Набор красителей TRAP

Светоизоляция при 2–8°C

Срок годности составляет срок годности, который должен быть сохранен в требуемых условиях до того, как упаковка не будет распечатана.
2.После распаковки реагента используйте его как можно скорее!

3 месяца (Примечание: инкубационный раствор внутри является одноразовым и эффективен в течение недели!)

Микроскоп

1. Парафиновые разрезы
2. Замороженный срез
3.Клеточный мазок, ползунок
4. Анализ крови и т.д.

1 Оптический микроскоп
2. Цилиндры для красителей
3. Мигратор
4. Секундомер
5. Ледяная коробка

чистая вода

1. Вездесущее стекло
2. Сосущая головка
3.Одноразовые перчатки

1.TRAP инкубационный раствор легко терпит неудачу, этот метод должен быть использован для пункции кожи кровяным покрытием, после сушки должен быть своевременно окрашен;
При окрашивании замороженных срезов следует уменьшить время воздействия срезов при комнатной температуре.
3. Образцы должны быть свежими и должны обрабатываться немедленно после взятия материала, иначе это повлияет на активность фермента.
Фиксирование тканей должно проводиться в холодильнике при температуре 4°C, время не должно превышать 24 часов, иначе ферментативная активность ослабеет или исчезнет.
5. Как правило, парафиновые разрезы не рекомендуются. При необходимости разреза парафином температура ткани не должна превышать 56°C при захоронении в парафиновой упаковке. Для парафинирования следует использовать парафин с температурой плавления от 52 до 54°C, время погружения должно быть коротким, иначе энзимная активность ослабеет или исчезнет.
6. Парафиновые срезы не требуют фиксации.

(Примечание: инкубационный раствор внутри является одноразовым и эффективен в течение недели!)
Примечание: Другие рабочие жидкости, пожалуйста, используйте перед свежим приготовлением, используйте сразу после приготовления, один раз после использования, не может быть помещен.

Крашение образца:
I. Анализ крови и костного мозга
1, Твиттер:
Возьмите цельную кровь или костный мозг 3ul влево и вправо на несущем стекле, толкающее стекло поддерживается под углом 30° с несущим стеклом, помещается прямо перед каплями крови, слегка перемещается назад и контактирует с каплями крови, капли крови рассеиваются вдоль нижней кромки толкателя, а затем плавно скользят вперед вдоль плоскости несущего стекла, пока капли крови не покроют мембрану крови. Не будьте слишком тонкими, чтобы клетки не были слишком маленькими и не слишком толстыми, чтобы избежать слишком перекрывающихся.
2, фиксированный:
Пусть мазок высыхает естественным образом в воздухе, затем помещается в стационарную жидкость А в этом наборе реагентов для фиксации в течение 2 - 3 минут и промывается водой в течение 30 - 60 секунд.
3 Инкубация:
После промывки в течение 60 минут после высыхания помещается в субстрат инкубатора. После слишком сухого окрашивание ухудшается.
4 Повторное заражение:
После инкубации вынимайте воду и мойте ее в течение 1 минуты, прежде чем стекло высохнет. Можно повторно покрасить сульфином в течение 1 - 2 минут или повторно покрасить метилзеленым в течение 2 - 3 минут, оба варианта достаточно.

II. Клеточные мазки и клеточные ползуны
1, фиксированный:
Клеточный мазок или клеточный ползунок помещают в стационарную жидкость А в этом наборе для фиксации в течение 2 - 3 минут и промывают водой в течение 30 - 60 секунд.
2 Инкубация:
После промывки в течение 60 минут после высыхания помещается в субстрат инкубатора. После слишком сухого окрашивание ухудшается.
3 Повторное заражение:
После инкубации вынимайте воду и мойте ее в течение 1 минуты, прежде чем стекло высохнет. Можно повторно покрасить сульфином в течение 1 - 2 минут или повторно покрасить метилзеленым в течение 2 - 3 минут, оба варианта достаточно.

III. Замороженный разрез
1. Отопление:
Замороженные срезы, хранящиеся в холодильнике с температурой 20°C, помещаются на раму для резки, чтобы вернуться к температуре в течение 5 - 10 минут. Для регенерации можно поместить в инкубатор с температурой 37° C или в крошечную коробку, где коробка помещается в водяную ванну с температурой 37° C для регенерации.
2. Гидратация:
Перегреваем хорошо разогретый срез, замачиваем в воде на 1 - 2 минуты.
3, фиксированный:
Пусть срез высыхает естественным образом в воздухе, затем помещается в фиксированную жидкость в этом наборе реагентов для фиксации в течение 2 - 3 минут, а вода промывается в течение 30 - 60 секунд.
4 Инкубация:
После промывки в течение 60 минут после высыхания помещается в субстрат инкубатора. После слишком сухого окрашивание ухудшается.
5 Повторное заражение:
После инкубации вынимайте воду и мойте ее в течение 1 минуты, прежде чем стекло высохнет. Можно повторно покрасить сульфином в течение 1 - 2 минут или повторно покрасить метилзеленым в течение 2 - 3 минут, оба варианта достаточно.

IV. Парафиновые разрезы
1. Депарафинирование:
Дитолуол депарафинируется в течение 5 - 10 минут. Замените свежий ксилол обезпарафинированным в течение 5 - 10 минут.
2, Погрузить:
Безводный этанол в течение 5 минут. Затем используйте 90%, 70% этанола по 2 минуты соответственно.
3. Гидратация:
Пропитывать в дистиллированной воде 2 минуты.
4 Инкубация:
Перед высыханием поместите в инкубатор для донных инкубаторов и избегайте света в течение 60 минут. После слишком сухого окрашивание ухудшается.
5 Повторное заражение:
После инкубации вынимайте воду и мойте ее в течение 1 минуты, прежде чем стекло высохнет. Можно повторно покрасить сульфином в течение 1 - 2 минут или повторно покрасить метилзеленым в течение 2 - 3 минут, оба варианта достаточно.

Анализ результатов:
Положительная реакция - ярко - красные или темно - красные частицы, локализованные в плазме.

1 Клеточная индукция не удалась?
Качество цитокинов имеет важное значение, когда клетки клеточной линии или протоклетки BMM индуцируют сломанные костные клетки. При плохом индукционном эффекте можно рассмотреть возможность корректировки индукционных условий, повышения концентрации RANKL или попытаться добавить M - CSF.

2.Как определить положительную клетку?
Обычно без объяснения морфологических изменений клетки RAW очень разнообразны в морфологии, морфологические изменения не могут объяснить проблему. Считается, что многоядерные плюс TRAP - положительные могут считаться многоядерными костными клетками.

1.Guiping Chen и др.
Бергаптен подавляет индуцированный RANKL остеокластогенез и индуцированный ovarиектомией остеопороз посредством подавления сигнальных путей NF-κB и JNK
Биохимические и биофизические исследования 2019

2. Вэнь-Йонг Фэй и др.
Магнолол предотвращает потерю костей, вызванную яичниковой томией, подавляя остеокластогенез посредством ингибирования ядерного фактора κB и путей протеинкиназы, активированных митогеном
Международный журнал молекулярной медицины 2019