- Электронная почта
- Телефон
-
Адрес
Новый район Пудун в Шанхае
Категории продукта
Шанхайская биотехнологическая компания
Особенности набора белковых экстрактов
ДоговариваемыйОбновление на05/06
- Модель
- Природа производителя
- Производители
- Категория продукта
- Место происхождения
Обзор
Рецепты для экстракции общего белка содержат формулы, которые эффективно растворяют клеточные мембранные компоненты, включая плазменные, нуклеиновые и различные клеточные мембраны. Этот набор содержит смесь ингибиторов протеазы, которая предотвращает разложение протеазы на белки и обеспечивает гарантию извлечения белков высокой чистоты.
Подробности о продукте
Сохранить температуру2-8℃
Реактор для экстракции общего белкаМеры предосторожности
1. Ингибиторы протеазы также могут храниться при температуре 2−8 °С до их использования без открытых крышек. Хранение при 20°С после использования открытых крышек.
2. Ингибиторы протеазы находятся в твердом состоянии при низких температурах 2 - 8°C и после удаления из холодильника возвращаются к комнатной температуре или кратковременной водяной ванне 37°C, превращаются в жидкое состояние и центрифугируются до основания трубки, а затем открывают крышку.
3. После распаковки реагента используйте его как можно скорее!
2. Ингибиторы протеазы находятся в твердом состоянии при низких температурах 2 - 8°C и после удаления из холодильника возвращаются к комнатной температуре или кратковременной водяной ванне 37°C, превращаются в жидкое состояние и центрифугируются до основания трубки, а затем открывают крышку.
3. После распаковки реагента используйте его как можно скорее!
срок действия
год
метод обнаружения
WB, IP, ко-IP, ELISA, EMSA 等
Применяемая выборка
Животные клетки / ткани
Реактор для экстракции общего белкаХарактеристики продукта
1. Удобное использование, извлечение белков из клеток, тканей не требует предварительной обработки после измельчения, повторного замораживания и таяния, ультразвукового дробления и т.д.
Процесс извлечения прост и удобен, сокращая время извлечения белка до 30 минут - 1 часа.
3.Содержит белковые стабилизаторы, экстрагированные белки стабильны.
4. При ультрафиолетовом обнаружении концентрации белка фоновые помехи низкие.
5. Общий протеиновый экстракт содержит множество эффективных ингредиентов, которые могут полностью высвобождать цитоплазматические белки, ядерные белки и мембранные белки, но также могут сочетаться с высвобожденными белками для предотвращения осаждения.
6. Ингибиторы протеазы подавляют разложение белков, и формула ингибиторов протеазы оптимизирована. Смесь ингибиторов протеазы состоит из шести отдельных ингибиторов протеазы AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin, E - 64, каждый из которых специфически ингибирует активность одного или нескольких протеазы. Оптимизированный состав смеси позволяет подавлять практически все важные активности протеазы, включая протеазу, полупротеазу, аспарагин - протеазу, пропиламинопептидазу и т.д.
Процесс извлечения прост и удобен, сокращая время извлечения белка до 30 минут - 1 часа.
3.Содержит белковые стабилизаторы, экстрагированные белки стабильны.
4. При ультрафиолетовом обнаружении концентрации белка фоновые помехи низкие.
5. Общий протеиновый экстракт содержит множество эффективных ингредиентов, которые могут полностью высвобождать цитоплазматические белки, ядерные белки и мембранные белки, но также могут сочетаться с высвобожденными белками для предотвращения осаждения.
6. Ингибиторы протеазы подавляют разложение белков, и формула ингибиторов протеазы оптимизирована. Смесь ингибиторов протеазы состоит из шести отдельных ингибиторов протеазы AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin, E - 64, каждый из которых специфически ингибирует активность одного или нескольких протеазы. Оптимизированный состав смеси позволяет подавлять практически все важные активности протеазы, включая протеазу, полупротеазу, аспарагин - протеазу, пропиламинопептидазу и т.д.
Применение продукции
WB, IP, ко-IP, ELISA, EMSA 等
Инструменты готовы.
1. Центрифуги
2. Генераторы
3. Амортизатор / симулятор
4. Вихревые смесители
5. Мигратор
6.Холодильники
7. Ледяная коробка
2. Генераторы
3. Амортизатор / симулятор
4. Вихревые смесители
5. Мигратор
6.Холодильники
7. Ледяная коробка
Приготовьтесь.
Буфер PBS
2. Ассортимент белковых реагентов
2. Ассортимент белковых реагентов
Расходные материалы готовы
1. Центробежные трубы
2. Сосущая головка
3.Одноразовые перчатки
2. Сосущая головка
3.Одноразовые перчатки
Внимание при использовании
Реактор, содержащийся в центробежной трубке вращающейся крышки, должен быть ненадолго центрифужен перед открытием крышки, и жидкость на внутренней стенке крышки должна быть сброшена на дно трубы, чтобы избежать распыления жидкости при открытии крышки.
Ингибиторы протеазы находятся в твердом состоянии при 2–8 °C, после извлечения из холодильника восстанавливаются до комнатной температуры или кратковременной водяной ванны 37°C, превращаются в жидкое состояние и центрифугируются до основания трубки, а затем открывают крышку.
Все реактивы в ходе эксперимента должны быть предварительно охлаждены; Все приборы должны быть предварительно охлаждены в холодильнике при температуре 20°C. Весь процесс должен поддерживать образцы при низких температурах.
Если во время хранения ингибитора протеазы раствор осаждается, это не влияет на его использование, после растворения он используется нормально.
Если набор не может быть исчерпан в течение короткого периода времени, смесь ингибиторов протеазы не может быть полностью добавлена в экстракт за один раз.
Другие ингибиторы протеазы могут быть добавлены в соответствии с собственными экспериментальными потребностями.
В случае проведения испытаний на энзимную активность определенных протеаза или фосфатазы, экстракт может быть без ингибиторов протеазы или фосфатазы, обратите внимание на то, что процесс экстракции поддерживается при низких температурах и сокращает время центрифугирования.
В эксперименте Western Blot можно использовать бета - actin, GAPDH, Tubulin.
Скорость вращения центрифуги имеет два способа представления относительной центробежной силы (RCF, xg) и скорости вращения в минуту (RPM, r / min), некоторые центрифуги настроены с RPM и переключением дисплея xg, но некоторые центрифуги не имеют функции автоматического переключения. Для пересчета требуется следующая формула: g = r×1.118×10 - 5 × rpm2 (r - эффективный радиус центрифуги, т.е. длина от оси центрифуги до центрального положения на дне центробежной коллекторной трубы в сантиметрах), например: скорость вращения 3000 rpm, эффективный радиус центрифуги 10 см, тогда как относительная центробежная сила (RCF, xg) = 10×1.118×10 - 5 × 30002 = 1006.2 (xg).
Ингибиторы протеазы находятся в твердом состоянии при 2–8 °C, после извлечения из холодильника восстанавливаются до комнатной температуры или кратковременной водяной ванны 37°C, превращаются в жидкое состояние и центрифугируются до основания трубки, а затем открывают крышку.
Все реактивы в ходе эксперимента должны быть предварительно охлаждены; Все приборы должны быть предварительно охлаждены в холодильнике при температуре 20°C. Весь процесс должен поддерживать образцы при низких температурах.
Если во время хранения ингибитора протеазы раствор осаждается, это не влияет на его использование, после растворения он используется нормально.
Если набор не может быть исчерпан в течение короткого периода времени, смесь ингибиторов протеазы не может быть полностью добавлена в экстракт за один раз.
Другие ингибиторы протеазы могут быть добавлены в соответствии с собственными экспериментальными потребностями.
В случае проведения испытаний на энзимную активность определенных протеаза или фосфатазы, экстракт может быть без ингибиторов протеазы или фосфатазы, обратите внимание на то, что процесс экстракции поддерживается при низких температурах и сокращает время центрифугирования.
В эксперименте Western Blot можно использовать бета - actin, GAPDH, Tubulin.
Скорость вращения центрифуги имеет два способа представления относительной центробежной силы (RCF, xg) и скорости вращения в минуту (RPM, r / min), некоторые центрифуги настроены с RPM и переключением дисплея xg, но некоторые центрифуги не имеют функции автоматического переключения. Для пересчета требуется следующая формула: g = r×1.118×10 - 5 × rpm2 (r - эффективный радиус центрифуги, т.е. длина от оси центрифуги до центрального положения на дне центробежной коллекторной трубы в сантиметрах), например: скорость вращения 3000 rpm, эффективный радиус центрифуги 10 см, тогда как относительная центробежная сила (RCF, xg) = 10×1.118×10 - 5 × 30002 = 1006.2 (xg).
способ применения
Извлечение общего белка из образцов клеток:
Извлечение белков из суспензии:
1. Подготовка экстракта:
На каждые 500 мкл охлажденного общего белкового экстракта добавляется 2 мкл смеси ингибиторов протеазы и 2 мкл смеси ингибиторов фосфатазы, которые затем смешиваются и резервируются на льду.
Взять 5 × 106 клеток, центрифугировать в течение 5 минут при 4°C, 2500 × g, тщательно всасывать питательную среду, высасывать как можно больше, собирать клетки.
Мойте клетки холодным PBS дважды, высасывая как можно больше после каждой промывки.
На каждые 5 × 106 - 1 × 107 клеток (около 50 мг клеток / 50 мкл объема осаждения клеток) добавляется 500 мкл холодного общего белкового экстракта, который после перемешивания колеблется в течение 20 - 30 минут при 4°C до полного расщепления клеток без видимого осаждения клеток.
5. Центрифугирование в течение 15 минут при 4°C, 12000×g.
6. Общий белок может быть получен путем вдыхания верхней очистки в другую предварительно охлажденную чистую центробежную трубку.
7. Упомянутые выше белковые экстракты после количественной оценки помещаются в холодильник с температурой 80°C для хранения в резерве или непосредственно для экспериментов в нижнем течении.
Экстракция клеточного белка стенки:
1. Подготовка экстракта:
На каждые 500 мкл охлажденного общего белкового экстракта добавляется 2 мкл смеси ингибиторов протеазы и 2 мкл смеси ингибиторов фосфатазы, которые затем смешиваются и резервируются на льду.
2. Осторожно всасывайте питательную жидкость из клеток, прикрепленных к стенке.
Мойте клетки холодным PBS два раза, высасывая PBS, насколько это возможно, после каждой промывки.
4. Добавьте умеренное количество холодного экстракта общего белка, колеблясь 15 - 30 минут до полного расщепления клетки, побрите клеточным скребком и всасывайте крекинг в другую чистую центробежную трубку.
5. Центрифугирование в течение 15 минут при 4°C, 12000×g.
6. Высасывать верхнюю очистку в другую предварительно охлажденную чистую центрифужную трубку, то есть получать общий белок.
7. Упомянутые выше белковые экстракты после количественной оценки помещаются в холодильник с температурой 80°C для хранения в резерве или непосредственно для экспериментов в нижнем течении.
Извлечение общего белка из образцов тканей:
1. Подготовка экстракта:
На каждые 500 мкл охлажденного общего белкового экстракта добавляется 2 мкл смеси ингибиторов протеазы и 2 мкл смеси ингибиторов фосфатазы, которые затем смешиваются и резервируются на льду.
Взять образец ткани 50 - 100 мг, промыть его PBS, затем порезать ножом как можно больше, добавить 500 мкл общего белкового экстракта, с помощью тканевого симулятора / симулятора для выравнивания до неочевидного твердого тела невооруженным глазом.
3. Засасывать тканевый симметричный раствор в предварительно охлажденную чистую центрифужную трубку и колебаться в течение 10 - 20 минут при температуре 4°С.
4. Центрифугирование в течение 15 минут при 4°C, 10000 - 14000 × g.
5. Высасывать верхнюю очистку в другую предварительно охлажденную чистую центрифужную трубку, то есть получать общий белок.
6. Упомянутый выше протеиновый экстракт после количественной оценки помещается в холодильник с температурой 80°C для хранения в резерве или непосредственно для последующего эксперимента.
Извлечение белков из суспензии:
1. Подготовка экстракта:
На каждые 500 мкл охлажденного общего белкового экстракта добавляется 2 мкл смеси ингибиторов протеазы и 2 мкл смеси ингибиторов фосфатазы, которые затем смешиваются и резервируются на льду.
Взять 5 × 106 клеток, центрифугировать в течение 5 минут при 4°C, 2500 × g, тщательно всасывать питательную среду, высасывать как можно больше, собирать клетки.
Мойте клетки холодным PBS дважды, высасывая как можно больше после каждой промывки.
На каждые 5 × 106 - 1 × 107 клеток (около 50 мг клеток / 50 мкл объема осаждения клеток) добавляется 500 мкл холодного общего белкового экстракта, который после перемешивания колеблется в течение 20 - 30 минут при 4°C до полного расщепления клеток без видимого осаждения клеток.
5. Центрифугирование в течение 15 минут при 4°C, 12000×g.
6. Общий белок может быть получен путем вдыхания верхней очистки в другую предварительно охлажденную чистую центробежную трубку.
7. Упомянутые выше белковые экстракты после количественной оценки помещаются в холодильник с температурой 80°C для хранения в резерве или непосредственно для экспериментов в нижнем течении.
Экстракция клеточного белка стенки:
1. Подготовка экстракта:
На каждые 500 мкл охлажденного общего белкового экстракта добавляется 2 мкл смеси ингибиторов протеазы и 2 мкл смеси ингибиторов фосфатазы, которые затем смешиваются и резервируются на льду.
2. Осторожно всасывайте питательную жидкость из клеток, прикрепленных к стенке.
Мойте клетки холодным PBS два раза, высасывая PBS, насколько это возможно, после каждой промывки.
4. Добавьте умеренное количество холодного экстракта общего белка, колеблясь 15 - 30 минут до полного расщепления клетки, побрите клеточным скребком и всасывайте крекинг в другую чистую центробежную трубку.
5. Центрифугирование в течение 15 минут при 4°C, 12000×g.
6. Высасывать верхнюю очистку в другую предварительно охлажденную чистую центрифужную трубку, то есть получать общий белок.
7. Упомянутые выше белковые экстракты после количественной оценки помещаются в холодильник с температурой 80°C для хранения в резерве или непосредственно для экспериментов в нижнем течении.
Извлечение общего белка из образцов тканей:
1. Подготовка экстракта:
На каждые 500 мкл охлажденного общего белкового экстракта добавляется 2 мкл смеси ингибиторов протеазы и 2 мкл смеси ингибиторов фосфатазы, которые затем смешиваются и резервируются на льду.
Взять образец ткани 50 - 100 мг, промыть его PBS, затем порезать ножом как можно больше, добавить 500 мкл общего белкового экстракта, с помощью тканевого симулятора / симулятора для выравнивания до неочевидного твердого тела невооруженным глазом.
3. Засасывать тканевый симметричный раствор в предварительно охлажденную чистую центрифужную трубку и колебаться в течение 10 - 20 минут при температуре 4°С.
4. Центрифугирование в течение 15 минут при 4°C, 10000 - 14000 × g.
5. Высасывать верхнюю очистку в другую предварительно охлажденную чистую центрифужную трубку, то есть получать общий белок.
6. Упомянутый выше протеиновый экстракт после количественной оценки помещается в холодильник с температурой 80°C для хранения в резерве или непосредственно для последующего эксперимента.
Анализ часто задаваемых вопросов
1.Низкая концентрация белка?
Некоторые образцы тканей могут обрабатываться без крекинга, что приводит к низкой концентрации белка. Достаточно продлить время обработки реагента А. При обработке в условиях непрерывных колебаний без генератора также можно перемешать с интервалом в несколько минут всасывающей головкой.
2.Клеточный крекинг медленный?
Чтобы полностью гарантировать активность извлеченного белка, экстракт использует формулу защитного белка с умеренной способностью к крекингу и широким спектром применений вниз по течению. Надлежащим образом продлевается время крекинга.
3. Какими методами измерять белки?
Рекомендуется метод BCA. Метод Брэдфорда не подходит, поскольку реагент А содержит компоненты, которые мешают методу Брэдфорда, что приводит к количественной неопределенности. Если система буферизации была подвергнута диализу или заменена на опреснительную колонну, то ее можно измерить методом Брэдфорда.
4. Наличие коллоидного осаждения при извлечении?
В продуктах обработки белковых экстрактов иногда появляется небольшое количество прозрачных коллоидов, что является нормальным явлением. Этот прозрачный коллоид представляет собой комплекс, содержащий геномную ДНК и т.д. Без обнаружения специфических белков, которые особенно тесно связаны с геномной ДНК, их можно непосредственно центрифугировать для последующих экспериментов; Если необходимо обнаружить и геном связывает белки, которые особенно плотно, их можно обработать ультразвуком с интервалом 300W / 10 секунд в 10 секунд и ультразвуком в 3 минуты, а затем центробежным экстрактом для последующего эксперимента. При обнаружении некоторых распространенных факторов транскрипции, таких как NF - kappaB, p53 и т. Д., УЗИ не требуется.
5) Является ли извлеченный белок активным?
Этот набор не содержит ионных компонентов для удаления накипи, не разрушает структуру белка, не разрушает первоначальное взаимодействие между белками, белки сохраняют свою естественную конфигурацию и активность.
Некоторые образцы тканей могут обрабатываться без крекинга, что приводит к низкой концентрации белка. Достаточно продлить время обработки реагента А. При обработке в условиях непрерывных колебаний без генератора также можно перемешать с интервалом в несколько минут всасывающей головкой.
2.Клеточный крекинг медленный?
Чтобы полностью гарантировать активность извлеченного белка, экстракт использует формулу защитного белка с умеренной способностью к крекингу и широким спектром применений вниз по течению. Надлежащим образом продлевается время крекинга.
3. Какими методами измерять белки?
Рекомендуется метод BCA. Метод Брэдфорда не подходит, поскольку реагент А содержит компоненты, которые мешают методу Брэдфорда, что приводит к количественной неопределенности. Если система буферизации была подвергнута диализу или заменена на опреснительную колонну, то ее можно измерить методом Брэдфорда.
4. Наличие коллоидного осаждения при извлечении?
В продуктах обработки белковых экстрактов иногда появляется небольшое количество прозрачных коллоидов, что является нормальным явлением. Этот прозрачный коллоид представляет собой комплекс, содержащий геномную ДНК и т.д. Без обнаружения специфических белков, которые особенно тесно связаны с геномной ДНК, их можно непосредственно центрифугировать для последующих экспериментов; Если необходимо обнаружить и геном связывает белки, которые особенно плотно, их можно обработать ультразвуком с интервалом 300W / 10 секунд в 10 секунд и ультразвуком в 3 минуты, а затем центробежным экстрактом для последующего эксперимента. При обнаружении некоторых распространенных факторов транскрипции, таких как NF - kappaB, p53 и т. Д., УЗИ не требуется.
5) Является ли извлеченный белок активным?
Этот набор не содержит ионных компонентов для удаления накипи, не разрушает структуру белка, не разрушает первоначальное взаимодействие между белками, белки сохраняют свою естественную конфигурацию и активность.
Похожий продукт рекомендовать
