RiboNAT™ Набор для быстрого стерильного обнаружения

RiboNAT ™ Набор для быстрого стерильного обнаружения

При тестировании на безопасность инъекционных наркотиков метод стерильного тестирования, предусмотренный Многонациональной фармакопеей, должен культивироваться не менее 14 дней. Тем не менее, некоторые виды клеточной терапии должны вводиться пациенту в течение нескольких дней после родов, что затрудняет проведение стерильного тестирования до введения препарата, что также приводит к растущему спросу на стерильные методы тестирования, которые обеспечивают более быстрые результаты для повышения безопасности пациентов.

RiboNAT ™ Это быстрый стерильный тест - набор с технологией амплификации нуклеиновых кислот (NAT), который может быть завершен всего за 7 часов, что значительно сокращает время обнаружения по сравнению с традиционными методами. В отличие от традиционных тестов NAT на геномную ДНК, предназначенных только для микроорганизмов, RiboNAT ™ Обнаружена рибосомная РНК (RRNA). Благодаря более высокому содержанию RRNA в микроорганизмах, это делает обнаружение более чувствительным. В то же время традиционные методы склонны к ложноположительности из - за остаточной ДНК мертвых бактерий или загрязненной ДНК в окружающей среде и материалах, в то время как Ribonat ™ Эффективно уменьшает эту проблему и повышает точность обнаружения.

• Характеристики

Результаты можно получить в день тестирования (около 7 часов)

• Тестирование с использованием RRNA в режиме реального времени методом обратной транскрипции PCR (RT - rt PCR) с более высокой чувствительностью (9 CFU / mL) по сравнению с gDNA - тестированием

Снижение ложноположительных эффектов, вызванных мертвыми бактериями и остатками ДНК

• Одноразовое обнаружение нескольких бактерий (аэробных и анаэробных) и грибков одновременно

• Экспериментальный процесс

• Технические характеристики испытательного комплекта

• Состав комплекта

• Обнаружение чувствительности

Рисунок 1. Чувствительность обнаружения

Для шести микроорганизмов, указанных в фармакопее, были подготовлены микроорганизмы с концентрацией 9 CFU / ml. Использование Ribonat ™ Из этих суспензий извлекается РНК и обнаруживается рибосомная РНК (rРНК). РРНК всех микроорганизмов была успешно обнаружена с значением Ct ниже 35.

Рисунок 2. Чувствительность обнаружения в образцах клеточной суспензии

Для шести микроорганизмов, указанных в фармакопее, была подготовлена микробиологическая суспензия с концентрацией 9 CFU / ml и 0,25 × 10 соответственно.⁶ Клетки Cells / ml HEK293 смешиваются. Использование Ribonat ™ Извлечение РНК из смешанной суспензии и обнаружение rRNA. РРНК всех микроорганизмов была успешно обнаружена с значением Ct ниже 35.

Кроме того, все шесть штаммов были обнаружены при следующих условиях (данные не показывают):

• Интерплазменные стволовые клетки (MSC): 0.5×10⁶клетки/мл

· Т-клетка: 1,0 × 10⁶клетки/мл

• Более чувствительные методы обнаружения

· Концентрация бактерий: 2 CFU / mL

· Время инкубации: 3 - 15 ч

Рисунок 3. Более чувствительные методы обнаружения

Для бразильской плесени (Aspergillus brasiliensis), Clostridium sporogenes и Cutibacterium acnes были подготовлены концентрации:2 CFUМикробная суспензия. Несмотря на то, что Ribonat ™ Продолжительность инкубации в обычном рабочем процессе составляла 3 часа, но эксперимент задержал инкубацию до 3 - 15 часов. После инкубации используйте Ribonat ™ Извлечение РНК и обнаружение RRNA. Результаты показали, что три штамма, в том числе строгая анаэробная бактерия (спорофит) и медленно растущая бактерия (акне - пропионовая палочка), были успешно обнаружены после инкубации в течение 14 часов или более с значением Ct ниже 35.

· Снижение ложноположительных

RiboNAT ™ Включение антибактериальных ДНК - инактивирующих реагентов и этапов обработки DNase эффективно снижает риск ложноположительных эффектов, вызванных остаточной ДНК в образцах.

Рисунок 4. Снижение ложноположительных

В качестве тестовых образцов используется коммерческий стерильный PBS для обнаружения бактериальных нуклеиновых кислот (NAT). В одном из экспериментов (на фото выше) ДНК была извлечена из имеющихся в продаже наборов реагентов, после чего были проведены бактериальные целевые флуоресцентные количественные тесты PCR в реальном времени. Другая группа экспериментов (рисунок ниже) с использованием Ribonat ™ Извлечение РНК, а затем ретроспективное флуоресцентное количественное тестирование PCR в реальном времени. Шесть кривых амплификации наблюдались в методах на основе ДНК с использованием Ribonat ™ Никаких сигналов усиления обнаружено не было.

• Список продуктов