Набор для тестирования ELISA мускатной кислоты у мышей

Набор для тестирования ELISA мускатной кислоты у мышей

инструкция по эксплуатации

Принцип обнаружения

Тест на иммуноадсорбцию с использованием двухступенчатого сэндвич - метода с двойным антителом (Элиса).Предварительно завернутьбыть肉豆蔻酸（Миристикацид)Пакеты с антителами помещаются в микропоры, последовательно добавляя образцы, стандартные продукты,Маркеры HRP обнаруживают антитела, размножаются при температуре и стираются. Используя субстрат TMB, TMB преобразуется в синий цвет под катализатором пероксидазы и в окончательный желтый под действием кислоты. Темные цвета и образцы肉豆蔻酸（Миристикацид)БПоложительная корреляция. Используйте энзимометр.При длине волны 450 нм измеряется поглощение света (OD), рассчитывается концентрация проб.

Методы сбора, обработки и хранения образцов

Сыворотка крови: Используя пробирки, не содержащие термогенов и эндотоксинов, во время операции избегая каких - либо клеточных стимуляций, после сбора крови 3000 вращений центрифуги в течение 10 минут быстро и тщательно отделяют сыворотку от эритроцитов.

2. Плазма крови: EDTA, лимонат или гепарин - антикоагулянт. 3000 поворотов центрифуги на 30 минут.

Клеточная жидкость: 3000 вращающихся центрифуг в течение 10 минут для удаления частиц и полимеров.

4. Организационная симметрия: Добавление ткани в соответствующее количество физиологического раствора для измельчения. 3000 оборотов центрифуги в течение 10 минут.

5.Сохранение: Если образец не был своевременно проверен после сбора, пожалуйста, упаковывайте его по одноразовому использованию, замораживайте на 20°C, избегайте повторного замораживания и таяния, размораживайте при комнатной температуре и убедитесь, что образец равномерно заполнен для разложения и замораживания.

Собственное имущество

1. Ферменты (450 нм)

2. Высокоточный пробоотборник и головка пистолета:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. Термокамера 37°C

Оперативные меры предосторожности

1. Реактор хранится в2 - 8°C, используя температурный баланс передней камеры в течение 20 минут. Концентрированная моющая жидкость, извлеченная из холодильника, кристаллизуется, что является нормальным явлением, и нагрев водяной ванны растворяет кристаллы, прежде чем использовать их.

2. Пластинки, которые не использовались в эксперименте, должны быть немедленно помещены обратно в самозапечатанный мешок и запечатаны (сухие при низких температурах) для сохранения.

3. Концентрация являетсяСтандарт S0 0 может считаться отрицательным контрастом или пустым; В соответствии с инструкцией образец был разбавлен в 5 раз, и конечный результат был умножен на 5, чтобы получить фактическую концентрацию образца.

4. Тщательно следуйте времени, количеству жидкости и порядку, указанному в инструкции.

5. Все жидкие компоненты полностью раскачиваются перед использованием.

Состав комплекта

Примечание: Стандартная продукция (S0 - S5) Концентрация последовательноДля:0,50、100、200、400А800 пг/мл

Подготовка реагентов

Разбавление амортизатора стирки 20×: дистиллированная вода разбавляется 1: 20, т.е. 1 часть амортизатора стирки 20× плюс 19 частей дистиллированной воды.

Способ стирки листов

1. Ручная стирка пластин: сбрасывание жидкости в отверстие, заполнение каждого отверстия стиральной жидкостью, статическое размещениеПосле 1 минуты выбрасывайте жидкость в отверстие, высушивайте ее на впитывающей бумаге, так что промывайте пластину 5 раз.

2. Автоматизированная стиральная машина: впрыскивание жидкости в каждое отверстие350μL， Замочить 1 мин, вымыть доску 5 раз.

Шаг действия

1. Равновесие от комнатной температурыПосле 20 мин из алюминиевого фольгового мешка извлекается необходимая пластина, а остальная пластина запечатана обратно на 4 ° C с помощью самогерметичного мешка.

2. Установка стандартных отверстий и пробоотборных отверстий, стандартных отверстий с различными концентрациями стандартных изделий50 мкл;

3. Пробные отверстия с пробами.10μL， Добавить разбавленную жидкость 40 мкл; Пустые отверстия не добавляются.

4. В дополнение к пустым отверстиям в каждое отверстие стандартного отверстия и отверстие образца добавляется пероксидаза хрена (HRP) маркированные антитела для обнаружения 100 мкл, отверстие реакции запечатано мембраной, а водяная ванна или термостат с температурой 37°C размножаются на 60 мин.

5. Выбросить жидкость, высушить на всасывающей бумаге, заполнить каждое отверстие моющим раствором1min， Выбросите моющую жидкость, высушите на всасывающей бумаге, так что повторите стирку пластины 5 раз (также можно использовать стиральную пластину).

6. Добавление субстрата в каждое отверстиеA, B 50 мкл каждый, 37 °C Светоизоляционная инкубация 15 мин.

7. Добавьте в каждое отверстие жидкость.ОД для каждого отверстия измеряется на длине волны 450 нм в пределах 50 мкл, 15 мин.

Результаты

Нарисовать стандартную кривую: вВ рабочем листе Excel в качестве горизонтальных координат используется стандартная концентрация продукта, в соответствии с значением OD в качестве вертикальных координат, рисуется линейная регрессионная кривая стандартного продукта, а значения концентрации каждого образца рассчитываются по криволинейному уравнению.
Набор для тестирования ELISA мускатной кислоты у мышей