Комплект питательных сред для макроорганизмов

Комплект органоидов человеческого кишечника

Комплект питательных сред для органов тонкой кишки человека

1. описание продукта

Наборы для культивирования органов тонкой кишки человека (Комплект органоидов человеческого кишечникаЭто набор питательных сред для органов тонкой кишки, предназначенный для создания и поддержания источника взрослых стволовых клеток в кишечнике человека, который обеспечивает полный набор реагентов для отделения от гнездовой кишки, регенерации гнезд, анализа активности гнезда и культивирования. Может в значительной степени поддерживать активность гнезда тонкой кишки и повышать скорость образования органов тонкой кишки, культивируемые органы тонкой кишки человека состоят в основном из стволовых клеток тонкой кишки, быстрорастущих клеток, клеток кишечного поглощения, клеток Панци, чашечных клеток и небольшого количества эндокринных клеток кишечника, с точки зрения новых способностей к самосовершенствованию, структуры, типа клеток и функций, органы тонкой кишки человека могут частично воспроизводить характеристики эпителия кишечника человека и, следовательно, являются идеальной экстракорпоральной моделью для изучения состояния кишечника и механизмов заболевания.

2. Информация о продукте

3. Другие материалы и реактивы

4. Подготовка питательных сред для органов тонкой кишки человека

В стерильном сверхчистом рабочем столе производится питательная среда для органов тонкой кишки человека. Приготовить10 млВ качестве примера можно привести питательную среду для органов тонкой кишки человека, которая может быть соответствующим образом скорректирована, если требуемое количество отличается.

1. Коэффициент размораживания органов тонкой кишки человека на льдуВ(50x)Культурные факторы органов тонкой кишки человекаC(250x)Культурные факторы органов тонкой кишки человекаD(250x)А.

Примечание: после размораживания рекомендуется вводить культурный фактор органов тонкой кишки человекаВ(50x)Факторы культивирования органов тонкой кишки человекаC(250x). После раздельной сборки сохранить и получить, чтобы избежать повторного замораживания и таяния.

2. После размораживания питательной среды полностью перемешивается вверх и вниз, в шкафу биобезопасности или на чистом рабочем столе в соответствии с ежедневными потребностями, рекомендуется упаковать10 мл/Труба.

3. После разделки питательная среда должна быть запечатана и храниться в-20℃При использовании можно извлечь разрозненную питательную среду и поместить ее в равновесие комнатной температуры.

Обратите внимание: питательные среды для органов тонкой кишки человека после приготовления могут быть2-8°CХранение, рекомендуется использовать в течение двух недель. Кроме того, факторы культивирования органов тонкой кишки человекаВ(50x)Содержит бактериальные и грибковые антибиотики.(50x)А.

5. Создание и передача органов тонкой кишки человека

Примечание: Исследования, связанные с основными материалами тканей человека, должны соответствовать всем соответствующим институциональным и правительственным правилам. Прежде чем собирать основные материалы человеческой ткани, необходимо получить информированное согласие всех испытуемых.

а) Создание протоэнтероидных органов

1. Отбор проб: использование центрифуг для сбора тканей протокишечника в ледяном протекторе прототканей, а также для хранения образцов тканей4°СДо начала разделения.

2. Очистка: перенос образцов тканей на предварительно охлажденныеДПБСВ чашке Петри буферной жидкости полость кишечника поднимается вверх, одна рука удерживает один конец ткани кишечника, а другая рука мягко соскребает поверхностный кишечный пух полости кишечника кусочком, пока кишечный пух не будет очищен, кишечная ткань помещается в новое содержаниеДПБСОчистка в чашке Петри, повторная очистка2Восемь пунктов. После очистки тонкий кишечник2 ммШирина, перенос в новую чашку Петри, используйтеДПБСмыть2Всякий раз.

3. Пищеварение: перенос очищенного кишечника на содержащийся5 мм/л ЭДТАПредварительное охлаждениеДПБССреднее пищеварение, размещение4℃Или вылупиться из разбитого льда.20~30минПищеварение20 минутЛевая и правая части могут быть мягко продуваны переносчиком кишечника, взяты под микроскопом очистки для наблюдения, после того, как в верхней очистке появится полное гнездо, чтобы прекратить пищеварение, если нет гнезда, чтобы правильно продлить время пищеварения.

4. Очистка: после завершения пищеварения фрагменты ткани переносятся на новое содержаниеДПБСОчистка в чашке Петри, повторение2Снова удалитьЭДТАА.

5. Тяжелая подвеска: используется5 млМиграционные трубы в предварительном охлаждении.0,1% БСА的ДПБСПосуда или50 млВ центробежной трубке вдуваются, повторно взвинчиваются фрагменты ткани, так что ткань многократно проходит через кончик пипетки пипетки, чтобы создать механическое сдвиговое усилие, которое отделяет гнездо от фундамента, взять часть суспензии, когда вы можете увидеть большое количество скрытой структуры образца, остановить дутье и провести взвешивание ткани после дутья70 мкмФильтр сетки.

6. Сбор: сбор тканевой суспензии через фильтрующую сеть,300gЦентробежная сила4℃Центрифугирование3 минутыА.

7. Счет: отбросить очистить, использовать1mL0.1%БСА的ДПБСосаждение тяжелой подвесной ткани, взятие20 мклсуспензия для зеркального обследования и подсчета гнезд, после подсчета, чтобы получить суспензию, содержащую необходимое количество гнезд,300gЦентробежная сила4℃Центрифугирование3 минутыВыбросить после очистки на лед.

8. При осаждении суспензионной ткани с соответствующим количеством основного клея рекомендуемая плотность суспензии для каждого10 мклБазовая суспензия содержит70до100Скрытое гнездо, висящее на льду, не более30-хЧтобы избежать преждевременного затвердевания основного клея.

Примечание: Степень разбавления основного клея должна быть70%Это обеспечивает структурную стабильность клея матрицы в процессе культивирования.

9. Введите смесь клея матрицы и тканевых клеток в суспензию.24Нижняя часть диафрагмы прямо, каждое отверстие30 мклЛево и налево избегайте контакта суспензии с боковой стенкой пластины отверстия.10.После завершения прививок будут созданы37℃Диоксид углерода в инкубаторе, инкубация30 минутОжидание затвердевания основного клея слева и справа.

10. После затвердевания основного клея медленно добавляйте приготовленные питательные среды для органов тонкой кишки человека вдоль стенки,24Каждые отверстия500 мклИзбегайте разрушения застывших структур.

11. поставить24Помещение диафрагмы37℃Культивирование в инкубаторах для выращивания углекислого газа.

12. каждый2 - 3Поменяйте питательную среду один раз в день, и при замене среды следует избегать повреждения клея матрицы. Тщательно следить за состоянием роста органоидов, в идеале органы тонкой кишки человека должны находиться в5до7Построено за день.

b) Традиционная культура органов тонкой кишки человека

1. Обращайтесь с органами тонкой кишки, выращенными до диаметра200~500мкмБольшие часы (или когда чернение больше не увеличивается), может быть проведена передача органов тонкой кишки человека (каждое поколение5Дней около). Оторвать органы путем дутья стволом, промытым смачивающей жидкостью, и переносить органы тонкой кишки и суспензию питательной среды в увлажняющую жидкость1.5ЛЕПВ трубке.

2. Тяжелая суспензия суспензии суспензии, несколько раз вдувается головой пистолета, промытой смачивающей жидкостью (5 ~ 10Подпункт) отделяет органы тонкой кишки от основного клея и дует,300gЦентрифугирование3 минутыА.

3. Бросить Чхон, присоединиться1 млБазовая питательная среда снова бьет по органоидам5 ~ 10Во - вторых, взять небольшое количество суспензии, чтобы наблюдать за состоянием органов типа:

1) Если органоиды рассеяны на куски, можно выбрать механическое дутье дисперсионных органов.300gЦентрифугирование3 минутыПосле центрифугированияПБСЧистка основной среды2Восемь пунктов.

2) Если органы более полные300gЦентрифугирование3 минутыПосле, отбросить, присоединиться5В два раза больше объема органоидного пищеварительного раствора, чем смесь основного клея и органов тонкой кишки человека.37℃переваривание в инкубаторе2 минутыПРИСОЕДИНЕНИЕ5В два раза больше, чем объем пищеварительной жидкости, основная питательная среда прекращает пищеварение. После центрифугированияПБСЧистка основной среды2Восемь пунктов.

4. После повторной суспензии с соответствующим количеством клея матрицы органы осаждаются, после повторной суспензии помещаются на лед, время повторной суспензии не превышает30-хЧтобы избежать преждевременного затвердевания основного клея.

Примечание: Степень разбавления основного клея должна быть70%Это обеспечивает структурную стабильность клея матрицы в процессе культивирования.

5. Введите суспензию, смешанную с клеем матрицы и органоидами.24Нижняя часть диафрагмы положительная, избегая контакта суспензии с боковой стенкой диафрагмы, каждое отверстие30 мкл左右。

Примечание: Чтобы предотвратить затвердевание матричного клея при комнатной температуре, этот шаг должен быть завершен как можно скорее.

6. После завершения прививок будут созданы37℃Диоксид углерода в инкубаторе, инкубация15 минутПосле затвердевания основной клей извлекается влево и вправо.

7. Составление питательных сред для органов тонкой кишки человека.

8. После затвердевания матричного клея добавьте предварительно разогретую питательную среду для органов тонкой кишки человека вдоль стенки отверстия,24Каждые отверстия500 мклА.

9. Поместите клеточную культурную пластину37℃Культивирование в инкубаторах, пристальное наблюдение за состоянием роста органов тонкой кишки человека, каждый3Небо фотографируется под перевернутым микроскопом, записывая форму и распределение органов тонкой кишки человека в нескольких горизонтах.

V2.0версия

Время обновления:2025 / 6 / 17