Коэффициент роста эндотелиальных клеток кровеносных сосудов крупного рогатого скота (VEGF) ELISA

Коэффициент роста эндотелиальных клеток кровеносных сосудов крупного рогатого скота (VEGF) ELISA

Условия хранения и срок действия

1. Хранение в комплекте реагента: 2−8 °C.

2. Срок действия: 6 месяцев

Принцип эксперимента

В этом наборе для определения уровня фактора роста эндотелиальных клеток (VEGF) кровеносных сосудов крупного рогатого скота в образце применяется метод двойного антитело. С очищенным эндотелиальным фактором роста (VEGF) кровеносных сосудов крупного рогатого скота антитело упаковано микропористой пластиной, изготовлено твердофазное антитело, последовательно добавляется фактор роста эндотелиальных клеток кровеносных сосудов (VEGF) в микроотверстия с монорезистентным пакетом, а затем связывается с антителом фактора роста эндотелиальных клеток кровеносных сосудов (VEGF), маркированным HRP, образуя антитело - антиген - ферментативный антитело комплекс, после скрещивания - дная промывка с субстратом TM ТМБ преобразуется в синий цвет под воздействием фермента HRP и в окончательный желтый под действием кислоты. Глубина цвета положительно коррелирует с фактором роста эндотелиальных клеток кровеносных сосудов (VEGF) в образце. Абсорбция (OD) измеряется с помощью энзимометра на длине волны 450 нм, а концентрация факторов роста эндотелиальных клеток кровеносных сосудов крупного рогатого скота (VEGF) в образце рассчитывается с помощью стандартной кривой.

Состав комплекта

1Тридцатикратное обогащение.20 мл х 1 бутылка7Конец жидкости6 мл х 1 бутылка

2Ферментный реактив6 мл х 1 бутылка8Стандартная продукция (3200pg / ml)0,5мл х 1 бутылка

3Пластина ферментативного пакета12 отверстий х 8 шт.9Стандартный разбавленный раствор1.5 мл х 1 бутылка

4Образцовый разбавитель6 мл х 1 бутылка10инструкция1 экземпляр

5Цветовой агент А6 мл х 1 бутылка11мембрана уплотнителяДва.

6Цветовой агент B6мл × 1 / бутылка12герметичный пакетОдин.

Шаг действия

1.Разбавление стандартных продуктов: Этот набор реагентов предлагает оригинальный удвоенный стандартный продукт, который пользователь может разбавить в небольшой пробирке в соответствии со следующей диаграммой.

1600пг/млСтандарт № 5150 мкл стандартного продукта Добавление 150 мкл стандартного разбавления

800пг/млСтандарт № 4Стандарт 5 150 мкл, добавьте 150 мкл стандартного разбавления.

400 пг/млСтандарт № 3Стандарт 4 150 мкл, добавьте 150 мкл стандартного разбавления.

200 пг/млСтандарт № 2Стандарт № 3 150 мкл, добавьте 150 мкл стандартного разбавления.

100 пг/млСтандарт № 1Стандарт 2 150 мкл, добавьте 150 мкл стандартного разбавления.

2.Добавление образцов: соответственно, пустое отверстие (пустое контрольное отверстие без образца и реагента ферментативного маркера, остальные шаги одинаковы), стандартное отверстие, отверстие для проб, подлежащих измерению. В стандартной упаковке с ферментной шкалой на пластине образца с точностью 50 мкл, в отверстие для проб, подлежащих измерению, добавляется разбавленная жидкость образца 40 мкл, а затем образец, подлежащий измерению, 10 мкл (окончательный разбавление образца в 5 раз). Добавьте образец к нижней части отверстия ферментативной пластины, старайтесь не касаться стенки отверстия, мягко встряхните и перемешайте.

3.Температура: Закройте пластину с уплотнительной мембраной при температуре 37°C после 30 минут.

4.Распределение: после 30 - кратного разбавления концентрата очищающего раствора дистиллированной водой

5.Мытье: Осторожно снять уплотнительную пленку, сбросить жидкость, высушить, каждое отверстие заполнить стиральной жидкостью, статически оставить через 30 секунд, так повторить 5 раз, сделать сухим.

6.Добавление ферментов: на отверстие добавляется 50 мкл реагента ферментативного маркера, за исключением пустого отверстия.

7.Термоферия: операция те же 3.

8.Стирка: операция та же 5.

9.Цвет: сначала добавьте цветопроявитель A50 мкл на отверстие, затем добавьте цветопроявитель B50 мкл, мягкое сотрясение перемешивается, 37 ° C избегает яркого цвета в течение 10 минут.

10.Конец: на отверстие добавляется жидкость для прекращения 50 мкл, чтобы остановить реакцию (в это время синий вертикально поворачивает желтый).

11.Измерение: Нулевая настройка пустого отверстия, последовательное измерение поглощения (OD) каждого отверстия длиной волны 450 нм. Измерение должно быть произведено в течение 15 минут после добавления жидкости для остановки.

вычисление

Концентрация стандартного вещества является горизонтальной, значение OD - вертикальной, стандартная кривая нарисована на бумаге с координатами, и соответствующая концентрация определяется стандартной кривой на основе значения OD образца; Умножить на разжижение; Либо уравнение линейной регрессии стандартной кривой рассчитывается с использованием значения концентрации стандартного вещества и значения OD, которое заменяет значение OD образца в уравнение и вычисляет концентрацию образца, умноженную на кратное разбавление, т.е. фактическую концентрацию образца.

Меры предосторожности

1. Экстракция комплекта из холодильной среды должна производиться в течение 15 - 30 минут после равновесия комнатной температуры, и, если после вскрытия пластины пакет фермента не используется, пластина должна храниться в герметичном пакете.

2. Концентрированный моющий раствор может иметь кристаллическое выделение, которое может быть разогрето и растворимо в водяной ванне при разбавлении и не влияет на результат при промывке.

3. При каждом шаговом сложении проб должны использоваться аддиторы, точность которых регулярно проверяется во избежание ошибок испытаний. Время одной пробы лучше всего контролировать в течение 5 минут, и, если количество образцов велико, рекомендуется использовать винтовку плюс образец.

4. Пожалуйста, сделайте стандартную кривую одновременно с каждым измерением, предпочтительно сделать повторное отверстие. Если содержание вещества, подлежащего измерению, в образце слишком велико (значение OD в образце превышает значение OD в первом отверстии стандартного отверстия), сначала разбавляйте определенное кратное (в n раз) разбавленным раствором образца, а затем измеряйте его, и, наконец, умножайте общее кратное разбавления (×n×5) при расчете.

5. Пленка уплотнительной пластины предназначена только для одноразового использования во избежание перекрестного загрязнения.

6.Поддоны, пожалуйста, избегайте света для сохранения.

Строго следуя инструкциям, результаты испытаний должны быть основаны на показаниях энзимометра.

8. Все образцы, моющие средства и различные отходы должны обрабатываться по инфекционным веществам.

9.Коэффициент роста эндотелиальных клеток кровеносных сосудов крупного рогатого скота (VEGF) ELISAКомпоненты разных партий не должны смешиваться.