U-Blot® Пленка NC - отпечатка (0,2 мкм)

U-Blot ® Пленка NC - отпечатка (0,2 мкм)

U-Blot ® Пленка нитрата целлюлозы (NC) представляет собой чистую, неподдерживаемую микропористую пленку нитрата целлюлозы, используемую для переноса белков и нуклеиновых кислот из различных гелевых матриц.

Эта перепечатанная пленка имеет две апертуры: 0,2 мкм и 0,45 мкм, которые могут связывать вещества различной молекулярной массы:

• Разрыв 0,45 мкм: подходит для большинства образцов белка и обеспечивает более высокую чувствительность к обнаружению.

• Аппаратура 0,2 мкм: подходит для белков с молекулярной массой менее 20 000, которые лучше адсорбируют и сохраняют небольшие белки.

U-Blot ® Интенсивность растяжения мембраны нитрата целлюлозы (NC) делает ее менее вероятной для разрыва и растрескивания по сравнению с другими марками мембраны NC, которая имеет более высокую способность связывать белки и нуклеиновые кислоты, что делает ее более подходящей для иммунологического и нуклеинового тестирования.

Выделите образцы белка и белка Маркера гелем SDS PAGE.

Осторожно разрезать и поместить гель и сбалансировать его в буфере холодного переноса в течение 5 - 20 минут.

3. Нарезать пленку и фильтрующую бумагу на размер, соответствующий гелю. Пленка PVDF предварительно мокрая в метаноле в течение 20 секунд до тех пор, пока ее непрозрачный белый цвет не превратится в равномерный полупрозрачный серый, а затем погружается в сверхчистую воду в течение 1 - 2 минут, чтобы удалить остатки реагента; Затем балансируйте в буфере холодного перехода в течение 2 - 3 минут, пока он не станет доступным.

Использовать напоминание:

После увлажнения мембраны не высыхайте. Если мембрана частично высыхает (становится непрозрачной белой), она также должна быть повторно увлажнена.

4. Последовательная сборка устройства для перепечатки, перепечатка зажимов губчатой прокладки фильтровальная бумага предварительно мокрая пленка разрезанная и предварительно мокрая гель фильтровальная бумага губчатый прокладочный перепечаточный зажим, каждый слой должен быть помещен, чтобы избежать морщин, сложения или присутствия пузырьков (можно использовать такие инструменты, как режущая пленка, чтобы мягко сжать пузырьки, так что каждый слой плотно прикреплен)

5. Установите условия эксплуатации и т.п. в соответствии с инструкциями по используемому трансформаторному устройству и начните перепечатку.

6. После транскрипции извлекают пленку отпечатка и ненадолго промывают в сверхчистой воде для удаления гелевых обломков. Пленка отпечатка может храниться в сухом воздухе или может быть немедленно использована для этапов иммунологического тестирования.

Некоторые ключевые факторы для успешного проведения экспериментов с белковым отпечатком, такие как концентрация белка, закрытая жидкость и концентрация антител, могут потребовать оптимизации в следующих сценариях.

Стандартные иммунологические тесты

Если пленка отпечатка высохла, повторно промочите ее, замочите в метаноле на 15 секунд или пока цвет не станет прозрачным из белого в полупрозрачный серый.

2. Промыть пленку отпечатка сверхчистой водой в течение 1 минуты.

3. Поместите пленку отпечатка в закрытый буфер и аккуратно перемешайте и высиживайте в течение 1 часа.

4. Антиразбавление в раствор для коммерческого разбавления антител, моющий буфер или закрытый буфер.

5. Поместите пленку отпечатка в разбавленный антираствор, инкубатор при комнатной температуре в течение 1 часа (или 4 ° C на ночь), мягко перемешайте.

Использование моющих буферов (включая Tween) ®- 20 Буфер поверхностно - активного агента (TBST или PBST) стирает отпечатки пленки 3 - 5 раз по 5 минут.

7. Разбавление диантигена в коммерческом растворе для разбавления антител, моющем буфере или закрытом буфере.

8. Поместите мембрану отпечатка в разбавленный ферментно - маркированный диантираствор, инкубационный при комнатной температуре в течение 1 часа.

9. Промыть отпечаточную пленку моющим буфером 3 - 5 раз по 5 минут.

10. Поместить отпечаток пленки в чистую тару и добавить соответствующие контрольные реагенты.

11. В соответствии с инструкцией по реагентам, используемым для тестирования, инкубация 1 - 5 минут.

(1) Применительно к химическим светоизлучающим реагентам HRP или AP, воздействие отпечаточной пленки на рентгеновскую пленку или использование системы визуализации для получения цифровых изображений.

(2) Для обнаружения явного цвета добавьте реагент и ждите появления сигнала.