полипептидный крекингЭксплуатационное использование охватывает пять основных звеньев калибровки и подготовки оборудования, обработки реагентов и образцов, выполнения реакции крекинга, очистки продуктов и обслуживания оборудования,полипептидный крекингКонкретные оперативные меры и меры предосторожности заключаются в следующем:
Калибровка и подготовка оборудования
Проверка целостности компонентов
Перед загрузкой проверьте исправность силовых линий, реакторов, насосов, клапанов и других компонентов, чтобы убедиться, что они не повреждены или не ослаблены. Например, если обнаруживается старение уплотнительного кольца реактора, его необходимо немедленно заменить, чтобы избежать утечки газа во время крекинга.
Подтвердите, что резервуар для растворителя тесно связан с газопроводом без утечки. Проверьте давление сжатого воздуха (AIR) на 60 - 100 psi, а давление азота (N2) на 5 - 10 psi.
калибровка параметров
В соответствии с экспериментальными потребностями предустанавливается температура крекинга, давление, скорость потока и другие параметры. Например, при расщеплении фермента температура должна точно контролироваться на уровне 37°C, а диапазон колебаний не должен превышать ±0,5 °C.
Регулярно откалибруйте датчики температуры (раз в полгода, ошибка должна контролироваться в пределах ±0,2°C) и датчики давления (раз в год) для обеспечения точности данных.
подогрев оборудования
Включите источник питания синтезатора и подогрейте устройство до заданной температуры реакции. Время подогрева варьируется в зависимости от типа устройства и температуры, поэтому нужно терпеливо ждать.
II. Реакторы и обработка проб
Приготовьтесь.
Приготовьте растворы для крекинга (например, TFA / вода / триизопропилсилан = 95: 2.5: 2.5), реактивы для активации (например, HBTU, DCC), растворители (DMF, DCM) и т. Д. Чтобы все материалы были свежими и чистыми, избегая введения примесей.
Подтвердите, что реагент не осаждается или не портится, рекомендуется использовать фильтрующий реагент перед использованием и отметить дату вскрытия, просроченный реагент своевременно утилизируется.
Предварительная обработка образцов
Образцы с высокой вязкостью или твердыми частицами подвергаются центрифуге, фильтрации и другой предварительной обработке, чтобы предотвратить блокировку трещинообразующей полости или повреждение корпуса насоса. Например, необработанные образцы могут привести к увеличению износа корпуса насоса на 40%.
III. Осуществление реакции крекинга
смола и аминокислоты
Выберите подходящий твердофазный носитель (например, Rink Amide Resin), растворите смолу дихлорметаном (DCM), удалите примеси и высушите резерв.
Целевые аминокислоты смешиваются с активированными реагентами, образуя активные эфиры, которые затем вводятся в реактор, и соединяются с обезопасенными аминокислотами, чтобы сформировать пептидные связи.
Реакция крекинга
Добавьте предварительно охлажденный крекинг (например, смесь TFA) и перемешайте при комнатной температуре в течение 2 часов. В процессе крекинга необходимо контролировать температуру, давление и другие параметры в режиме реального времени, чтобы обнаружить аномальную своевременную проверку остановки.
После крекинга выделяется реакционная жидкость, отфильтровывается и удаляется смола, и смола промывается растворителем, таким как TFA, 3 раза, объединяя фильтр.
IV. Очищение продуктов
Концентрация и осаждение
Крекинг концентрируется при комнатной температуре в вращающемся испарителе до малых объемов, а полипептиды выделяются путем добавления метилтретбутилового эфира (МТБЭ).
Через центрифугу (10 000 rpm, 10 минут) собираются осадки, которые промываются 3 раза холодным эфиром и высушиваются до грубых пептидов.
Высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC) очищается
Очищение осуществляется с использованием антифазных колонн C18, фаза потока A составляет 0,1 ТФА / вода, фаза потока B - 0,1 ТФА / ацетонитрил. В условиях градиентного смыва (фаза B поднимается с 10% до 60% за 0 - 30 минут) собираются целевые пики.
После очистки HPLC чистота полипептидов может быть повышена с 85% до 98%.
V. Техническое обслуживание и обслуживание оборудования
Ежедневная уборка
После каждого использования внутреннюю стенку реактора промывают деионизированной водой для удаления остатков крекинга и фрагментов белка. Для стойких пятен можно использовать ферментативные моющие средства, пропитанные после чистки.
Каждую неделю 75% этанола или 0,1% раствора гипохлорита натрия циркулируют для дезинфекции труб, чтобы предотвратить размножение микроорганизмов. После дезинфекции необходимо высушить трубы азотом.
Замена поврежденных частей
Каждые три месяца проверяется эластичность уплотнительного кольца, и в случае затвердевания или трещины его необходимо немедленно заменить. Каждые 1 - 2 месяца заменять фильтры впуска, чтобы предотвратить попадание пыли внутрь устройства.
Корпус насоса, клапаны и другие движущиеся части ежеквартально заправляются специальными смазочными материалами (например, смазками на основе кремния), чтобы уменьшить трение и износ.
Управление долгосрочным хранением
Когда оборудование не используется, храните его в сухом, вентилируемом, светонепроницаемом месте, избегая прямого солнечного света и влажной среды. Убедитесь, что оборудование находится вдали от коррозионных газов и жидкостей.
Нанесите антикоррозийное масло (например, вазелин) на металлическую поверхность устройства и покройте пылезащитный колпак.