NCI - H522 (клетки немелкоклеточного рака легких человека)

NCI - H522 (клетки немелкоклеточного рака легких человека)

Торговая марка: Шанхайская научно - исследовательская биология
Количество клеток: 1x10 ^ 6 cells
Активность клеток 95% (Viability by Trypan Blue Exclusion)
Название клетки:NCI - H522 (клетки немелкоклеточного рака легких человека)

Род происхождения: человек
Пол Возраст: мужчины, 58 лет
Источник ткани: легкие
Характеристики роста: рост на стенках
Клеточная форма: эпителий
Спецификация клетки: 1 x 106cells / T25 или 1 ml замороженная трубка
Условия культивирования: RPMI - 1640 + 10% fetal bovine serum (FBS)
37 ℃, 5% СО2
Условия замораживания: 90% FBS + 10% DMSO
Метод передачи: от 1: 3 до 1: 6 передачи, 1 - 2 дня передачи 1 поколения

Клеточная культура
Перевозка сухого льда: сразу после получения клетки необходимо перейти на хранение жидким азотом, или краткосрочное замораживание в холодильнике при температуре 80°C, или прямое восстановление.
Перевозка при комнатной температуре: сразу же после получения клетки, пожалуйста, удалите бутылку с культурой клетки из коробки и следуйте следующим действиям для передачи культуры
Клеточная передача: плотность клеток до 80 - 90%, можно проводить культуру передачи
Процедуры работы клеток в бутылке
Для клеток, культивируемых стенками, перед отправкой мы заполняем питательную среду всей бутылкой, чтобы уменьшить выпадение клеток, прикрепленных к стенке, во время транспортировки продукта.
1. После получения клетки обратите внимание на наблюдение, есть ли загрязнение. Поместите питательную бутылку под перевернутый микроскоп, чтобы тщательно проверить, является ли она мутной или бактериальной. Поскольку во время транспортировки есть удары, и некоторые клетки также чувствительны к изменениям температуры, могут быть некоторые клетки, которые падают и плавают, эти клетки все еще живые клетки, не выбрасывайте, могут быть центробежным обогащением для последующего использования.
Для клеток, прикрепленных к стенке, в среде шкафа биобезопасности вакуумным насосом удаляется избыток питательной среды в питательной бутылке до остаточного 5 - 8 мл, а затем в соответствии с питательной средой выбирается подходящее содержание CO2 в инкубаторе с постоянной температурой 37°C для культивирования, отвинчивается крышка бутылки. Если клетки уже покрыты бутылками, передайте их немедленно.
Для взвешенных клеток, в среде шкафа биобезопасности, переносить клетки из бутылки с культурой в центрифужную трубку, 150 г центрифуги в течение 5 минут, после удаления, продувать клетки 5 мл питательной среды, переносить в новую бутылку с культурой, а затем помещать в термостат с соответствующим содержанием CO2 37°C для культивирования.
Процедуры замораживания клеток
Примечание: Чтобы обеспечить высокую живучесть клеток, размораживайте культуры сразу после получения продукта.
1. Поместите охлаждающую трубку в водяную ванну с температурой 37°C, чтобы качаться взад и вперед и быстро оттаивать. Чтобы избежать загрязнения, убедитесь, что отверстие для замерзания находится над поверхностью воды. Оттепель требуется быстро, около 1 минуты.
2. Как только жидкость в трубке замораживания расплавляется, немедленно извлекается, поверхность трубки замораживания вытирается с помощью спиртового распыления. Начиная с этого шага, последующая операция должна быть завершена в шкафу биобезопасности.
3. Переместить жидкость из замороженной трубки в центрифужную трубку, содержащую 5 мл законченной среды, 150 г центрифуги в течение 5 минут и удалить ее вакуумным насосом.
Восстановление взвешенных клеток с использованием питательных сред и их перенос в новые бутылки. Чтобы обеспечить выживаемость при восстановлении клеток, используйте питательную среду после подогрева водяной ванны при температуре 37°C.
Клетки культивируются в инкубаторах с постоянной температурой 37°C, содержащих подходящий CO2.
Стенная клеточная культура
1. Высасывайте и выбрасывайте питательную среду в бутылке для культивирования и добавляйте увлажнитель PBS один раз.
Добавьте 1 мл 0.25 (w / v) раствор Trypsin - EDTA и поместите его в инкубатор при температуре 37°C, пока клетка не оторвется от стенки и не отделится. Этот процесс занимает около 3 - 5 минут.
Добавьте 2 мл полной питательной среды, чтобы нейтрализовать протеазу поджелудочной железы, и слегка вдувайте, чтобы сдуть клетки с поверхности бутылки и рассеять клетки.
Собирайте клеточную суспензию в 15 мл центробежной трубки, 150 г центрифуги в течение 5 минут и удаляйте ее вакуумным насосом. Возьмите достаточное количество питательной среды, чтобы перегрузить клетки и переместить их в новую культурную бутылку.
Передача суспензионных клеток может быть основана на следующих методах:
I. Метод прямой передачи
1. До тех пор, пока взвешенные клетки не вырастут до 80 - 90% (клеточная суспензия становится желтой), они могут передаваться;
2. Высасывание клеточной суспензии соломинкой 1 / 2 ~ 1 / 3;
3. Добавьте достаточное количество свежих питательных сред и продолжайте культивировать.
II. Центробежная передача (в случае обнаружения фрагментов клеток)
Перенос клеточной суспензии в центрифужную трубку;
2.150 г центрифуг 5 мин, сбрасывание верхней жидкости;
3. Использование свежих питательных сред для тяжелой суспензии клеток;
4. Соломинка поглощает соответствующее количество клеточной суспензии, загружает в новую бутылку для культивирования, а затем добавляет соответствующее количество свежей среды для продолжения культивирования.
Операция замораживания клеток
1.1000 rpm центрифуг удаляется в течение 5 минут. Добавьте 1 мл сывороточной суспензии, добавьте сыворотку и DMSO в соответствии с количеством клеток, слегка перемешайте, конечная концентрация DMSO 10%, плотность клеток не менее 1 x 106 / мл, каждая криогенная трубка замораживает 1 мл клеточной суспензии, обратите внимание, что криогенная трубка хорошо маркирована;
Поместите трубку замораживания в программный охладитель, поместите ее в холодильник - 80°C и переведите в хранилище жидкого азота не менее чем через 2 часа

Некоторые из этих клеток являются следующими: