Комплект питательных сред Plus

Комплект органоидов человеческих дыхательных путей Plus

Комплект питательных средПлюс

1. описание продукта

Комплекты для культивирования биоэндопротетических органов (Комплект органоидов человеческих дыхательных путей PlusЭто химически определенная клеточная среда, используемая для создания и поддержания органов типа поп - трубки, полученных из стволовых клеток поп - трубки. Самообновление эпителия дыхательных путей обусловлено размножением базовых стволовых клеток. Популярные трубчатые органы содержат базисные клетки, ресничковые клетки, секреционные клетки и небольшое количество нейроэндокринных клеток, поэтому органы демонстрируют все характеристики эпителия дыхательных путей с точки зрения архитектуры, состава типов клеток и динамики самовосстановления и, следовательно, имеют большой потенциал для развития дыхательных путей и исследований заболеваний.

2. Информация о продукте

3. Другие материалы и реактивы

4. Инструкции по использованию питательных сред

1. После получения органоидной среды питательная среда помещается4℃Холодильники размораживаются;

2. После размораживания питательной среды полностью перемешивается вверх и вниз, в шкафу биобезопасности или на чистом рабочем столе в соответствии с ежедневными потребностями, рекомендуется упаковать10 мл/Трубы;

3. После разделки питательная среда должна быть запечатана и храниться в-20℃При использовании можно извлечь разрозненную питательную среду и поместить ее в равновесие комнатной температуры.

5. Создание и передача органов

Примечание: Исследования, связанные с исходными материалами человеческих тканей, должны соответствовать всем соответствующим институциональным и правительственным правилам. Прежде чем собирать основные материалы человеческой ткани, необходимо получить информированное согласие всех испытуемых.

а) Создание протопоп - органов

1. Протогенные образцы тканей должны находиться вне тела5 минутВнутри помещается жидкость, содержащая предварительно охлажденную живую ткань (2-8℃В трубке образца образец должен быть покрыт жидкостью для сохранения живой ткани (если образец уже помещен в другой буфер или питательную среду, замените весь раствор предварительно охлажденной жидкостью для сохранения живой ткани). Низкая температура (2~8℃(Перевозка передана в лабораторию.

2. Перед экспериментом вставьте клей.4℃Лед размораживается, а питательная среда удаляется, чтобы установить баланс комнатной температуры. Центробежные трубки, пробирки или пластиковые всасывающие головки, контактирующие с клетками, должны быть очищены от адгезионного увлажняющего раствора, культивируемого органоидами.

3. В чистом рабочем столе образец переносится в чашку Петри для оценки того, состоит ли полученная ткань из эпителия. Если есть жир или мышечная ткань, используйте нож или пинцет под анатомическим микроскопом, чтобы удалить как можно больше этих неэпителиальных компонентов. Если нет жира или мышечной ткани, немедленно перейдите к следующему шагу.

4. На основе эпителиальных органов или с двойным сопротивлениемДПБСПромыть ткань дважды.

5. Используйте пинцет для переноса тканей1,5 млВ центробежных трубах стерильное дробление на льду0.5~2mm²Размер.

6. Использовать разрезанные ткани50Удвоение объема ткани при взвешивании и переносе на15 млВнутри центробежной трубки дуйте тяжелые подвесные тканевые блоки. в37℃А,100 об/минВ условиях термостата, горизонтальные колебания перевариваются15 - 30Минуты, каждые10Минуты наблюдения за пищеварением тканей, до тех пор, пока тканевые блоки значительно рассеяны, суспензия более мутная, взять соответствующее количество ткани для пищеварительной суспензии, пока в суспензии больше живых клеток может прекратить пищеварение, если фрагменты ткани больше или переваривание не может надлежащим образом продлить время пищеварения. Во время пищеварения могут использоваться различные спецификации (порядок от большого до малого, например10 млА5 млА1 мл) Миграционная трубка дует ткани, чтобы переварить суспензию, чтобы помочь полностью переварить. Когда большинство фрагментов ткани проходят1 млПроцесс пищеварения завершается, когда пипетка всасывает головку.

7. поставитьФБСДобавьте в тканевую пищеварительную смесь, конечная концентрация составляет2%И использовать100 мкмКлеточный фильтр фильтрует.

8. Сбор фильтров и4℃Ниже250gЦентрифугирование3Минут. При видимом красном осаждении высасывайте очищающую жидкость и добавляйте2 млКрекинг эритроцитов, суспензия, крекинг эритроцитов при комнатной температуре1Минуты, и в4℃Ниже250gЦентрифугирование3Минут.

9. Выбросьте очищающую жидкость и взвесите осадок в основной питательной среде эпителиальных органов,4℃Ниже250gЦентрифугирование3Повторите этот шаг снова в течение минуты, чтобы удалить пищеварительный раствор иФБСПеред центрифугой желательно проверить активность клеток в умеренном количестве суспензии.

10. Высасывайте очищающую жидкость, в соответствии с потребностями культуры, чтобы получить соответствующее количество клеточного осаждения, чтобы добавить основной клей (> 70%И смешивать на льду (примечание: движение смешивания и дутья должно быть мягким, не создавая большого количества пузырьков, смешивание при комнатной температуре должно контролироваться15В секундах) после смешивания помещается на лед. Примечание: Основной клей должен храниться на льду, чтобы предотвратить его затвердевание. Этот процесс должен быть осуществлен как можно скорее. примерноДесять тысяч.Клетки должны быть вакцинированы.25 мклБазовый клей внутри. Не разбавляйте клей матрицы слишком сильно (пропорционально> 70%(Объем основного клея/Общий объем), так как это может подавлять правильное образование твердых капель.

11. Смешанные точки суспензии матричного клея и клеток вводятся в нижнюю часть пластины питательного отверстия, слегка выравнивая суспензию с помощью головки пистолета, чтобы избежать контакта суспензии с боковой стенкой пластины отверстия. (Рекомендуется:96Вакцинация диафрагмой3~10мкл/Пещера,48Вакцинация диафрагмой10~20 мкл/Пещера,24Вакцинация диафрагмой20~30мкл/Гнездо).

Примечание: После того, как орган - класс повторно подвешен к основному клею, посадочная пластина должна быть выполнена как можно скорее, так как основной клей может застыть в пробирке или всасывающей головке переносчика.

12. Поместить доску37℃и5%КОДиВ инкубаторе15 - 25Минуты, дайте основной клей застыть.

13. После того, как основной клей затвердевает, медленно добавляйте к стенке сбалансированную при комнатной температуре среду для культивирования органов, чтобы избежать разрушения застывшей структуры. (Рекомендуется:96Добавление диафрагмы100 мкл/Пещера,48Добавление диафрагмы250 мкл/Пещера,24Добавление диафрагмы500 мкл/Гнездо). Примечание: Не добавляйте питательную среду непосредственно к верхней части капли клея матрицы, так как это может повредить застывшую структуру.

14. Поместить доску37℃и5%КОДиВ термостатическом инкубаторе.

15. Каждый раз2 - 3Поменяйте питательную среду один раз в день, тщательно высасывайте питательную среду из отверстия и добавляйте свежую органоидную среду с балансом комнатной температуры.

16. Тщательно контролируйте состояние роста органоидов, в идеале, популярные органы должны быть7−14 гг.Построено за день.

b) Традиционная культура органов типа трахеи

1. Подозрительные органы культивируются до диаметра100~500мкмБольшие часы (или когда чернение больше не увеличивается) могут быть проведены органоидная передача (каждое поколение)1 - 2Неделя). Следующие операции с клеточным контактом требуют увлажнения и промывки:

2. Выбросьте старую питательную среду, добавьте среду, основанную на равнообъемном эпителиальном органе, аккуратно соскребайте (или дуйте) основной клей и органоидную смесь с помощью клеточного скребка или всасывающей головки пипетки и переместите ее в1,5 млЦентробежные трубки (максимальная концентрация на трубку)2 - 3Пористые органы, избегающие избыточного объема и низкой эффективности пищеварения)5 ~ 10Подпункт, отделяя органоиды от основного клея,300gЦентрифугирование3Минут.

3. Удалите жидкость и добавьте.5В два раза больше, чем объем основного клея и органоидной смеси, органоидной пищеварительной жидкости, которая перемешивается и помещается37℃переваривание в инкубаторе5 ~ 10Минут. Вынимай, дуй, смешивай, бери.10 мклСмешанная жидкость, чтобы проверить, переваривается ли она в небольшие кластеры клеток, недостаточное пищеварение может правильно продлить время пищеварения. Если требуется количество клеток, они должны быть переварены в отдельные клетки, которые могут продлить время переваривания до10 - 20Через несколько минут пищеварение прекращается, и на заднем плане ожидается синее окрашивание для подсчета клеток. Тщательное наблюдение за пищеварительным процессом позволяет свести к минимуму время инкубации в органоидных диссоциаторах.

4. После завершения пищеварения добавлять5Удвоить объем эпителиальных органов на основе питательных сред, перемешать, чтобы остановить пищеварительную реакцию, а затем250gЦентрифугирование3Минут.

5. Высасывайте очищающую жидкость и промывайте ее питательной средой на основе эпителиальных органов.2Для удаления остатков пищеварительной жидкости. Подчистка может объединить органоиды в одну и ту же центрифужную трубку.

6. После очистки клетки в центробежном осаждении передаются в культуру, добавляя клей матрицы в осаждение клеток (> 70%И смешивать на льду (обратите внимание, что движение смешивания и дутья должно быть мягким, не создавая большого количества пузырьков, смешивание при комнатной температуре должно контролироваться15В секундах) после смешивания помещается на лед. Примечание: Степень разбавления основного клея должна быть70%Это обеспечивает структурную стабильность клея матрицы в процессе культивирования.

7. Смешанные точки суспензии матричного клея и клеток вводятся в нижнюю часть пластины питательного отверстия, слегка выравнивая суспензию с помощью головки пистолета, чтобы избежать контакта суспензии с боковой стенкой пластины отверстия. (Рекомендуется:96Вакцинация диафрагмой3~10мкл/Пещера,48Вакцинация диафрагмой10~20 мкл/Пещера,24Вакцинация диафрагмой20~30мкл/Гнездо). Примечание: Чтобы предотвратить затвердевание матричного клея при комнатной температуре, этот шаг должен быть завершен как можно скорее.

8. Поместить доску37℃и5%КОДиВ инкубаторе15 - 25Минуты, дайте основной клей застыть.

9. После того, как основной клей затвердевает, медленно добавляйте к стенке сбалансированную при комнатной температуре среду для культивирования органов, чтобы избежать разрушения застывшей структуры. (Рекомендуется:96Добавление диафрагмы100 мкл/Пещера,48Добавление диафрагмы250 мкл/Пещера,24Добавление диафрагмы500 мкл/Гнездо). Примечание: Не добавляйте питательную среду непосредственно к верхней части капли клея матрицы, так как это может повредить застывшую структуру.

10. Поместить доску37℃и5%КОДиВ термостатическом инкубаторе.

11. Каждый раз2 - 3Поменяйте питательную среду один раз в день, тщательно высасывайте питательную среду из отверстия и добавляйте свежую органоидную среду с балансом комнатной температуры.

12. Тщательно контролируйте рост органоидов до тех пор, пока они не будут нуждаться в следующем эксперименте.

V2.1версия

Время обновления:2025 / 5 / 27