Набор для тестирования ELISA на ферменты синего языка

Инструкция по использованию наборов для обнаружения антител на основе фермента синего языка

Принцип обнаружения

Набор состоит из предварительно упакованных ферментных пластин, маркеров ферментов и других вспомогательных реагентов, которые были антигенами вируса синего языка. Во время эксперимента в энзимную пластину были добавлены контрольные сыворотки и образцы, подлежащие тестированию. После термического размножения, если образец содержит антитела к вирусу синего языка, он будет соединен с антигенами на ферментной пластине и очищен, чтобы удалить другие несвязанные компоненты; Добавьте маркеры ферментов, которые будут специфически связываться с антигенными антителами на ферментных маркерах; После промывки удаляются несвязанные маркеры ферментов, в отверстие добавляется субстрат TMB, который реагирует с соединением фермента, образуя синий продукт, а глубина цвета положительно коррелирует со специфическим содержанием антител в образце; После добавления жидкости для прекращения реакции продукт становится желтым; Значение поглощения света в каждом реакционном отверстии измеряется с помощью энзимометра на длине волны 450 нм, чтобы определить, содержит ли образец антитела к вирусу синего языка.

Состав комплекта

Хранение и срок действия

Сохранение при температуре 2–8°С, срок действия 12 месяцев.

После того, как пакет был распечатан пластиной, пожалуйста, сохраните его от света при температуре от 2 до 8°C, чтобы избежать влаги. Срок службы 2 месяца.

Применяемые приборы

Ферментометр с длиной волны 450 нм, термостат 37°C, регулируемый микропереносчик.

Подготовка образцов

1. Взять всю кровь животных в соответствии с обычным методом подготовки сыворотки, требуя, чтобы сыворотка была яркой, без растворения крови, без загрязнения. Образец может быть сохранен при температуре от 2 до 8°C в течение 1 недели и должен быть сохранен при температуре 20°C в течение длительного времени.

2. Перед использованием концентрированный промывочный раствор должен быть восстановлен до комнатной температуры для растворения осаждения, а затем в 20 раз разбавлен дистиллированной или деионизированной водой в рабочий промывочный раствор (например, 19 дистиллированной или деионизированной воды плюс 1 концентрированный промывочный раствор).

Метод проверки

1. Перед использованием в течение 30 минут установить в комплекте комнатную температуру и восстановить ее до комнатной температуры.

2.Возьмите необходимое количество ферментативной маркировочной пластины, установите отрицательный, положительный контрольный 1 отверстие, неиспользованная пластина как можно скорее запечатана, 2 - 8°C сохранена.

3. Пробное отверстие сначала добавляется в образец 5ul, подлежащий проверке, а затем в разбавленный раствор образца 95ul, который полностью колеблется и смешивается.

4. Отрицательные и положительные контрольные отверстия добавляются соответственно к отрицательным и положительным контрольным отверстиям 100 мкл.

5. Смешайте, накройте пленку крышки и поместите инкубатор 37°C в течение 30 минут.

Сброс жидкости из отверстия, добавление 250ul рабочей моющей жидкости на отверстие, смывание в течение 60секунд методом сотрясающего смешивания и удаление, повторная промывка 5 раз * после высыхания жидкости.

7. Маркер фермента на отверстие составляет 100 мкл, при этом в течение 30 минут устанавливается светозащитная реакция при температуре 37°С.

8. Выбрасывать жидкость из отверстия, добавлять 250ul рабочей моющей жидкости на отверстие, смывать ее в течение 60секунд путем сотрясающего смешивания и сбрасывать, повторно промывать 5 раз, * после высыхания жидкости.

9. Цветовая жидкость А и цветная жидкость В равномерно смешиваются в пропорции равного объема в качестве рабочей жидкости на дне в зависимости от количества проб, которые в настоящее время используются. Добавьте 100ul на отверстие, установите светонепроницаемую реакцию 37°C в течение 10 минут, и если общая скорость проявления цвета слишком быстра, вы можете закончить яркость на 5 минут раньше, время проявления цвета * не более 15 минут.

10. На отверстие добавляется 100 мкл концевой жидкости, которая смешивается и измеряется светопоглощающим значением (OD) для каждого отверстия на 450 нм.

Исходное значение

Эксперимент в норме, положительная контрольная OD - отрицательная контрольная OD > 0,2.

Толкование результатов проверки

1. S / P = (образец OD - отрицательный контрольный OD) / (положительный контрольный OD - отрицательный контрольный OD).

2. Результаты интерпретируются как положительные при S / P ≥ 0,4.

3.0.2 Результаты 0,2 < S / P < 0.4 учитывают возможное наличие недостаточной эффективности антител или подозрение на инфекцию.

4. Результаты интерпретируются как отрицательные при S / P < 0,2.

Ограничения методов испытаний

1. Настоящий комплект представляет собой лишь приблизительную оценку антител к вирусу синего языка в качественных пробах.

Настоящий набор предназначен исключительно для исследований и не может использоваться в клинических экспериментах или экспериментах на людях.

Меры предосторожности

1.Экспериментальные операции должны проводиться в перчатках, рабочей одежде, строгом совершенствовании и внедрении системы дезинфекции и изоляции, все виды экспериментальных отходов должны обрабатываться в соответствии с инфекционными веществами.

2. Прекращающая жидкость является коррозионной и должна избегать контакта с кожей и одеждой, а в случае неосторожного контакта немедленно промыть ее большим количеством водопроводной воды.

При извлечении из холодильной среды ферментная пластина должна быть восстановлена до комнатной температуры, прежде чем мешок может быть открыт, а неиспользованная ферментная пластина должна храниться в герметичном пакете с осушителем.

4. Концентрированный промывочный раствор легко кристаллизуется при низких температурах и должен быть восстановлен до комнатной температуры для растворения.

5. Образцы, используемые для тестирования, должны оставаться свежими.

Результаты испытаний должны определяться на основе показаний энзимометра.

7. Компоненты реагентов разных партий не должны смешиваться.