Колонна хроматографии является основным компонентом хроматографического анализа, и ее производительность напрямую влияет на эффект разделения и точность результатов испытаний. Разумное техническое обслуживание может продлить срок службы хроматографической колонны и избежать снижения или повреждения производительности из - за неправильной работы. Ниже приведены подробные инструкции по сохранению хроматографических колонн, охватывающие различные аспекты установки, использования, хранения и обслуживания.

I. Подготовка к установке

1. Внешний осмотр

- Новая хроматографическая колонна должна быть проверена перед использованием на исправность колонны, отсутствие трещин, царапин или утечки жидкости.

- Подтвердите, что штуцер колонны соответствует прибору, чтобы резьбовое несоответствие не привело к утечке или повреждению.

2. Тестирование на совместимость с фазой потока

- Перед использованием промыть хроматографические колонны растворителями низкой вязкости (например, метанолом или ацетонитрилом), чтобы исключить остаточные примеси в процессе производства.

- Проверка совместимости проточной фазы с хроматографическими колоннами, чтобы избежать использования сильных кислот, щелочей или коррозионных растворителей (например, ТФА следует использовать с осторожностью).

3. Системная адаптация

- Убедитесь, что прочность хроматографической колонны соответствует давлению в системе прибора, чтобы избежать коллапса столба, вызванного работой под избыточным давлением.

- Запишите тип хроматографической колонны, спецификации (например, диаметр частицы, апертура, покрытие C18 и т. Д.), строго в соответствии с условиями, рекомендованными производителем.

II. Содержание в повседневном использовании

1. Выбор фазы мобильности и управление ею

- Контроль pH: для антифазных хроматографических колонн (например, колонн C18) применяется диапазон pH 2 - 8, превышение которого может повредить силиконовую матрицу.

- Соотношение органических растворителей: избегайте резких изменений в соотношении органических растворителей в текучей фазе (например, при прямом переключении со 100% воды на 100% органический растворитель), требуя градиентного перехода, чтобы предотвратить сужение или расширение слоя колонны.

- Фильтрация и дегазация: проточная фаза должна быть отфильтрована фильтрующей пленкой 0,22 мкм и дегазирована ультразвуком, чтобы избежать мелких частиц, блокирующих слой колонны или обнаруживающих помехи пузырьков.

2. Предварительная обработка проб

- Образец должен пройти центрифугирование или фильтрацию (0,22 мкм фильтра) для удаления взвешенных частиц или осаждения.

- Избегайте прямого ввода проб с высокой концентрацией, разбавленных в пределах толщины колонны (со ссылкой на параметры нагрузки, предоставленные изготовителем).

- Для сложных образцов рекомендуется использовать защитную колонну (Guard Column), которая перехватывает примеси и продлевает срок службы основной колонны.

3. Управление скоростью потока и давлением

- Строго следуя скорости потока, рекомендованной хроматографической колонной, чрезмерная скорость потока может привести к чрезмерному давлению колонны и ускорить износ наполнителя.

- Обычная скорость потока в антифазной колонке составляет 0,5 - 2 мл / мин, а скорость потока в сверхэффективной жидкостной хроматографии (UHPLC) может быть ниже 0,1 - 0,5 мл / мин.

- При внезапном повышении давления в системе немедленно останавливайтесь, чтобы проверить причину (например, засорение головки колонны или загрязнение сита).

4. Промывание и очистка

- После каждого использования полоскать хроматографическую колонну чистой водой или растворителем низкой вязкости (например, метанолом) в течение 10 - 20 минут, чтобы удалить остаточные образцы или соли.

- После длительного использования можно проводить операции регенерации колонны (например, отдачу, высокотемпературную очистку или химическую регенерацию), восстанавливая эффект колонны.

III. Хранение и хранение

Краткосрочное хранение (от нескольких дней до нескольких недель)

- Антифазная хроматографическая колонна: сохраняется с использованием метанола - воды (1: 1) или чистого метанола, чтобы избежать высыхания, которое приводит к растрескиванию наполнителя.

- Позитивная хроматографическая колонна: сохраняется с помощью положительного гексана или хлороформа, чтобы предотвратить отказ всасывания воды.

- Температура хранения - комнатная температура, избегая замороженной или высокотемпературной среды.

2. Долгосрочное хранение (более 1 месяца)

- Снимите хроматографическую колонну с прибора и запечатайте оба конца от загрязнения.

- Хранить в прохладном сухом месте, регулярно проверять герметичность, чтобы предотвратить испарение растворителя, приводящее к высыханию столбового слоя.

Восстановление и восстановление колонн

1. Операции отдачи

- Применяется в случае снижения, но не полного отказа цилиндрического эффекта, повторного размещения наполнителя путем обратной промывки для восстановления однородности цилиндрического слоя.

- Обратная скорость потока должна быть ниже положительной скорости потока (например, 0,2 мЛ / мин), время управления 10 - 30 минут.

2. Химическая регенерация

- Столбы силиконовой матрицы: 10% раствор метанола может быть пропитан и очищен ультразвуком для удаления гидрофобных примесей.

- Полимерные колонны: стойкие, могут быть промыты и регенерированы при высокой концентрации органических растворителей (например, чистый ацетонитрил).

3. Термическая регенерация

- Применяется для высокотемпературной хроматографической колонны (например, колонны C18), которая поднимает температуру колонны до 50 - 60°C, промывается метанолом и растворяет жирорастворимые примеси, адсорбируемые на наполнитель.

V. Часто задаваемые вопросы и меры реагирования

1. Повышение давления столба

- Причины: засорение головки колонны, загрязнение ситом или оседание наполнителя.

- Решение: обратная промывка головки колонны, замена сита или регенеративная хроматографическая колонна.

2. Пиковое расширение или буксировка хвоста

- Причины: старение наполнителя, остаточные активные участки или неправильный pH текучей фазы.

- Решение: настройка проточной фазы pH, регенеративная хроматографическая колонна или замена новой колонны.

3. Дрейф времени удержания

- Причины: изменение фазового состава потока, колебания температуры столба или частичный отказ наполнителя.

- Решение: Проверьте соотношение фаз потока, стабилизируйте температуру столба, при необходимости регенерируйте или замените хроматографическую колонну.

VI. ПРИМЕЧАНИЯ

1.Избегайте попадания пузырьков: пузырьки разрушают конструкцию столбчатого слоя, что приводит к увеличению пустоты наполнителя и влияет на эффект разделения.

2. Запрещение несовместимых растворителей: например, тетрагидрофураны (ТГК) могут растворять силиконовые субстраты и должны использоваться с осторожностью.

3. Регистрация журнала использования: Отслеживание частоты использования хроматографических колонн, типов образцов и операций по техническому обслуживанию для облегчения прогнозирования срока службы.