Набор питательных сред для культивирования органов толстой кишки человека Plus (амплификация)

Человеческий колонический органоидный комплект Plus(Расширение)

Комплект питательных сред для органов толстой кишки человекаПлюс(Расширение)

1. описание продукта

Комплект питательных сред для макроорганизмовПлюс(Расширение) [Человеческий колонический органоидный комплект Plus (расширение) ПлюсЭто питательная среда, используемая для расширения органов толстой кишки человека, которые в основном состоят из стволовых клеток толстой кишки и клеток - предшественников толстой кишки. Колоректальные органы воспроизводят характеристики эпителия толстой кишки в организме с точки зрения способности к самовосстановлению и дифференциации, структуры тканей, типов клеток и функций и, следовательно, являются идеальной экстракорпоральной моделью для изучения толстой кишки человека.

2. Информация о продукте

3. Другие собственные реактивы и расходные материалы

4. Инструкции по использованию питательных сред для органов толстой кишки человека (амплификация)

1. Получив органоидную питательную среду, поместите ее4Холодильник при температуре C размораживается.

2. После размораживания питательной среды полностью перемешивается вверх и вниз, в шкафу биобезопасности или на чистом рабочем столе в соответствии с ежедневными потребностями, рекомендуется упаковать10 мл/Труба.

3. После разделки питательная среда должна быть запечатана и храниться в-20℃При использовании можно извлечь разрозненную питательную среду и поместить ее в равновесие комнатной температуры.

5. Создание и передача органов толстой кишки человека

Примечание: Исследования, связанные с исходными материалами человеческих тканей, должны соответствовать всем соответствующим институциональным и правительственным правилам. Прежде чем собирать основные материалы человеческой ткани, необходимо получить информированное согласие всех испытуемых.

а) Создание органов протоэнтероидов

1. Протогенные образцы тканей должны находиться вне тела5 минутВнутри помещается жидкость, содержащая предварительно охлажденную живую ткань (2-8℃В трубке образца образец должен быть покрыт жидкостью для сохранения живой ткани (если образец уже помещен в другой буфер или питательную среду, замените весь раствор предварительно охлажденной жидкостью для сохранения живой ткани). Низкая температура (2~8℃(Перевозка передана в лабораторию.

2. Перед экспериментом вставьте клей.4℃Лед размораживается, а питательная среда удаляется, чтобы установить баланс комнатной температуры. Центробежные трубки, пробирки или пластиковые всасывающие головки, контактирующие с клетками, должны быть очищены от адгезионного увлажняющего раствора, культивируемого органоидами.

3. В чистом рабочем столе образец переносится в чашку Петри для оценки того, состоит ли полученная ткань из эпителия. Если есть жир или мышечная ткань, используйте нож или пинцет под анатомическим микроскопом, чтобы удалить как можно больше этих неэпителиальных компонентов. Если нет жира или мышечной ткани, немедленно перейдите к следующему шагу.

4. Перенос образца ткани на предварительно охлажденный с двойным сопротивлениемДПБСВ чашке Петри, кишечная полость вверх, одна рука использует один конец ткани кишечника, другая рука использует кусочки, чтобы мягко соскребать слизь или остатки экскрементов на поверхности кишечника, а затем поместить толстую кишку в новую ткань с двойным сопротивлениемДПБСОчистка в чашке Петри2 - 3Восемь пунктов. После очистки кишечник измельчается до2мм*5ммРазмер, затем перенесен50 млСильное сотрясение в центрифуге30s(Вертикальное сотрясение.20Подсчитайте один раз, около1сТрижды.)Бросить чистку, повторить3Восемь пунктов.

5. Пищеварение: присоединение30 мл的ДПБСДобавление в раствор.300 мкл 0,5 м ЭДТАДоЭДТАКонечная концентрация составляет5 ММБ4℃На качалке,80 об/минПищеварение20~30мин(В зависимости от количества выборки, может быть в пищеварении20В течение минуты после смешивания в зеркале наблюдалось пищеварение, и следующая операция могла быть выполнена, если была замечена полная структура гнезда).

6. Очистка: После завершения пищеварения, статическое ожидание осаждения кишечного сегмента, отбросить очищение. Добавить предварительное охлаждениеДПБСЛегко и равномерно, после покоя отбросить очищение, повторение2Снова удалитьЭДТАА.

7. Тяжелая подвеска: присоединение30 млПредварительно холодное содержание0,1% БСА的ДПБСВихрь10-хВзять чистку100 мкмФильтр сетки, сбор тканевой суспензии через сетку фильтра, повторный сбор2Восемь пунктов.

8. Сбор:300gЦентробежная сила4℃Центрифугирование3 минутыА.

9. Высасывайте очищающую жидкость и подвешивайте осадочный вес к основной питательной среде эпителиальных органов, получая суспензию для скрытого подсчета.

10. 300gЦентробежная сила4℃Центрифугирование3 минутыВыбросьте очищающую жидкость, в соответствии с потребностями культуры, чтобы получить соответствующее количество клеточного осаждения, чтобы добавить основной клей (> 70%И смешивать на льду (примечание: движение смешивания и дутья должно быть мягким, не создавая большого количества пузырьков, смешивание при комнатной температуре должно контролироваться15В секундах) после смешивания помещается на лед. Примечание: Основной клей должен храниться на льду, чтобы предотвратить его затвердевание. Этот процесс должен быть осуществлен как можно скорее. примерно50В склепе нужно делать прививки.25 мклБазовый клей внутри. Не разбавляйте клей матрицы слишком сильно (пропорционально> 70%(Объем основного клея/Общий объем), так как это может подавлять правильное образование твердых капель.

11. Смешанные точки суспензии матричного клея и клеток вводятся в нижнюю часть пластины питательного отверстия, слегка выравнивая суспензию с помощью головки пистолета, чтобы избежать контакта суспензии с боковой стенкой пластины отверстия. (Рекомендуется:96Вакцинация диафрагмой3~10мкл/Пещера,48Вакцинация диафрагмой10~20 мкл/Пещера,24Вакцинация диафрагмой20~30мкл/Гнездо).

12. Примечание: После того, как орган - класс повторно подвешен к основному клею, посадочная пластина должна быть выполнена как можно скорее, так как основной клей может застыть в пробирке или всасывающей головке переносчика.

13. Поместить доску37℃и5%КОДиВ инкубаторе15 - 25Минуты, дайте основной клей застыть.

14. После того, как основной клей затвердевает, медленно добавляйте к стенке сбалансированную при комнатной температуре среду для культивирования органов, чтобы избежать разрушения застывшей структуры. (Рекомендуется:96Добавление диафрагмы100 мкл/Пещера,48Добавление диафрагмы250 мкл/Пещера,24Добавление диафрагмы500 мкл/Гнездо). Примечание: Не добавляйте питательную среду непосредственно к верхней части капли клея матрицы, так как это может повредить застывшую структуру.

15. Поместить доску37℃и5%КОДиВ термостатическом инкубаторе.

16. Каждый раз2 - 3Поменяйте питательную среду один раз в день, тщательно высасывайте питательную среду из отверстия и добавляйте свежую органоидную среду с балансом комнатной температуры.

17. Тщательно следить за состоянием организма.

b) Традиционная культура органов толстой кишки человека

1. Подозрительные органы культивируются до диаметра600 мкмБольшие часы (или когда чернение больше не увеличивается) могут быть проведены органоидная передача (каждое поколение)1Неделя). Следующие операции с клеточным контактом требуют увлажнения и промывки:

2. Выбросьте старую питательную среду, добавьте среду, основанную на равнообъемном эпителиальном органе, аккуратно соскребайте (или дуйте) основной клей и органоидную смесь с помощью клеточного скребка или всасывающей головки пипетки и переместите ее в1,5 млЦентробежные трубки (максимальная концентрация на трубку)2 - 3Пористые органы, избегающие избыточного объема и низкой эффективности пищеварения)5 ~ 10Подпункт, отделяя органоиды от основного клея,300gЦентрифугирование3Минут.

3. Удалите жидкость и добавьте.5В два раза больше, чем объем основного клея и органоидной смеси, органоидной пищеварительной жидкости, которая перемешивается и помещается37℃переваривание в инкубаторе3Минут. Вынимай, дуй, смешивай, бери.10 мклСмешанная жидкость проверяет пищеварение300 мкмСлева и слева сгустки органов.

ПРИМЕЧАНИЕ: Для повторного осаждения необходимо контролировать интенсивность и частоту дутья, то есть сгустки органов контролируются размером300 мкм左右。

4. После завершения пищеварения добавлять5Удвоить объем эпителиальных органов на основе питательных сред, мягко перемешать, чтобы остановить пищеварительную реакцию, а затем250gЦентрифугирование3Минут.

5. Высасывайте очищающую жидкость и промывайте ее питательной средой на основе эпителиальных органов.2Для удаления остатков пищеварительной жидкости. Подчистка может объединить органы в одну и ту же центробежную трубку.

6. После очистки клетки в центробежном осаждении передаются в культуру, добавляя клей матрицы в осаждение клеток (> 70%И смешивать на льду (обратите внимание, что движение смешивания и дутья должно быть мягким, не создавая большого количества пузырьков, смешивание при комнатной температуре должно контролироваться15В секундах) после смешивания помещается на лед. Примечание: Степень разбавления основного клея должна быть70%Это обеспечивает структурную стабильность клея матрицы в процессе культивирования.

7. Смешанные точки суспензии матричного клея и клеток вводятся в нижнюю часть пластины питательного отверстия, слегка выравнивая суспензию с помощью головки пистолета, чтобы избежать контакта суспензии с боковой стенкой пластины отверстия. (Рекомендуется:96Вакцинация диафрагмой3~10мкл/Пещера,48Вакцинация диафрагмой10~20 мкл/Пещера,24Вакцинация диафрагмой20~30мкл/Гнездо). примерно50Вакцинация органоидов в25 мклБазовый клей внутри. Примечание: Чтобы предотвратить затвердевание матричного клея при комнатной температуре, этот шаг должен быть завершен как можно скорее.

8. Поместить доску37℃и5%КОДиВ инкубаторе15 - 25Минуты, дайте основной клей застыть.

9. После того, как основной клей затвердевает, медленно добавляйте к стенке сбалансированную при комнатной температуре среду для культивирования органов, чтобы избежать разрушения застывшей структуры. (Рекомендуется:96Добавление диафрагмы100 мкл/Пещера,48Добавление диафрагмы250 мкл/Пещера,24Добавление диафрагмы500 мкл/Гнездо). Примечание: Не добавляйте питательную среду непосредственно к верхней части капли клея матрицы, так как это может повредить застывшую структуру.

10. Поместить доску37℃и5%КОДиВ термостатическом инкубаторе.

11. Каждый раз2 - 3Поменяйте питательную среду один раз в день, тщательно высасывайте питательную среду из отверстия и добавляйте свежую органоидную среду с балансом комнатной температуры.

12. Тщательно контролируйте состояние роста органоидов до тех пор, пока они не потребуют следующего эксперимента.

V2.0версия

Время обновления:2025 / 6 / 12