ELISPOT Flex: Human IFN‑гамма (ALP) - Анализ интерферона человека

ELISPOT Flex: Human IFN‑гамма (ALP) - Анализ интерферона человека

Экспериментальный принцип Mabtech Elispot

В эксперименте ELISPOT использовалась 96 - дырочная пластина на основе мембраны PVDF (cat: MSIPS 4510, Millipore), которая была упакована специальными моноклональными антителами (требующими нетоксичных, не содержащих эндотоксинов, антител с высоким сродством) для захвата цитокинов, выделяемых клетками.

Затем в отверстие питательной пластины добавляются клетки и антигенные стимуляторы, которые должны быть протестированы для культивирования. При стимуляции стимуляторами Т - клетки выделяют соответствующие цитокины в соответствующий период времени. В этот момент цитокины захватываются антителами, упакованными в мембрану.

После стирки клетки захваченные цитокины могут связываться со вторым антителом, помеченным биотином, а затем связываться с биотином с ферментативным аффином для химического ферментативного аффинирования, что позволяет формировать круглые пятна на части мембраны (и, конечно же, второе антитело, помеченное флуоресцентом, тем самым исключая последующий метод химического окрашивания и одновременно обнаруживая несколько цитокинов), каждое из которых соответствует клетке, которая первоначально выделяла цитокины.

Количество пятен на мембране, деленное на общее количество клеток, первоначально добавленных в отверстие, позволяет рассчитать процент положительных клеток.

МАБТЕХЭта технология имеет три основных преимущества:

i) Высокая чувствительность. Один клеточный секреционный цитокин из миллиона клеток может быть обнаружен, что на 2 - 3 порядка больше, чем традиционный метод ELISA.

ii: Моноклеточный уровень, функциональное тестирование живых клеток. ELISPOT непосредственно стимулирует живые клетки антигенами и проверяет их функции.

III: Простая и экономичная работа, может быть проведен скрининг высокого потока. ELISPOT не имеет сложных процессов экстракорпоральной амплификации клеток, не использует изотопы, и в соответствии со стандартизированными экспериментальными операциями один экспериментатор может обрабатывать сотни образцов одновременно, намного более эффективно, чем другие методы обнаружения.

ELISPOT Flex: Human IFN‑гамма (ALP) - Анализ интерферона человека

MABTECH: 3420 - 2A Включает:

Захват mAb 1-D1K1 мг/мл600 мкл

Выявление mAb 7-B6-1, биотин1 мг/мл50 мкл

Стрептавидин-АЛП50 мкл

А