- Электронная почта
- Телефон
-
Адрес
Новый район Пудун в Шанхае
Категории продукта
Шанхайская биотехнологическая компания
Набор для обнаружения апоптоза Annexin V
ДоговариваемыйОбновление на05/06
- Модель
- Природа производителя
- Производители
- Категория продукта
- Место происхождения
Обзор
Набор для обнаружения цитопатии Annexin V - APC представляет собой зависимый фосфолипидный связывающий белок Ca2 + с молекулярной массой 35 - 36 кД, который связывается с гипертрофией PS и гипертрофией, которые переворачиваются за пределы мембраны во время цитопатии. Извержение PS происходит до разрыва ядра, фрагментации ДНК и появления белков, связанных с апоптозом, что делает соединение Annexin V и PS ранним апоптозом. ......
Подробности о продукте
Скачать Annexin VТестовый набор презентация
Сохранить температуру:Светоизоляция при 2–8°C
Скачать Annexin VНабор для тестированияМеры предосторожности
1.Долгосрочное отсутствие может быть сохранено при температуре 20°C.
2. Цветовая жидкость Annexin V - APC избегает повторного замерзания. Многократное замораживание может привести к отказу.
3. Хроматическая жидкость Annexin V - APC, требующая длительного хранения, может быть сохранена в небольших количествах при температуре 20°C в зависимости от использования.
4. После распаковки реагента используйте его как можно скорее!
2. Цветовая жидкость Annexin V - APC избегает повторного замерзания. Многократное замораживание может привести к отказу.
3. Хроматическая жидкость Annexin V - APC, требующая длительного хранения, может быть сохранена в небольших количествах при температуре 20°C в зависимости от использования.
4. После распаковки реагента используйте его как можно скорее!
Срок действия
Год
Метод обнаружения
1. Поточный цитометр
2. Лазерная общая фокусировка
3. Флуоресцентный микроскоп
2. Лазерная общая фокусировка
3. Флуоресцентный микроскоп
Применяемая выборка
1. Взвешенные клетки
2. Стенные клетки
2. Стенные клетки
Особенности продукции
Удобно: может быть обнаружен проточным цитометром или флуоресцентным микроскопом;
2.Быстро: эксперимент может быть завершен в течение 1 часа;
Точность: способность точно различать живые клетки, увядающие клетки и некротические клетки и подсчитывать пропорции каждой группы клеток.
2.Быстро: эксперимент может быть завершен в течение 1 часа;
Точность: способность точно различать живые клетки, увядающие клетки и некротические клетки и подсчитывать пропорции каждой группы клеток.
Применение продукции
1. Поточный цитометр
2. Лазерная общая фокусировка
3. Флуоресцентный микроскоп
2. Лазерная общая фокусировка
3. Флуоресцентный микроскоп
Инструменты готовы.
Поточный цитометр или флуоресцентный микроскоп или лазерная фокусировка
2. Центрифуги
3. Мигратор
4.Холодильники
5. Ледяная коробка
2. Центрифуги
3. Мигратор
4.Холодильники
5. Ледяная коробка
Приготовьтесь.
Буфер PBS (pH7.4, 10 мм буферного раствора фосфата, обычно используемого в лаборатории (1x))
HBSS (Hank 's Balanced Salt Solution) - « Hank' s Balanced Salt Solution»
HBSS (Hank 's Balanced Salt Solution) - « Hank' s Balanced Salt Solution»
Расходные материалы готовы
1. Центробежные трубы
2. Сосущая головка
3.Одноразовые перчатки
4. Алюминиевая фольга
2. Сосущая головка
3.Одноразовые перчатки
4. Алюминиевая фольга
Скачать Annexin VНабор для тестированияВнимание при использовании
1. Реактор, содержащийся в трубке с микрореактивом на спиральной крышке, должен быть на короткое время центрифужен перед открытием крышки, чтобы собрать жидкость на внутренней стенке крышки на дно трубы, чтобы избежать потери жидкости при вскрытии крышки, что приведет к недостаточному количеству реагента.
Клеточная обработка требует осторожной работы, чтобы попытаться избежать искусственного повреждения клеток. Центробежная сила как можно меньше без потери клеток, тяжелые подвесные клетки должны действовать мягко, избегая многократных интенсивных ударов. Без вихревых генераторов.
Приложение V - FITC (и т. Д.) и Propidium iodide (и т. Д.) являются светочувствительными веществами, которые во время работы должны быть осторожны, чтобы избежать света и свести к минимуму время их воздействия на свет. При необходимости можно использовать ледяную коробку или алюминиевую фольгу с крышкой. После маркировки клетки остаются в светонепроницаемой среде. Временное воздействие света (< 30 секунд) во время миграции является приемлемым.
Поскольку отмирание клеток является быстрым и динамическим процессом, анализ проводится сразу после окрашивания.
Клеточная обработка требует осторожной работы, чтобы попытаться избежать искусственного повреждения клеток. Центробежная сила как можно меньше без потери клеток, тяжелые подвесные клетки должны действовать мягко, избегая многократных интенсивных ударов. Без вихревых генераторов.
Приложение V - FITC (и т. Д.) и Propidium iodide (и т. Д.) являются светочувствительными веществами, которые во время работы должны быть осторожны, чтобы избежать света и свести к минимуму время их воздействия на свет. При необходимости можно использовать ледяную коробку или алюминиевую фольгу с крышкой. После маркировки клетки остаются в светонепроницаемой среде. Временное воздействие света (< 30 секунд) во время миграции является приемлемым.
Поскольку отмирание клеток является быстрым и динамическим процессом, анализ проводится сразу после окрашивания.
Для обнаружения апоптоза с помощью наборов реагентов Annexin V - FITC (и т.д.) необходимо ориентироваться на живые клетки. Не фиксируйте клетки, фиксированная операция может нарушить результат.
Метод использования
Цвет образца:
1. Центробежный сбор взвешенных клеток. Центрифуга 300 × g - 500 × g сила, 2 - 8 °C, время центрифуги 5 минут, отбросить питательную среду.
Мойте клетки дважды с помощью холодного PBS. (300 × g - 400 × g, 2 - 8°C, центробежное время 5 минут для сбора клеток).
Используйте 100 мкл 1x annexin V - связывающие суспензионные клетки в концентрации 1 - 5 x 106 cells / ml.
Добавьте 5 мкл красителя Annexin V - APC в клеточную суспензию, слегка перемешайте и вылупляйте в течение 5 - 15 минут при 2 - 8°C.
5. После добавления красителя PI (или 7 - AAD) мягко перемешивается и вылупляется в течение 1 - 3 минут в условиях фотоизоляции при 2 - 8°C. (Этот шаг выбран, и в соответствии с экспериментальными потребностями может быть сделано только одно окрашивание APC).
Добавьте 400 мкл PBS или 1X Annexin V - связывающий раствор, слегка перемешайте.
7. Немедленное обнаружение с помощью проточного цитометра.
Поточный цитометрический анализ:
Обработанные клетки в это время могут быть проанализированы на проточном цитометре.
В соответствии с обычной процедурой обнаружения увядания потока.
Длина волны флуоресцентного возбуждения Annexin V - APC 652 м, длина волны излучения 670 м; длина волны флуоресцентного возбуждения PI 535 м, длина волны излучения 620 м.
Прежде чем приступить к тестированию, необходимо подготовить образец контроля качества с помощью измеренной клетки, которая должна была бы установить флуоресцентную компенсацию проточного цитометра и установить диапазон крестообразных дверей:
(I) Клетки без транскрипции маркеров, таких как GFP
(1) Пустая трубка: клетки отрицательной контрольной группы, клетки без окрашивания. Без Annexin V / APC, PI. Используется для регулирования напряжения.
Монокластическая трубка: с явно отмирающими клетками, только с окрашиванием Annexin V / APC. Для корректировки компенсации.
3) Монокластическая трубка: есть явно увядающие клетки, только с PI - окрашиванием. Для корректировки компенсации
(iv) Контрольные трубки: клетки обработки, подлежащие измерению, плюс Annexin V / APC, PI. После регулировки компенсации напряжения пустой трубкой и одноанодной трубкой получаются необходимые потоковые данные.
(II) Транскрипция клеток GFP
(1) Нетранскриптированные пустые трубки: неинкорпорированные клетки, клетки отрицательной контрольной группы, клетки без окрашивания. Без Annexin V / APC, PI. Используется для регулирования напряжения.
Транскрипция пустой трубки GFP: транскрипция клеток контрольной группы GFP без окрашивания. Без Annexin V / APC, PI. Для возмещения расходов
(3) Нетранскрипционные монохроматозоиды: неинкорпорированные и явно увядающие клетки с добавлением только окраски Annexin V / APC. Для корректировки компенсации.
(4) Нетранскриптированные монохроматозоиды: неинкорпорированные и явно увядающие клетки, только с PI - окрашиванием. Для корректировки компенсации
(5) Контрольная трубка: измеренные клетки обработки, плюс Annexin V / APC, PI. После регулировки компенсации напряжения пустой трубкой и одноанодной трубкой получаются необходимые потоковые данные.
1. Центробежный сбор взвешенных клеток. Центрифуга 300 × g - 500 × g сила, 2 - 8 °C, время центрифуги 5 минут, отбросить питательную среду.
Мойте клетки дважды с помощью холодного PBS. (300 × g - 400 × g, 2 - 8°C, центробежное время 5 минут для сбора клеток).
Используйте 100 мкл 1x annexin V - связывающие суспензионные клетки в концентрации 1 - 5 x 106 cells / ml.
Добавьте 5 мкл красителя Annexin V - APC в клеточную суспензию, слегка перемешайте и вылупляйте в течение 5 - 15 минут при 2 - 8°C.
5. После добавления красителя PI (или 7 - AAD) мягко перемешивается и вылупляется в течение 1 - 3 минут в условиях фотоизоляции при 2 - 8°C. (Этот шаг выбран, и в соответствии с экспериментальными потребностями может быть сделано только одно окрашивание APC).
Добавьте 400 мкл PBS или 1X Annexin V - связывающий раствор, слегка перемешайте.
7. Немедленное обнаружение с помощью проточного цитометра.
Поточный цитометрический анализ:
Обработанные клетки в это время могут быть проанализированы на проточном цитометре.
В соответствии с обычной процедурой обнаружения увядания потока.
Длина волны флуоресцентного возбуждения Annexin V - APC 652 м, длина волны излучения 670 м; длина волны флуоресцентного возбуждения PI 535 м, длина волны излучения 620 м.
Прежде чем приступить к тестированию, необходимо подготовить образец контроля качества с помощью измеренной клетки, которая должна была бы установить флуоресцентную компенсацию проточного цитометра и установить диапазон крестообразных дверей:
(I) Клетки без транскрипции маркеров, таких как GFP
(1) Пустая трубка: клетки отрицательной контрольной группы, клетки без окрашивания. Без Annexin V / APC, PI. Используется для регулирования напряжения.
Монокластическая трубка: с явно отмирающими клетками, только с окрашиванием Annexin V / APC. Для корректировки компенсации.
3) Монокластическая трубка: есть явно увядающие клетки, только с PI - окрашиванием. Для корректировки компенсации
(iv) Контрольные трубки: клетки обработки, подлежащие измерению, плюс Annexin V / APC, PI. После регулировки компенсации напряжения пустой трубкой и одноанодной трубкой получаются необходимые потоковые данные.
(II) Транскрипция клеток GFP
(1) Нетранскриптированные пустые трубки: неинкорпорированные клетки, клетки отрицательной контрольной группы, клетки без окрашивания. Без Annexin V / APC, PI. Используется для регулирования напряжения.
Транскрипция пустой трубки GFP: транскрипция клеток контрольной группы GFP без окрашивания. Без Annexin V / APC, PI. Для возмещения расходов
(3) Нетранскрипционные монохроматозоиды: неинкорпорированные и явно увядающие клетки с добавлением только окраски Annexin V / APC. Для корректировки компенсации.
(4) Нетранскриптированные монохроматозоиды: неинкорпорированные и явно увядающие клетки, только с PI - окрашиванием. Для корректировки компенсации
(5) Контрольная трубка: измеренные клетки обработки, плюс Annexin V / APC, PI. После регулировки компенсации напряжения пустой трубкой и одноанодной трубкой получаются необходимые потоковые данные.
Анализ часто задаваемых вопросов
Во время эксперимента Annexin V не был окрашен или имел низкую положительную реакцию. Возможные причины этого заключаются в следующем:
1. Неправильная установка проточных цитометров / микроскопов для обнаружения. Настройка правильного оборудования.
Определить, может ли индуктор в эксперименте вызвать апоптоз. Это можно исключить, установив положительный фармацевтический контраст, который точно индуцирует увядание.
3.Клетки не инициируют апоптоз. Переопределить точку времени запуска индуцированного апоптоза (хронологический эксперимент).
4.Количество клеток невелико. Увеличение количества клеток.
5. Неправильное пищеварение клеток, прикрепленных к стенке. Для связывания Annexin V с PS требуется ион Ca2 +, содержащий Ca2 + в связывающей жидкости, пищеварение EDTA влияет на окрашивание, рекомендуется использовать без EDTA или промыть его PBS после переваривания.
В ходе эксперимента была высокая положительная реакция. Возможные причины этого заключаются в следующем:
1. Неправильная установка проточных цитометров / микроскопов для обнаружения. Настройка правильного оборудования.
2.Клетки сами по себе слишком плохо динамичны. В ходе эксперимента было обнаружено, что доля двойных положительных клеток AnnexinV + / PI + после окрашивания контрольных клеток, которые умерли без индукции, была слишком высокой, что может быть вызвано плохой активностью самих клеток. Рекомендуется вычислять жизнеспособность клеток с помощью синей окраски, которая должна превышать 95%. При низкой жизнеспособности рекомендуется восстанавливать клетки, которые, как правило, восстанавливаются после передачи по крайней мере 3 раз, прежде чем проводить эксперименты.
1. Неправильная установка проточных цитометров / микроскопов для обнаружения. Настройка правильного оборудования.
Определить, может ли индуктор в эксперименте вызвать апоптоз. Это можно исключить, установив положительный фармацевтический контраст, который точно индуцирует увядание.
3.Клетки не инициируют апоптоз. Переопределить точку времени запуска индуцированного апоптоза (хронологический эксперимент).
4.Количество клеток невелико. Увеличение количества клеток.
5. Неправильное пищеварение клеток, прикрепленных к стенке. Для связывания Annexin V с PS требуется ион Ca2 +, содержащий Ca2 + в связывающей жидкости, пищеварение EDTA влияет на окрашивание, рекомендуется использовать без EDTA или промыть его PBS после переваривания.
В ходе эксперимента была высокая положительная реакция. Возможные причины этого заключаются в следующем:
1. Неправильная установка проточных цитометров / микроскопов для обнаружения. Настройка правильного оборудования.
2.Клетки сами по себе слишком плохо динамичны. В ходе эксперимента было обнаружено, что доля двойных положительных клеток AnnexinV + / PI + после окрашивания контрольных клеток, которые умерли без индукции, была слишком высокой, что может быть вызвано плохой активностью самих клеток. Рекомендуется вычислять жизнеспособность клеток с помощью синей окраски, которая должна превышать 95%. При низкой жизнеспособности рекомендуется восстанавливать клетки, которые, как правило, восстанавливаются после передачи по крайней мере 3 раз, прежде чем проводить эксперименты.
Похожий продукт рекомендовать
