Бренды эпителиальных клеток легких типа II

Эпителиальные клетки

Основные свойства клеток.

Культурная среда: содержит FBS, добавки для роста, Penicillin, Streptomycin и т.д.

Частота смены жидкости: каждые 2 - 3 дня

Характеристики передачи: может передаваться 2 - 3 поколения

Пищеварительная жидкость: 0,25% поджелудочной Dan белой ферменты

Условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; CO2，5%

Описание клетки: эпителиальные клетки поп - трубки отделяются от трахеи; трахея (Trachea), часть органов дыхания; Небольшо плоский цилиндр для задней стенки. Верхний торцовый нижний край шестого шейного позвонка, соединенный с кольцевым хрящем; Вниз к границе четвертого и пятигрудного позвонков (эквивалентной угловой плоскости грудины), разделенных на левый и правый главный бронх, разветвление называется трахеи. Трубка состоит в основном из 14 - 16 полукольцевых хрящей, эластичных, хрящевых "с" зигзагообразных хрящевых колец, зазоры назад, хрящевые кольца соединены связками, задние бреши кольца соединены гладкими мышцами и плотной соединительной тканью, поддерживая непрерывное открытое состояние. Трубная полость покрыта слизистой оболочкой, поверхность покрыта ресничной эпителией, слизь, выделяемая слизистой оболочкой, может прилипать к частицам пыли, вдыхаемым в воздух, реснички постоянно качаются в глотку, чтобы вывести слизь и пыль, чтобы очистить вдыхаемый газ. Эпителий трахеи является первой линией обороны для контакта дыхательных путей с внешней средой, а не только целевыми клетками, действующими на различные патогены и воспалительные среды, но и влияет на синтез клеток, высвобождая различные воспалительные среды и цитокины, которые участвуют в воспалении дыхательных путей и иммунном ответе. Прототипные эпителиальные клетки трахеи, выращенные вне организма, чрезвычайно важны в фундаментальных и клинических исследованиях из - за их большого сходства с морфологической структурой и функциональной деятельностью тканей организма.

Идея разделения протоклеточных культур:

Отбор материалов - разделение - культивирование - идентификация

Сначала ткань извлекается из организма, после обработки панкреатином / коллагеназой рассеивается в одну клетку, а затем культивируется в подходящей питательной среде, чтобы клетки размножались до определенного коэффициента для клеточной идентификации.

Экспериментальные шаги:

Во - первых, взять 7 - 10d самцов SD крыс, вывих шейного отдела позвоночника казнен, пропитан 75% этанола дезинфекция 3 - 5 мин.

Во - вторых, на сверхчистом рабочем столе крыса с отрезанной головой помещается в стеклянную чашку Петри, после открытия черепной полости извлекает весь мозг и помещает его в предварительно охлажденную стеклянную чашку Петри PBS для удаления мозжечка и мезомозга.

В - третьих, полушарие мозга медленно прокручивается по сухой фильтрующей бумаге, чтобы удалить мягкую оболочку головного мозга и большие кровеносные сосуды мембраны головного мозга, а затем помещается в новую стеклянную чашку Петри PBS с предварительным охлаждением.

В - четвертых, удалите белое вещество мозга, остатки крупных кровеносных сосудов и мягких мозговых оболочек с помощью тонкого анатомического пинцета, чтобы сохранить кору головного мозга.

В - пятых, кору головного мозга помещают в DMEM, разрезают на размер около 1 мм3, помещают в 50 мл центробежной трубки, добавляют гибридную ферментную жидкость I (0,05 - 0% коллагеназы типа II, 0.025 - 0.05% коллагеназы типа IV, 200 - 400 U DNaseI), после смешивания 37 ° C водная ванна переваривает 1 - 1,5 h.

vi. Комнатная температура 1000 × g центрифуга 8 мин, для очистки жидкости.

vii. В осаждении добавляется 20% BSA тяжелая суспензия, полностью смешанная, 1000×g, 20min, 4°C центрифуга, чтобы очиститься выше.

VIII. Осадок Добавляется 4 мл смешанной ферментативной жидкости II (0,05 - 0,1% коллагеназы / дисперсии, 0,05 - 0,1% коллагеназы типа I, 100 - 300 U DNaseI) с тяжелой суспензией, перемешивается, переваривается в водяной ванне при 37°C 0,5 - 1h, 700 × g центрифуга при комнатной температуре 6 мин, чтобы удалить очищающую жидкость.

IX. Осадок добавляется в суспензию 2 мл питательной жидкости DMEM и равномерно смешивается с 12 мл 50% Percoll (25 000 × g, 60 мин, 4 ° C), которая центрифужно образует непрерывный градиент, 1000 × g, 4 ° C центрифуга 10 мин.

10. Бело - желтый слой над слоем эритроцитов вблизи дна представляет собой очищенный сегмент микрокровеносных сосудов, который после высасывания DMEM дрейфует дважды (центрифуга 1000 × rpm, 6 мин, комнатная температура), чтобы удалить очищающую жидкость.

Добавьте DMEM - питательную жидкость (20% FBS, 4ug / ml) для повторной суспензии, введите 5% сыворотки крысы в чашку Петри клетки, приготовленную для инкубации при температуре 37°C, поместите ее в резервуар для статической культуры 37°C, 5% CO2 в течение 24 часов после замены несвободной смешанной среды, а затем замените жидкость на следующий день.

Внимание:

Культивирование на основе 4°С может сохраняться в течение 3 - 6 месяцев.

2.В процессе клеточной культуры, обратите внимание на поддержание стерильных операций.

3. В процессе трансгенной культуры время переваривания Yi - фермента не должно быть слишком длинным, иначе это повлияет на клеточную стенку и ее состояние роста.

Рекомендуется, чтобы клиенты делали несколько фотографий клеток в каждом кратном числе в течение первых трех дней после получения клетки, записывали состояние клетки и облегчали общение с техническим отделом. Из - за транспортировки отдельные чувствительные клетки будут иметь нестабильную ситуацию, пожалуйста, свяжитесь с нами вовремя, чтобы подробно сообщить о конкретной ситуации с клеткой, чтобы наш технический персонал мог отслеживать и возвращать до тех пор, пока проблема не будет решена.

Продукция, которую компания продает: