-
Электронная почта
gptchina@gyrosproteintech.com
-
Телефон
13764581292
-
Адрес
380 Fenglin Road, Xuhui District, Шанхай, комната 1609 - 1613
Mesa Labs
Как сделать анализ остатков белка клетки - хозяина (HCP) более эффективным и надежным
Дата:2024-12-10Читать:1
Хост - клеточный белок (Host cell protein, HCP) является нецелевым белком, производимым или кодируемым клетками - хозяевами (CHO, HEK293, E.coli, Sf9 и т.д.), является основным компонентом примесей, связанных с процессом в биологических препаратах, и хотя подавляющее большинство белков клетки - хозяина (более 99%) удаляются в процессе вниз по течению, все еще может быть небольшое количество остатков HCP, очищенных с фармацевтическими продуктами, некоторые из которых считаются высокорисковыми HCPS, которые могут быть иммуногенными, биологически активными ферментами или могут разлагать молекулярные продукты или добавки, которые имеют важное значение для безопасности лекарств и, следовательно, имеют высокий риск для качества. HCPs находятся в центре внимания фармацевтических компаний и регулирующих органов.
Система экспрессии CHO клеток яичников хомяка в Китае всегда была одной из систем экспрессии млекопитающих, часто используемых в производстве биотехнологических лекарств, таких как моносопротивление, поскольку она способна производить сложные белки, аналогичные тем, которые производятся людьми после перевода. Последующая очистка питательной жидкости CHO обычно включает в себя аффинную стратификацию белка А, а затем очищение для дальнейшего удаления агрегатов, вариантов заряда, HCP и ДНК клетки - хозяина. Подавляющее большинство HCP очищается в процессе очистки, но некоторые HCP могут быть очищены « побегом» из - за двух следующих способов:
1
HCP обладает способностью связываться с особенностями или неспецифическими свойствами продукта и переноситься в процессе;
2
HCP обладает способностью взаимодействовать с белковым А - хроматографическим наполнителем, что приводит к его стирке с продуктом.
HCP Опасности и классификация
Потенциальный риск HCP определяется несколькими факторами, включая адаптацию к лекарственным препаратам, пути введения, частоту введения, количество HCP на дозу, популяцию пациентов, гомологию HCP и человеческих аналогов, а также предыдущий неклинический и / или клинический опыт.
Потенциальное влияние HCP на качество, безопасность и эффективность продукции:
Иммуногенность:Антитела, вызывающие выработку цитокинов и т.д.
Цены:Скопление или деградация белков
стабильность:: добавки для разложения липаза
Безопасность:Взаимодействие с эндогенными белками, иммуногенные добавки
Рабочая группа BPDG HCP разделила воздействие HCP высокого риска на четыре основные категории, основанные на способности одного HCP к совместной очистке с продуктом, частоте его появления в последующих процессах, его способности изменять или разлагать лекарства / добавки и потенциальной иммуногенности:
1) Качество продукции, 2) Препараты, 3) Непосредственные биологические функции организма человека, а также 4) иммуногенность.
В настоящее время существует множество способов идентификации и количественной оценки уровней всех и отдельных специфических HCP, присутствующих в процессе разработки лекарств. Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки. Известные примеси HCP могут быть правильно измерены в соответствии со следующими комплексными аналитическими стратегиями и, если они определены как HCP с высоким риском, разработаны стратегии контроля для мониторинга и / или устранения этих примесей.
01 Измерение общего HCP с помощью иммунометрии (например, ELISA) является основным рабочим средством для определения остаточного уровня HCP для руководства разработкой процесса и поддержки тестирования пакетного выпуска GMP. Ключевые реактивы, необходимые для разработки общей иммунометрии HCP, должны быть подробно описаны.
02 Масс - спектрометрический анализ следует проводить с использованием дополнительных ортогональных методов, таких как 2D - гель электрофорез / Western, и / или антитело - аффинитная экстракция (AAE), для оценки покрытия критически важных антитело - реагентов специфическим для процесса HCP.
03 Общая иммунометрия HCP должна проводиться регулярно для определения уровня HCP в пробах процесса.
04 Рекомендуются ортогональные методы, такие как масс - спектрометрия и / или дополнительные индивидуальные тесты HCP, для обеспечения чистоты продукта, особенно когда иммунометрия обнаруживает повышение общего уровня HCP, наблюдает нелинейность разбавления или наблюдает влияние качества продукта.
05 Если отдельные HCP идентифицированы и считаются потенциально высоким риском:
а
Может потребоваться разработка специального иммунометрического метода для мониторинга известных примесей или целевого масс - спектрометрического анализа для лучшего понимания уровней HCP и их потенциальных последствий.
b)
Если выявленная примесь обладает ферментативной активностью, можно разработать метод определения активности для руководства процессом и разработкой продукта, мониторинга, удаления и / или инактивации белка.
с
Оценка иммуногенности проводится методом in silico, и если прогноз указывает на высокий риск иммуногенности, может быть проведена сравнительная оценка иммуногенности in vitro (IVCIA).
d
Токсикологические исследования для оценки клинического риска.
Методы, используемые для общего качественного и количественного анализа HCP, в основном являются иммунологическими и обычно обнаруживаются с использованием одного или нескольких методов ELISA. Однако традиционная ELISA имеет следующие ограничения:
А
•
Несколько этапов инкубации и промывки, которые требуют много практического и аналитического времени, поток обнаружения образцов очень ограничен;
А
•
Динамический диапазон очень узкий (±100 нг / мл) и требует большого количества повторных испытаний во время технологических исследований в нижнем течении;
А
•
Большое потребление образцов и реагентов является проблемой для обнаружения определенных низких уровней HCP, поскольку очень сложно получить достаточное количество HCP из фармацевтических веществ. Это привело к тому, что ELISA столкнулась с узкими местами в удовлетворении растущей скорости, потока и потребления образцов командой разработчиков процессов в нижнем течении.
Таким образом, все больше и больше фармацевтических компаний переходят на высокопроизводительные иммуноаналитические платформы, которые помогают увеличить поток и ускорить оборот, такие как Gyrolab от Gyros®Полностью автоматизированная платформа иммунологического анализа, технология Gyrolab использует микрошарики, покрытые пакетами стрептоплесени, для захвата биогенных реагентов для захвата, а образцы в сочетании с реагентами для захвата обнаруживаются с помощью флуоресцентных детекторов. Иммунометрия, проведенная в проточном режиме (Flow - through) на сродстве, была очень быстрой и не требовала времени инкубации, что значительно сократило время, необходимое для завершения анализа, и потребление образцов и реактивов по сравнению с традиционным ELISA. Полностью автоматизированная управляемая работа обеспечивает отличную повторяемость обнаружения Gyrolab. Таким образом, автоматизированный метод анализа высокой пропускной способности Gyrolab обеспечивает эффективную поддержку HCP - анализа при разработке процессов и QC - тестировании:
А
Быстрый анализ эффективности оборота;
А
Отличный контрольный поток;
А
Качество данных является надежным, а результаты имеют высокую повторяемость.
В целом, этот подход может повысить эффективность сектора биоанализа, значительно сократить время ручной работы, устранить требования к повторным измерениям, вызванные ошибкой разбавления или человеческой ошибкой, и значительно повысить производительность, качество и повторяемость результатов анализа.
