Новый стандарт - NY / T 4630 - 2025 Измерение альфа - и бета - молочных белков в коровьем молоке и его продуктах

О нас

Thermo Fisher Scientific consumables for chromatography

Электронная почта
zoe.wang2@thermofisher.com
Телефон
18516780105
Адрес
Xinjinqiao дорога, No.27, здание 6

Дата:2025-05-27Читать:1

Введение

Сырое коровье молоко богато несколькими природными активными белками, такими как альфа - лактогемин (α - Lactalbumin), бета - лактоглобулин (β - Lactoglobulin), лактоферрин (Lactoferrin, LF), иммуноглобулин G (Immunoglobulin G, IgG) и молочные пероксидазы (Lactoperoxidase, LP), которые играют важную роль в борьбе с бактериями, вирусным вторжением, укреплении иммунитета, содействии восстановлению тканей и росту и развитию. Среди них альфа - лактобелок обладает противораковым, антибактериальным и противовирусным действием, регулирует иммунную функцию, способствует синтезу лактозы и молочной секреции; Бета - молочный глобулин обладает снижением уровня холестерина, антиоксидантной и противовирусной активностью и способствует пищеварению и усвоению жирорастворимых витаминов. Различные методы термообработки (пастеризация, ультравысокотемпературная (UHT) стерилизация, концентрация испарения и сушка распылением и т. Д.) могут привести к различной степени дегенеративной инактивации альфа - и бета - молочных глобулинов в молочных продуктах, что влияет на их питательную ценность и рыночную цену продажи.

Основные моменты новой программы Symerfei

1.Это исследование основано на NY / T 4630 - 2025 и соответствующих групповых и корпоративных стандартах для определения содержания альфа - и бета - лактоглобулинов в пастеризованном молоке, ультравысокотемпературном стерилизованном молоке и молочном порошке для младенцев и детей.NY / T 4630 - 2025 вступит в силу 1 мая 2025 годаА.

2. В этом эксперименте используются твердотельные ядерные частицы Accucore 150 C4 хроматографические колонки с диаметром частиц 2,6 мкм при более низкой скорости потока (0,8 мл/минМеньший объем входного образца (10 мклБолее высокая частота выборки (10 ГцТаким образом, альфа - альбумин и бета - лактоглобулин имеют пиковую форму и степень разделения в соответствии со стандартом.

3. Для получения хорошего пика и разделения испытания были надлежащим образом оптимизированы условия предварительной обработки проб и хроматографии жидкой фазы. При температуре столба 60°C и скорости потока 0,8 мл / мин градиент смывается с 0,1% трифторуксусной кислоты воды - 0,1% трифторуксусной кислоты ацетонитрила в качестве фазы потока, максимальное давление системы не превышает110 барА.

4. Результаты испытаний показали, что альфа - лактопротеин и бета - лактоглобулин имеют хорошую хроматографию пиковой формы, превосходный эффект колонны и отличную степень разделения, в том числеОсновные альфа - альбуминовые пики отделяются от близлежащих пиков помех значительно лучше, чем стандартные спектрограммы. α - лактопротеин и β - лактоглобулин смешиваются со стандартным раствором продукта (100 мкг / мл), время удержания α - лактопротеина составляет 21,9 тыс. мин, коэффициент асимметрии 0,98, теоретическое число тарелок 321137; Время удержания бета - лактоглобулина B составляет 24.747 мин, асимметричный фактор 1.01, теоретическое число панелей 352451; Время удержания бета - лактоглобулина A составляет 25.467 мин, асимметричный фактор 1.00, теоретическое число панелей 373359; Степень разделения α - молочного белка и β - молочного глобулина B составляет 17,77, а β - молочного глобулина B и β - молочного глобулина A - 4,33; Четыре последовательных входа, время удержания и площадь пика RSD меньше 0,3%, метод воспроизведения хорош; Альфа - лактоальбумин стандартный раствор линейный диапазон 0,00 - 200 мкг / мл, коэффициент линейной корреляции r²09997, бета - лактоглобулин стандартный раствор линейный диапазон 0,00 - 200 мкг / мл, коэффициент линейной корреляции r²≥ 0.9991, Линейная хорошая.

5. В экспериментах с использованием антифазной жидкостной хроматографии для определения содержания альфа - и бета - альбумина в молочных продуктах,Accucore 150 С4Колонна хроматографии в сочетании с высокоэффективной жидкостной хроматографической системой Vanquish Core демонстрирует хорошую воспроизводимость и отличную стабильность, методологические ограничения обнаружения и количественные ограничения соответствуют стандартным требованиям для молочных предприятий и лабораторий тестирования пищевых продуктов.

6.Ссылаясь на соответствующую литературу, в эксперименте с гелеопроницаемой хроматографией для определения содержания альфа - и бета - альбумина в молочных продуктах последовательно использовались дваMAbPac SEC-1 (300 А, 5 мкм, 7,8×300 мм)Объемный резистивный хроматографический столб, равномерно очищенный от 6 - М гуанидина в качестве проточной фазы, эффективно отделяет альфа - альбумин и бета - молочный глобулин при 280 нм.

Нажмите вниз, чтобы увидеть все

Нью-Йорк / Т 4630-2025

Полное прикладное решение SymerFlight

Предварительная обработка образцов

1.1 Образец жидкости: низкотемпературное молоко (сырое коровье молоко, пастеризованное молоко) / молоко при комнатной температуре (ультравысокотемпературное (UHT) стерилизованное молоко)

Предполагаемый образец 5 г (с точностью до 0,1 мг) в центрифуге со спиральной крышкой с шкалой 50 мл, смешивается с умеренным количеством водяного вихря 30 с, после регулировки pH с умеренным количеством уксусной кислоты 4,60 ± 0,05, вода устанавливается до 25,0 мл, вихрь смешивается на 1 мин, статическое удержание более 30 мин, 12 000 rpm 4 °C центрифуга 15 мин. Взять очищающую жидкость (которая может быть разбавлена, когда это уместно, сверхчистой водой), более 0,2 мкм гидрофильного микропористого фильтра PTFE (P / N: 42213 - NPL), фильтр должен быть протестирован на борту.

1.2 Твердый образец: молочная смесь (детская смесь)

Предполагаемый образец 2 г (с точностью до 0,1 мг) в центрифуге со спиральной крышкой с шкалой 50 мл, с соответствующим количеством вихревого смешивания 1 мин для его полного растворения (при необходимости, для ванны с теплой водой), с умеренным количеством уксусной кислоты, регулируемой pH 4,60 ± 0,05, вода с фиксированным содержанием до 25,0 мл, вихревое смешивание равномерно 1 мин, статическое удержание более 30 мин, 12 000 рм при 4°С центрифуга 15 мин. Взять очищающую жидкость (которая может быть разбавлена, когда это уместно, сверхчистой водой), более 0,2 мкм гидрофильного микропористого фильтра PTFE (P / N: 42213 - NPL), фильтр должен быть протестирован на борту.

Нажмите вниз, чтобы увидеть все

Настройка приборов и хроматографические условия

Thermo Scientific ™ Vanquish Core ™ Высокоэффективная жидкостная хроматографическая система, конфигурация: насос Quaternary Pump C (VC - P20 - A), автоматический прототип Split Sampler CT (VC - A12 - A), цилиндрический термостат Column Compartment C (VC - C10 - A), детектор Diode Array Detector CG (VC - D11 - A), обработка данных Chromeleon ™ 7.3.

Колонна хроматографии: Accucore 150 C4, 2,6 мкм, 4,6 × 150 мм (P / N: 16526 - 154630)

Текущая фаза: A: 0,1% ТФУ - уксусная кислота Вода B: 0,1% ТФУ - ацетонитрил

Скорость потока:0.8мл/мин

Градиентная стирка:

Образец:10мкл

Столбчатая температура: 60°C

Детектор: DAD, длина волны сбора: 210 нм; частота сбора:10Гц; спектральный сбор: 190 - 400 нм

Нажмите вниз, чтобы увидеть все

Спектральные карты и данные

3.1 Спектроскопические карты разделения и данные о смеси альфа - альбумина и бета - лактоглобулина в стандартных продуктовых растворах

Рисунок 1 Спектроскопические карты разделения и данные о смеси альфа - альбумина и бета - лактоглобулина в стандартных продуктовых растворах (100 мкг / мл)(Нажмите для просмотра большой карты)

Как показано на рисунке 1, альфа - альбумин и бета - лактоглобулин имеют хорошие хроматографические пики, имеют отличные цилиндрические эффекты и имеют более высокую степень разделения, чем стандарт. Время удержания альфа - альбумина составляет 21,9 тыс. мин, асимметричный фактор 0,98, теоретическое число тарелок 321137; Время удержания бета - лактоглобулина B составляет 24.747 мин, асимметричный фактор 1.01, теоретическое число панелей 352451; Время удержания бета - лактоглобулина A составляет 25.467 мин, асимметричный фактор 1.00 и теоретическое число панелей 373359. Степень разделения α - молочного белка и β - молочного глобулина B составляет 17,77, а β - молочного глобулина B и β - молочного глобулина A - 4,33.

3.2 Спектроскопическая карта расположения моностандартных растворов альфа - альбумина и бета - лактоглобулина

Рисунок 2 Спектроскопическая карта расположения моностандартных растворов альфа - альбумина и бета - лактоглобулина

Как показано на рисунке 2, альфа - лактоальбумин, бета - лактоглобулин B и бета - лактоглобулин A имеют характерное поглощение на 200 нм и 279 нм.

3.3 Спектроскопия непрерывного введения в стандартный раствор смеси альфа - альбумина и бета - лактоглобулина

Рисунок 3. Спектроскопия непрерывного введения образцов стандартного раствора смеси альфа - альбумина и бета - молочного глобулина (100 мкг / мл, n = 4)

Смешанный стандартный товарный раствор α - лактобелок и β - лактоглобулин (100 мкг / мл) был введен в четыре последовательных образца с RSD менее 0,3% по времени удержания и пиковой площади, метод воспроизводится хорошо, спектрограмма разделения и данные приведены на рисунке 3.

3.4 Диаграмма суперпозиции кривых калибровки растворов альфа - лактопротеина и бета - лактоглобулина

Рисунок 4 Диаграмма наложения кривых калибровки растворов альфа - лактопротеина и бета - лактоглобулина стандартного продукта (0,00 / 40,0 / 80,0 / 120 / 160 / 200 мкг / мл)

Содержание альфа - альбумина и бета - лактоглобулина в сыром молоке, пастеризованном молоке обычно выше, поэтому был выбран линейный диапазон, рекомендованный в двух групповых стандартах T / TDSTIA 002 - 2021 и T / TDSTIA 007 - 2019. Как показано на рисунке 4, линейный диапазон стандартного раствора альфа - альбумина 0,00 - 200 мкг / мл, коэффициент линейной корреляции r²09997, бета - лактоглобулин стандартный раствор линейный диапазон 0,00 - 200 мкг / мл, коэффициент линейной корреляции r²≥ 0.9991, Линейная хорошая. Среди них бета - лактоглобулин B и бета - лактоглобулин A измеряются с использованием группы соединений.

3.5 Спектроскопическая схема наложения стандартных растворов альфа - лактотина и бета - лактоглобулина (40,0 мкг / мл) и пустых растворов

Рисунок 5. Спектроскопия стандартного товарного раствора альфа - лактотина и бета - лактоглобулина (40,0 мкг / мл) и пустого раствора (щелкните, чтобы увидеть большую диаграмму)

При объеме входной пробы 10 мкл пики альфа - и бета - лактоглобулина (40,0 мкг / мл) составляли S, при этом среднее значение шума матрицы в 22,5 - 24,0 мин составляло N, а соотношения сигнала и шума между альфа - лактопротеином, бета - лактоглобулином В и бета - лактоглобулином А составляли 523,3, 139,9 и 133,6, соответственно, как показано на рисунке 5. Таким образом, в сочетании с оптимизацией объема входной пробы, чувствительность альфа - и бета - молочных глобулинов также удовлетворяет требованиям к 1,00 мкг / мл в NY / T 4630 - 2025.

3.6 Спектроскопия смеси альфа - альбумина и бета - лактоглобулина с раствором образца пастеризованного молока

Рисунок 6 Спектроскопическая схема наложения стандартного раствора смеси альфа - альбумина и бета - молочного глобулина с раствором образца пастеризованного молока

В дополнение к сывороточному белку коровье молоко содержит большое количество казеина и других белков, которые могут мешать определению альфа - альбумина и бета - молочного глобулина. Пробы пастеризованного молока после регулировки pH, высокоскоростной центрифуги и других операций предварительной обработки, неизменный альфа - альбумин и бета - молочный глобулин остаются в очищающей жидкости, его разделение сохраняет более высокий пиковый тип, исходный уровень стабилен и пик без помех, как показано на рисунке 6. Содержание альфа - альбумина в пробах пастеризованного молока составило 1033,6 мг / кг и бета - лактоглобулина 2949,0 мг / кг, что в основном соответствует значениям этикетки.

3.7 Папаницидное молоко (низкотемпературное молоко), ультравысокотемпературное стерилизованное молоко (обычное молоко) и смесь для младенцев и детей грудного и раннего возраста

Рисунок 7 Спектроскопия и данные разделения растворов проб пастеризованного молока (криогенного молока)

(Нажмите для просмотра большой карты)

Рисунок 8 Спектроскопия и данные разделения растворов образцов ультравысокотемпературного стерилизованного молока

(Нажмите для просмотра большой карты)

Рисунок 9 Спектроскопия и данные разделения образцов молочного порошка для младенцев и детей

(Нажмите для просмотра большой карты)

Посмотреть больше

Альфа - лактобелок и бета - лактоглобулин более чувствительны к температуре, которая разрушает их химическую структуру и биологическую активность. Как показано на рисунке 7 - 9, в пастеризованном молоке (криогенном молоке) нет явных пиков помех вблизи целевых пиков альфа - и бета - молочных глобулинов, квазиопределенность и количественная оценка, сырое молоко, пастеризованное молоко и другие образцы применяются к первому методу NY / T 4630 - 2025; В то время как ультравысокотемпературное стерилизованное молоко (молоко при комнатной температуре) и детская смесь молочного порошка бета - молочного глобулина вблизи целевого пика очевидных помех, это может серьезно повлиять на качественные и количественные результаты, альфа - молочный белок относительно мало затронут, ультравысокотемпературное стерилизованное молоко, детская смесь молочного порошка и другие образцы не применяются к первому методу NY / T 4630 - 2025, рекомендуется второй метод.

3.8 Хрматография проникновения геля в стандартные растворы альфа - альбумина и бета - лактоглобулина (второй метод)

Рисунок 10 Стандартный раствор альфа - латекса и бета - лактоглобулина (500 мг / л) Гелиосмотическая хроматография (щелкните для просмотра большой карты)

Ссылаясь на статью профессора Ду Жуюня, опубликованную в журнале « Китайская молочная промышленность», « Масштабная резистентная хроматография для определения содержания альфа - альбумина в молоке, молочном порошке и сывороточном порошке » (2022 год), последовательно используя две колонны MAbPac SEC - 1 (300 а, 5 мкм, 7,8 × 300 мм), объемная резистентная хроматография с использованием гуанина соляной кислоты 6 м в качестве проточной фазы для равномерного стирания, при 280 нм эффективном разделении альфа - альбумина и бета - молочного глобулина (как показано на рисунке 10), и протестировав 60 партий молока, молочного порошка и молочного порошка для проверки применимости метода, И стабильность, соответствующие спектральные карты и данные подробно описаны в оригинале.

Выбор хроматографической колонки MAbPac SEC - 1:7.8×300mm， Рекомендуемая скорость потока 0,5 мл / мин для достижения экономии растворителя при условии обеспечения степени разделения.4.0×300mm Специфическая хроматографическая колонка, рекомендуемая скорость потока 0,2 мЛ / мин (может быть соответствующим образом отрегулирована при необходимости).

NY / T 4630 - 2025 Рекомендуемые расходные материалы для хроматографии

4.1 Аналитическая колонка и защитная колонка антифазной жидкостной хроматографии первого метода
Accucore 150 C4, 2,6 мкм, 4,6 х 150 мм	(P/N: 16526-154630)
Accucore 150 C4 Защитный цилиндр, 2,6 мкм, 4,0 × 10 мм, 4 pk	(P/N: 16526-014005)
Защитная колонна Uniguard	(P/N: 850-00)

4.2 Второй метод гелеопроницаемой хроматографии Аналитическая колонна и защитная колонна

Скорость потока:0.5мл/мин
保护柱： MAbPac SEC-1, 5 мкм, 300 А, 4,0×50 мм	(P/N: 074697)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 мкм, 300 А, 7,8×300 мм	(P/N: 088460)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 мкм, 300 А, 7,8×300 мм	(P/N: 088460)

Скорость потока:0.2мл/мин
保护柱： MAbPac SEC-1, 5 мкм, 300 А, 4,0×50 мм	(P/N: 074697)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 мкм, 300 А, 4,0×300 мм	(P/N: 074696)
分析柱： MAbPac SEC-1, 5 мкм, 300 А, 4,0×300 мм	(P/N: 074696)

4.3 Предварительная обработка образцов
Titan 3 Водофильный PTFE игольчатый фильтр, 17 мм, 0,2 мкм, 200 / pk	(P/N: 42213-NPL)

Нажмите вниз, чтобы увидеть все

Список литературы

[1] NY / T 4630 - 2025 Высокоэффективная жидкостная хроматография для определения альфа - и бета - альбумина в коровьем молоке и его продуктах

[2] T / TDSTIA 026–2022 Определение альфа - альбумина, бета - лактоглобулина в молочной смеси для младенцев и детей - гель - осмотическая хроматография

[3] T / TDSTIA 002 - 2021 Высокоэффективная жидкостная хроматография для определения альфа - альбумина в молоке и молочных продуктах

[4] Высокоэффективная жидкостная хроматография для определения содержания альфа - альбумина в молочных продуктах T / CSIQ 77001 - 2020

[5] T / TDSTIA 007 - 2019 жидкостная хроматография для определения бета - молочного глобулина в молоке и молочных продуктах

[6] T / SHNX 001 - 2025 Измерение жидкой хроматографии - последовательной масс - спектрометрии латекса, альфа - альбумина и бета - молочного глобулина в сыром молоке

[7] Ду Жуюнь, Ван Лян, Линь Икан. объемная резистивная хроматография для определения содержания альфа - альбумина в молоке, молочной муке и сывороточном порошке [J]. Китайская молочная промышленность, 2022,50 (04): 46 - 51.

Последняя статья:Новый национальный стандарт - GB 5009.299-2024 Определение латекса в пищевых продуктах

Следующая статья:Технологические инновации Повышение качества Синергетический эффект ~ Мобильные фазовые условия для завершения полимерного анализа белков, мРНК и AAV