KMS - 21BM - клетки множественной миеломы человека

КМС-21БМ_Множественные клетки миеломы человека

Информация о продукте

Название клеткиА.KMS - 21BM - клетки множественной миеломы человека

Родные источники: человек

Пол и возраст: Женщины,67год

Источники организации: Плевральная жидкость

Характеристики роста: Рост в суспензии

Клеточная форма: Тип лимфоцита

Спецификации клеток: 1 X 10⁶Замораживающие трубки cells / T25 или 1 мл

Условия воспитания:RPMI 1640 + 10% плодовая говядья сывороткаА,37 ℃, 5% СО2

Условия замораживанияА. 90% ФБС + 10% ДМСО

Метод передачи: 1.Три поколения，2 - 3 дня 1 поколение

Клеточная культура

Транспорт сухого льдаА.После получения клетки необходимо немедленно перейти на хранение жидким азотом, или-80БCХолодильники замораживаются на короткое время или восстанавливаются.

ТермотранспортА.Получив клетку, немедленно вынимайте из упаковки флакон для культивирования клеток и следуйте следующим шагам.

Клеточная транскрипцияА.Плотность клеток до 80 - 90%, что позволяет осуществлять культуру передачи

Процедуры работы клеток в бутылке

Для клеток, культивируемых стенками, перед отправкой мы заполняем питательную среду всей бутылкой, чтобы уменьшить выпадение клеток, прикрепленных к стенке, во время транспортировки продукта.

1. После получения клеток, обратите внимание, чтобы посмотреть, есть ли загрязнение. Поместите питательную бутылку под перевернутый микроскоп, чтобы тщательно проверить, является ли она мутной или бактериальной. Поскольку во время транспортировки есть удары, и некоторые клетки также чувствительны к изменениям температуры, могут быть некоторые клетки, которые падают и плавают, эти клетки все еще живые клетки, не выбрасывайте, могут быть центробежным обогащением для последующего использования.

2. Для клеток, прикрепленных к стенке, в среде шкафа биобезопасности вакуумным насосом удаляется избыток питательной среды в питательной бутылке до остаточного 5 - 8 мл, после чего в соответствии с питательной средой выбирается правильное содержание CO2 37℃Культивирование в инкубаторе с постоянной температурой, отвинчивание крышки бутылки. Если клетки уже покрыты бутылками, передайте их немедленно.

3. Для взвешенных клеток, в среде шкафа биобезопасности, перенос клеток из питательной бутылки в центрифужную трубку, 150 г центрифуги в течение 5 минут, после удаления, выдувание клеток с помощью 5 мл питательной среды, перенос в новую бутылку с последующим помещением в соответствующую концентрацию CO2 37℃Культивирование в инкубаторах с постоянной температурой.

Процедуры замораживания клеток

Примечание: Чтобы обеспечить высокую живучесть клеток, размораживайте культуры сразу после получения продукта.

1. Замораживание в 37.℃В водяной бане трясутся взад и вперед, быстро оттаивают. Чтобы избежать загрязнения, убедитесь, что отверстие для замерзания находится над поверхностью воды. Оттепель требуется быстро, около 1 минуты.

2. Как только жидкость в трубке замораживания растает, немедленно удалите ее и используйте спиртовой спрей, чтобы вытереть поверхность трубки замораживания. Начиная с этого шага, последующая операция должна быть завершена в шкафу биобезопасности.

3. Жидкость из замороженной трубки переносится в центрифужную трубку, содержащую 5 мл законченной среды, 150 г центрифуги в течение 5 минут и удаляется вакуумным насосом.

4. Используйте питательную среду, чтобы повторно взвесить клетки и перейти в новую бутылку. Чтобы обеспечить выживаемость при восстановлении клеток, добавьте питательную среду к 37℃Использовать водяную ванну после подогрева.

5. Поместите клетки в 37, содержащие подходящий CO2.℃Культивирование в инкубаторах с постоянной температурой.

Стенная клеточная культура

1. Высасывайте и выбрасывайте питательную среду из бутылки, добавляйте PБСПомыть один раз.

2. Присоединение 10,25 мл (в/в) Трипсин-ЭДТАРаствор и помещается 37При температуре Цельсия инкубация происходит в инкубаторе до тех пор, пока клетка не отделится от стенки. Этот процесс требует около 3-5Минут.

3. Присоединение 2млПосле того, как питательная среда нейтрализует протеазу поджелудочной железы и мягко дует, чтобы сдуть клетку с поверхности бутылки и рассеять ее.

4. Сбор клеточной суспензии15 млВ центробежной трубке,150 г в 5 мин.Удалить верхнюю очистку вакуумным насосом. Возьмите достаточное количество питательной среды, чтобы перегрузить клетки и переместить их в новую культурную бутылку.

Передача суспензионных клеток может быть основана на следующих методах:

I. Метод прямой передачи

1. Когда взвешенные клетки вырастают до 80 - 90% (клеточная суспензия становится желтой), они могут передаваться;

2. использоватьсоломинкаВысасывание клеточной суспензии 1 / 2 ~ 1 / 3;

3. Добавьте достаточное количество свежей среды и продолжайте культивировать.

   II. Центробежная передача (в случае обнаружения фрагментов клеток)

4. Перенос клеточной суспензииЦентрифугаВнутри;

5. 150 г центрифуг 5 мин, сброс верхней жидкости;

6. Использование свежих питательных сред для тяжелых суспензий клеток;

7. Соломинка высасывает достаточное количество клеточной суспензии и загружает ее в новую.Культурная бутылкаЗатем добавьте соответствующее количество свежей питательной среды, продолжайте культивировать.

Операция замораживания клеток

1. 1000rpm центрифуг удаляется за 5 минут. Добавьте 1 мл сыворотки, тяжелые суспензии, добавьте сыворотку и DMSO в зависимости от количества клеток, слегка перемешайте，Конечная концентрация DMSO 10%, плотность клеток не менее 1 x 10⁶/mL， Каждая криогенная трубка замораживает 1 мл клеточной суспензии, обратите внимание на маркировку криогенной трубки*

2. Поместите трубку замораживания в программный охладитель, поместите ее в холодильник - 80°C и переведите на хранение жидким азотом не менее чем через 2 часа.

Некоторые из этих клеток являются следующими:

Дополнительно проконсультируйтесь с нами:Раковая мезотелиома (легочный проток) NCI - H226 Плевральные подмышки (метастазы) чешуйчатые клетки