Набор питательных сред для внутрипеченочного рака желчных протоков

Комплект органоидов внутригеночной холангиокарциномы человека

Комплект питательных сред для раковых органов печени человека

1. описание продукта

Комплект питательных сред для раковых органов печени человека (Комплект органоидов внутригеночной холангиокарциномы человекаЭто химически определенная клеточная среда, используемая для создания и поддержания раковых органов внутрипеченочного желчного протока человека. Опухообразные органы пациента обобщают геномные и патологические характеристики исходной опухоли и поэтому имеют большие перспективы в медицинских исследованиях и точной медицине.

2. Информация о продукте

3. Другие материалы и реактивы

4. Подготовка питательных сред для внутрипеченочного рака желчных протоков человека

Подготовка питательных сред для внутрипеченочных органов типа рака желчных протоков с использованием стерильных методов. Ниже приведены готовые10 млПримеры питательных сред, если требуемое количество отличается, могут быть соответствующим образом скорректированы.

1. Коэффициент размораживания внутрипеченочного желчного протока на льдуВ(50x)и внутрипеченочный холангиокарциномозC(250x)А.

Примечание: после размораживания рекомендуется вводить факторы культивирования органов типа рака внутрипеченочного желчного протокаВ(50x)Коэффициент культивирования внутрипеченочных органов при раке желчных протоковC(250x). После раздельной сборки сохранить и получить, чтобы избежать повторного замораживания и таяния.

2. поставить200 млКоэффициент культивирования органов при внутрипеченочном раке желчных протоковВ(50x)А,40μLКоэффициент культивирования органов при внутрипеченочном раке желчных протоковC(250x)Плюс9,76 млВ основной питательной среде для культивирования раковых органов внутрипеченочного желчного протока, полностью смешанной и подготовленной10 млКультурные среды для внутрипеченочных желчных раковых органов.

Примечание: после приготовления питательная среда для внутрипеченочного рака желчных протоков может быть2-8°CХранение, рекомендуется использовать в течение двух недель. Коэффициент культивирования органов при внутрипеченочном раке желчных протоковВ(50x)Содержит бактериальные и грибковые антибиотики.

5. Протогенная культура внутрипеченочных желчных раковых органов пациента

Примечание: Исследования, связанные с основными материалами тканей человека, должны соответствовать всем соответствующим институциональным и правительственным правилам. Прежде чем собирать основные материалы человеческой ткани, необходимо получить информированное согласие всех испытуемых.

а) Создание органов, подобных внутрипеченочному раку

1. Фрагменты первичной внутрипеченочной холангиоидной ткани собираются центробежными трубками в ледяном растворе для хранения первичной ткани. Сохранить образец ткани на4℃Пока разделение не началось.

2. Оценка того, состоит ли полученный фрагмент ткани из эпителия. Если есть жир или мышечная ткань, используйте нож или пинцет под анатомическим микроскопом, чтобы удалить как можно больше этих неэпителиальных компонентов. Если нет жира или мышечной ткани, немедленно перейдите к следующему шагу.

3. Использование эпителиальных питательных сред илиДПБСПромыть ткань дважды.

4. Используйте нож или разрежьте ткань.1-3 мм³Маленькие фрагменты помещаются в чашку Петри клетки.

5. в37℃Следующий10 млОпухоль ткани пищеварительный раствор15 млФрагменты пищеварительной ткани в центробежной трубке, время переваривания изменяется, от30Минуты.1.5Разница в часах. Тщательно контролируйте процесс пищеварения, вы можете правильно вдувать очищение, чтобы наблюдать степень пищеварения. Когда большинство фрагментов ткани проходят1 млПроцесс пищеварения завершается, когда пипетка всасывает головку.

6. поставитьФБСДобавьте в тканевую пищеварительную смесь, конечная концентрация составляет2%И использовать100 мкмКлеточный фильтр фильтрует.

7. Сбор и размещение4°СНиже250gЦентрифужная фильтрация клеток3Минут. При видимом красном осаждении вдыхайте очищающую жидкость и используйте2 млКрекинг эритроцитов, суспензия, крекинг эритроцитов при комнатной температуре1Минуты, и в4°СНиже250gЦентрифугирование3Минут.

8. Высасывайте очищающую жидкость и взвешивайте осадок в основной питательной среде,4°СНиже250gЦентрифугирование3Минуты, повторите этот шаг еще раз.

9. Высасывайте очищающую жидкость и взвешивайте осадок в основной клей. Базовый клей должен храниться на льду, чтобы предотвратить его затвердевание. Этот процесс должен быть осуществлен как можно скорее. Количество используемого основного клея зависит от размера частицы. примерно10，000Клетки должны быть вакцинированы.25 мклБазовый клей внутри.

10. Не разбавляйте клей матрицы слишком сильно (пропорционально> 70%(Объем основного клея/Общий объем), так как это может подавлять правильное образование твердых капель. Разложить клей, содержащий органоиды24Нижняя часть пластины клетки отверстия, каждая капля вокруг центра отверстия30 мклА.

Примечание: После того, как орган - класс повторно подвешен к основному клею, посадочная пластина должна быть выполнена как можно скорее, так как основной клей может застыть в пробирке или всасывающей головке переносчика. Не позволяйте частицам субстрата вступать в контакт со стенкой трубы.

11. Поместить доску37°Cи5%КОДиВ инкубаторе15 - 25Минуты, дайте основному гелю отвердиться.

12. Подготовьте необходимое количество питательных сред для внутрипеченочных желчных раковых органов.

13. После затвердевания субстрата (15 - 25Минуты), открывайте доску и аккуратно добавляйте в каждое отверстие500 мклКультурные среды для внутрипеченочных желчных раковых органов.

Примечание: не добавляйте питательную среду непосредственно к верхней части капли клея матрицы, так как это может повредить застывшую структуру.

14. Поместить доску37℃и5%КОДиВ термостатическом инкубаторе.

15. Каждый раз3 - 4Поменяйте питательную среду один раз в день, тщательно высасывайте питательную среду из отверстия и заменяйте ее свежей подогретой органоидной питательной средой.

16. Тщательно контролируйте состояние роста органов, в идеале, внутрипеченочные желчные раковые органы должны быть7−10 гг.Построено за день.

b) Генетическая культура раковых органов печени человека

1. Оторвать органы путем дутья стволом, промытым смачивающей жидкостью, и переносить суспензию органов и питательных сред в увлажняющую жидкость1.5ЛЕПВ трубке.

2. Голова пистолета, промытая увлажняющей жидкостью, перегружает суспензию суспензии суспензии, отделяя органы от основного клея.

3. 250gцентрифуга при комнатной температуре3 минутыА.

4. Выбросьте очищение, используйте органоидные пищеварительные жидкости или механическое разрушение. Для десорбции клеток, использующих органоидную пищеварительную жидкость, суспензия суспензии в органоидной пищеварительной жидкости, переносчик неоднократно дует вверх и вниз и размещается в37°CИнкубируйте до тех пор, пока органоиды не будут удалены. Использовать головку с фильтром для каждого2Несколько минут назад и вниз.8Подпункт, чтобы помочь диссоциировать органоиды. Тщательное наблюдение за пищеварительным процессом позволяет свести к минимуму время инкубации в органоидных диссоциаторах. В случае механической неисправности,1,5 млэпителиальные органы основная питательная среда суспензия органов средней тяжести. Осторожно используйте пипетку, чтобы извлечь суспензию, повторяющуюся вверх и вниз.30Снова, это поможет пищеварению.

Внимание: не удаляйте больше, чем в органоидных растворах.7Минуты, потому что это может привести к плохому росту или даже разрушению органов - аналогов. По опыту, если речь идет о смеси мелких клеток, можно наблюдать, что из10 - 50Клеточная масса, состоящая из трех клеток, переваривание завершается.

5. После завершения пищеварения используйте1 млОсновную среду эпителиальных органов промывают один раз, а затем при комнатной температуре.250gЦентрифугирование3Минут.

6. Бросьте очищение, используйте соответствующее количество основного клея для осаждения суспензионных органов, после повторного подвешивания помещайте на лед, время повторного подвешивания не превышает30-хЧтобы избежать преждевременного затвердевания основного клея.

Примечание: Степень разбавления основного клея должна быть70%Это обеспечивает структурную стабильность клея матрицы в процессе культивирования.

7. Введите суспензию, смешанную с клеем матрицы и органоидами.48Нижняя часть диафрагмы положительная, избегая контакта суспензии с боковой стенкой диафрагмы, каждое отверстие15-20uLПриблизительно. Примечание: Чтобы предотвратить затвердевание матричного клея при комнатной температуре, этот шаг должен быть завершен как можно скорее.

8. После завершения прививок будут созданы37℃Диоксид углерода в инкубаторе, инкубация15 минутОжидание затвердевания основного клея слева и справа.

9. Подготовка питательных сред для внутрипеченочных желчных раковых органов.

10. После затвердевания матричного клея добавьте приготовленную питательную среду для раковых органов печени человека,48Добавить отверстие на отверстие250 млКультурные среды.

11. поставить48Помещение диафрагмы37℃Культивируется в инкубаторах для культивирования углекислого газа, пока органоиды не потребуют дальнейших экспериментов.

V2.0версия

Время обновления:2025 / 6 / 21