объем может быть соответствующим образом отрегулирован в соответствии с экспериментальными потребностями и зарегистрирован. Рекомендуется добавить ингибиторы протеазы в PBS) в стеклянный симулятор, полностью измельченный на льду. Для дальнейшего расщепления тканевых клеток можно провести ультразвуковое дробление равномерного раствора или повторное замораживание и таяние. После того, как равномерный раствор в 5000 × g центрифуг 5 ~ 10 минут, взять очищенный тест.

Клеточная культура очищается или другие биологические образцы:Пожалуйста, 1000 × g центрифуг в течение 20 минут, взять очистку можно обнаружить или поместить верхнюю очистку на 20°C или 80°C для сохранения, но следует избегать повторного замораживания и таяния.

Примечание: Кроворастворение образца влияет на результаты последующего тестирования, поэтому образец не подходит для этого теста.

Необходимые, но не поставленные реактивы и оборудование

• Ферментометр (450 нм)

• Высокоточный пробоотборник и головка пистолета: 0,5 - 10ul, 2 - 20ul, 20 - 200ul, 200 - 1000ul

• Термокамера 37°C

• Дистиллированная или деионизированная вода

Состав комплекта

Аптечка ELISA для крыс мелатонин (MT)запаснойпримечаниеА.

1. Концентрация стандартного продукта в порядке убывания: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5 пг / мл

2. После большого количества обычных образцов значения нормальной концентрации в образцах находятся в пределах диапазона испытаний, обеспечиваемого набором реагентов, и образец может быть взят непосредственно на 50 мкл в ходе эксперимента. Когда некоторые значения выборки превышают большую концентрацию Zui Standard Product, образец может быть надлежащим образом разбавлен разбавленным раствором для проб, прежде чем экспериментировать.

Меры предосторожности

• Тщательно в соответствии с установленным временем и температурой проводится термическое разведение для обеспечения точных результатов. Все реагенты должны достигать комнатной температуры 20 - 25°C до их использования. Реактор для хранения охлаждается сразу после использования.

• Неправильная стирка может привести к неточным результатам. Перед добавлением субстрата убедитесь, что жидкость в отверстии высыхает как можно больше. Не позволяйте микроскопическим отверстиям высыхать во время термоса.

• Устранение остатков жидкости и отпечатков пальцев на дне пластины, иначе это повлияет на значение OD.

• Цветовая жидкость для субстрата должна быть бесцветной или очень светлой, и субстрат, который стал синим, не может быть использован.

• Избегайте перекрестного загрязнения реагентов и образцов чтобы избежать неправильных результатов.

• Избегайте прямого воздействия света при хранении и нагревании.

• После балансировки до комнатной температуры открывается герметичный мешок, чтобы предотвратить капли воды, конденсируемые на холодной пластине.

• Ни один реактив не может вступать в контакт с сильным газом, испускаемым отбеливающим растворителем или отбеливающим растворителем. Любой отбеливающий компонент может нарушить биологическую активность реактивного реагента в комплекте.

• Нельзя использовать просроченные продукты.

• В случае возможного распространения заболевания все образцы должны быть обработаны и обработаны в соответствии с установленными процедурами, а также контрольными устройствами.

Приготовьтесь.

Комплекты для реактивов извлекаются из холодильной среды и должны использоваться после выравнивания комнатной температуры.

Разбавление амортизатора стирки 20×: дистиллированная вода разбавляется 1: 20, то есть 1 часть амортизатора стирки 20× плюс 19 частей дистиллированной воды.

Шаг действия

1. Из алюминиевого фольгового мешка после балансировки комнатной температуры в 20 мин извлекается необходимая пластина, а остальная пластина запечатана обратно на 4 ° C в самогерметичном мешке.

2. Установка стандартных отверстий и пробоотборных отверстий, стандартных отверстий плюс различные концентрации стандартного продукта 50 мкл;

3. Добавление 50 мкл к пробному отверстию; Пустые отверстия не добавляются.

4. В дополнение к пустым отверстиям, каждое отверстие в стандартном продуктовом отверстии и пробном отверстии добавляет 100 мкл для обнаружения антител, помеченных пероксидазой хрена (HRP), запечатывает отверстие реакцией мембраной, а водяная ванна или термостат 37°C нагревается на 60 мин.

5. Выбросить жидкость, высушить на всасывающей бумаге, заполнить каждое отверстие стиральной жидкостью (350 мкл), статически 1 мин, сбросить стиральную жидкость, высушить на всасывающей бумаге, так повторить стиральную пластину 5 раз (также можно мыть пластину машины).

6. Каждое отверстие добавляется в основание A и B по 50 мкл, а при температуре 37 ° C - 15 мин.

7. В каждое отверстие добавляется 50 мкл концевой жидкости, в течение 15 мин, для определения значения OD каждого отверстия на длине волны 450 нм.

Исчисление результатов эксперимента

Измеренные значения OD стандартного продукта являются горизонтальными координатами, значения концентрации стандартного продукта - вертикальными координатами, стандартная кривая рисуется на бумаге с координатами или с помощью соответствующего программного обеспечения и получает уравнение линейной регрессии, которое заменяет значение OD образца в уравнение и вычисляет концентрацию образца.

Свойства комплекта

• Диапазон обнаружения: 2,5 пг / мл - 80 пг / мл.

• Чувствительность: низкая обнаруженная концентрация менее 0,1 пг / мл.

• Специфичность: не пересекается с другими растворимыми структурными аналогами.

• Повторяемость: коэффициент вариации внутри пластины составляет менее 10%, а коэффициент вариации между пластинами - менее 15%.

объяснение

Поскольку существующие условия и научно - технический уровень не позволяют провести полную идентификацию и анализ всего сырья, поставляемого всеми поставщиками, данный продукт может иметь определенные технические риски качества.

• Окончательные результаты тесно связаны с эффективностью реагента, соответствующими операциями экспериментатора и экспериментальной средой в то время, и обязательно подготовьте достаточное количество образцов для резервного копирования.

• Различные партии одного и того же продукта могут иметь небольшую разницу, например: предел обнаружения, чувствительность и время проявления цвета, пожалуйста, следуйте инструкциям в наборе реагентов для экспериментальных операций, электронная версия инструкции сайта только для справки.

• Только полное использование этого комплекта реагентов может гарантировать эффект тестирования, не может смешиваться с продуктами других производителей. * Результаты испытаний будут получены только в том случае, если будут строго соблюдаться экспериментальные инструкции по данному набору.

• Компания несет ответственность только за сам комплект, не несет ответственности за потребление образца в результате его использования, и просит пользователя полностью учитывать возможное использование образца перед его использованием и резервировать достаточное количество образцов.

• Структурная симметрия или клеточный экстракт, полученный с использованием химического крекинга, может привести к искажению результатов эксперимента ELISA из - за введения определенных химических веществ.

• Если образец очищен для клеточной культуры, из - за большого количества интерференционных факторов для этого типа образца, таких как: состояние клетки, количество клеток, время отбора проб и т. Д. Поэтому могут быть ситуации, которые не могут быть обнаружены.

• Некоторые природные или рекомбинантные белки, включая первичные и эукариотические рекомбинантные белки, могут не быть обнаружены, потому что они не соответствуют обнаруженным и захваченным антителам, используемым в данном продукте.