Подготовка хроматографических колонн HPLC является важным инструментом для разделения и очистки соединений в высокоэффективной жидкостной хроматографии (High Performance Liquid Chromatography).

- Столбчатые трубы: обычно изготовлены из нержавеющей стали или стекла с хорошей выдержкой давления и химической стабильностью. Внутренний диаметр колонны определяет наполнение хроматографической колонны и размер разделения, а внутренний диаметр обычно готовой хроматографической колонны находится в пределах 50 - 200 мм.

- Заполнитель: является основной частью хроматографической колонны, общие наполнители включают силикон, оксид алюминия, органические полимерные микросферы и так далее. Наборы силиконовой матрицы имеют лучшую механическую прочность и химическую стабильность, и разделение различных полярных соединений может быть достигнуто путем соединения различных функциональных групп (например, C18, C8, C4 и т.д.).

- Ситеи: Расположенные на обоих концах цилиндрической трубки, используются для поддержки наполнителя, предотвращения утечки наполнителя, гарантируя при этом, что текучая фаза может равномерно проходить через хроматографическую колонну.

Шаги использования HPLC для подготовки хроматографических колонн:

1. Подготовительная работа

- Проверка безопасности: обеспечение безопасности лабораторных зон, ношение средств индивидуальной защиты, таких как лабораторная одежда, перчатки и защитные очки.

- Контроль приборов: проверка состояния оборудования HPLC для обеспечения нормальной работы колонн, детекторов, насосов и других компонентов. Включите систему HPLC, установите правильную температуру, скорость потока и другие параметры, чтобы система достигла стабильного состояния.

- Подготовка фазы течения: в соответствии с экспериментальными требованиями составляется фаза течения, фильтруется растворитель или фаза течения фильтром 0,2 мкм и проводится ультразвуковая дегазация для удаления пузырьков и примесей из них.

- Подготовка образца: образец, подлежащий измерению, растворяется и разбавляется до соответствующей концентрации соответствующим растворителем, также фильтруется 0,2 мкм фильтром, чтобы убедиться, что раствор образца очищает без примесей.

2.Установка хроматографических колонн: Подготовленные хроматографические колонны устанавливаются в системе HPLC, обратите внимание, что соединение должно быть плотным, чтобы предотвратить утечку жидкости. Перед установкой можно проверить внешний вид хроматографической колонны на наличие повреждений.

3. Системный баланс: Промыть хроматографическую колонну проточной фазой, общее время промывки составляет 15 - 30 минут, пока исходный уровень не стабилизируется, чтобы обеспечить заполнение хроматографической колонны проточной фазой и достижение равновесия.

4. Пробометрия: Выбор подходящего способа и количества для введения образца в систему HPLC. Начните сбор данных и запишите время удержания хроматографического пика, ширину пика и высшую информацию о пике.

5. Обработка и анализ данных: на основе зарегистрированных данных вычисляются соответствующие параметры хроматографической колонны, такие как число теоретических башен, фактор асимметрии, степень разделения и т. Д. Для оценки производительности хроматографической колонны. Общие методы обработки данных включают определение площади пиков, определение высоты пиков, количественный и качественный анализ.

6. Очистка и сохранение хроматографических колонн: После завершения измерений хроматографические колонны очищаются соответствующим растворителем, чтобы удалить остаточные образцы и фазы течения. Для противофазной хроматографической колонны обычно промывают метанолом или ацетонитрилом, а затем чистой водой; Для положительных хроматографических колонн промыть можно органическими растворителями, такими как гексан. После очистки хроматографические колонны правильно сохраняются, чтобы избежать сухости и загрязнения.